范賢林　芮昌輝

摘要以蟲酰25～80μg／mL汰選棉鈴蟲種群26代，用兩種生物測定方法對汰選后的棉鈴蟲種群測定其抗藥性。以浸葉法測定的LC₅₀值汰選前為33．816 8μg／mL，汰選24代后達(dá)到914．181 3μg／mL，抗性指數(shù)為27．03倍，與對照種群的LC₅₀102．4274μg／mL比較，校正抗性指數(shù)為8．93倍；用飼料混合法測定的LC₅₀值汰選前為73．8416μg／mL，汰選24代后達(dá)到833．0278μg／mL，抗性指數(shù)為11．26倍，與對照種群的LC₅₀105．889 9μg／mL比較，校正抗性指數(shù)為7．87倍，表明棉鈴蟲汰選種群對蟲酰肼的抗性水平呈現(xiàn)上升趨勢。

關(guān)鍵詞有害生物化學(xué)防治；蟲酰肼；棉鈴蟲；抗藥性汰選

中圖分類號S 481．4

昆蟲生長調(diào)節(jié)劑殺蟲作用方式獨特，是一類具有良好選擇性的新型殺蟲劑。由于這類藥劑主要是通過擾亂昆蟲正常生長發(fā)育而使昆蟲致死，一般認(rèn)為昆蟲不易對其產(chǎn)生抗藥性，與傳統(tǒng)殺蟲藥劑也不容易產(chǎn)生交互抗性。然而事實證明，害蟲具有克服任何殺蟲劑的能力，對昆蟲生長調(diào)節(jié)劑也不例外。

蟲酰肼(tebufenozide)足昆蟲生長調(diào)節(jié)劑中的重要品種之一，其殺蟲作用機(jī)理是模擬昆蟲蛻皮激素功能，在不該蛻皮時產(chǎn)生蛻皮反應(yīng)，由于不正常蛻皮而導(dǎo)致幼蟲脫水、饑餓而死亡。本試驗通過棉鈴蟲(Helicoverpa armzg'era Htibner)對蟲酰肼的抗藥性汰選，以期了解害蟲對蟲酰肼抗藥性的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律，為該類藥劑的科學(xué)合理利用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1. 1供試蟲源

1998年6月下旬采自河北、河南和山東省日個縣市的棉鈴蟲在室內(nèi)飼養(yǎng)3年供試。

1. 2供試藥劑

20％蟲酰肼懸浮劑(tebufenozide，米滿，美國羅門哈斯公司產(chǎn)品)。

1.3汰選方法

將20％蟲酰肼懸浮劑用水稀釋至一定濃度，將油菜葉用清水洗凈晾干后，浸入藥液中搖晃10s取出，自然晾干，放人底部加有消毒濾紙的培養(yǎng)皿中，再將棉鈴蟲初孵幼蟲(孵化12 h以內(nèi)未取食)加入浸過藥液的油菜葉上，每皿200頭，取食2～3 d后，將活蟲移人人工飼料中繼續(xù)飼養(yǎng)至下一代再進(jìn)行汰選。汰選過程中，視抗性發(fā)展情況逐漸提高藥劑濃度，考慮到用該殺蟲劑汰選之后存在殺蟲作用的后效應(yīng)，因此以汰選后幼蟲至化蛹的校正死亡率作為汰選強(qiáng)度的參考指標(biāo)。每代汰選2 000—3 000頭，分別計算汰選期內(nèi)幼蟲的死亡率、化蛹率及羽化率。棉鈴蟲飼養(yǎng)方法參照范賢林等方法。

1．4抗性水平測定

汰選前用飼料混合法和浸葉法分別測定蟲酰肼對棉鈴蟲種群未汰選時的毒力，在汰選5—26代期間，每汰選4—5代分別用上述兩種方法進(jìn)行測定，并同時測定同期飼養(yǎng)的未汰選的對照種群。

1.4．1飼料混合法

將蟲酰肼用水稀釋成6個系列濃度與半固體人工飼料分別均勻混合，加入直徑1．5 cm、深1．7 cm的24孔試驗盒中，每孔1 mL，加蓋后備用。選擇棉鈴蟲2齡中期(4日齡)幼蟲，接入試驗盒中，用不加藥劑的飼料作為空白對照，每孔1頭，加保險膜并加盒蓋，用皮筋扎緊。每濃度重復(fù)3～4次，每次測定幼蟲500600頭。處理后將實驗盒放人溫度(27±1)℃、光照強(qiáng)度為2 000～3 000lx、光周期為L／D＝14 h//10 h、相對濕度80％～90％的恒溫培養(yǎng)箱中，取食72 h后，檢查測定試蟲死亡數(shù)。

1.4．2浸葉法

將蟲酰肼用水稀釋成6～7個系列濃度的藥液，將新鮮油菜葉片清洗晾干后，用打孔器打成圓片分別浸入各個濃度的藥液中，搖晃10 s后取出自然晾干，分別加入24孔試驗盒中，每孔加入棉鈴蟲2齡幼蟲1頭，同時用不浸藥劑的菜葉作為對照處理。重復(fù)次數(shù)比飼料混合法增加1倍，加保鮮膜并加蓋后，放人培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)條件同飼料混合法相同，72 h后檢查各處理的幼蟲死亡數(shù)。

以上兩方法的幼蟲死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)：用撥針輕觸蟲體完全不動者為死亡。用幾率值分析法計算毒力回歸線及LC₅₀值，抗性指數(shù)(resistantratio，RR)為汰選后與汰選前LC₅₀值的比值，校正抗性指數(shù)為汰選種群與同期測定的對照種群LC₅₀值的比值。

2試驗結(jié)果

2．1棉鈴蟲對蟲酰肼抗藥性汰選及其后期發(fā)育情況

經(jīng)過預(yù)備試驗，確定最初汰選濃度為25μg／mL，汰選時間為2d。汰選3代后，取食時間由2d增加為3d。從第4代以后，汰選時間均為3 d，同時每汰選幾代后就增加汰選濃度，在每代汰選后，幼蟲死亡率基本保持在50％～70％的汰選壓下，至26代時濃度已增加到80μg／mL。表1結(jié)果表明，該種群對蟲酰肼的敏感性在逐漸下降。

經(jīng)蟲酰肼汰選，對棉鈴蟲后期發(fā)育的影響主要表現(xiàn)在化蛹率。試驗結(jié)果顯示，存活幼蟲的化蛹率較低，各代化蛹率僅為20％～50％，而同期飼養(yǎng)的對照種群的化蛹率為75％～90％，前者明顯低于后者。但對蛹的羽化率影響較小，基本保持在60％～90％，而且隨著汰選次數(shù)的增加，健康成蟲的羽化率從第1代的57．8％到第26代的96．0％，呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(見表1)。

2．2棉鈴蟲汰選種群對蟲酰肼的抗性水平測定

用浸葉法測定棉鈴蟲汰選種群，在汰選5、10、19、24代后與未汰選時的測定結(jié)果比較，抗性指數(shù)分別為2．26、14．06、25．24、27．03倍。與同期測定的對照種群測定結(jié)果比較，校正抗性指數(shù)分別為2，21、4．12、6．55、8．93倍(表2)。

采用飼料混合法的測定結(jié)果見圖1。對汰選8、12、16、20代和24代的種群進(jìn)行測定，LC₅₀值由汰選前的74μ／mL，至汰選24代后達(dá)到833μg／mL。后者與前者比較抗性指數(shù)為11．26倍；與同期測定的對照種群的LC₅₀106μg／mL比較，校正抗性指數(shù)為7．87倍(圖1)。

以上兩種測定方法對棉鈴蟲汰選種群的測定結(jié)果均表明，連續(xù)的選擇壓力，使棉鈴蟲對蟲酰肼已產(chǎn)生了一定抗性適應(yīng)，表現(xiàn)出對蟲酰肼的敏感性明顯降低，繼續(xù)選擇將會使該棉鈴蟲種群抗藥性不斷升高。

3結(jié)論與討論

試驗表明，用蟲酰肼汰選棉鈴蟲存在后效應(yīng)，除汰選期間有50％～60％的死亡率外，幼蟲的化蛹率也明顯降低，對于正常蛹的羽化率沒有較大影響。因此在蟲酰肼實際應(yīng)用十，于棉鈴蟲低齡幼蟲階段及時把握防治時機(jī)，不僅可以大量殺滅害蟲，還可利用藥劑的后效應(yīng)減少幼蟲的正?；剂?，從而大幅度降低下代的種群數(shù)量。

本試驗針對蟲酰肼主要是胃毒作用的特點，采用兩種方法進(jìn)行抗性水平測定。其中浸葉法較接近于田間防治方法，有利于反映田間實際狀況。不利方面是，植物葉片受季節(jié)、生長部位和新鮮程度等因素影響，對試驗結(jié)果的穩(wěn)定性有一定影響。而飼料混合法通過對各個環(huán)節(jié)的嚴(yán)格操作，降低了干擾因素的影響，得到的結(jié)果重復(fù)性好。通過兩種試驗方法相互驗證均取得相似的結(jié)果，即汰選種群對蟲酰肼已經(jīng)出現(xiàn)敏感性明顯降低趨勢。

昆蟲生長調(diào)節(jié)劑由于其高選擇性特點，可在害蟲綜合防治中發(fā)揮重要作用。探索害蟲對其產(chǎn)生抗藥性的速度和如何克服抗性的發(fā)展，是保持其良好使用價值的重要研究內(nèi)容。本試驗結(jié)果初步證明廠在不斷的強(qiáng)選擇壓下，棉鈴蟲種群的抗性指數(shù)逐漸上升，顯示棉鈴蟲對蟲酰肼表現(xiàn)出有抗藥性發(fā)展趨勢，作者期望繼續(xù)汰選出抗性水平較高的抗性品系，為進(jìn)一步的研究工作，如生物學(xué)特性、種群遺傳、抗性機(jī)理及治理策略等奠定基礎(chǔ)。