孫沫逸　譚爰興　呂成鵬　賈文榮　李建虎　楊耀武

[摘要]目的：探討人涎腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲在大體形態(tài)學(xué)上的發(fā)生發(fā)展過程。方法：將人涎腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移癌Acc-M細(xì)胞系接種于5只裸鼠雙側(cè)臀部肌肉內(nèi)，從荷瘤長出開始，解剖出荷瘤與神經(jīng)以觀察它們的關(guān)系，以后每隔5天在同一部位解剖一次,連續(xù)觀察1個月，同時觀察和對比各裸鼠神經(jīng)受腫瘤侵襲后相應(yīng)肢體的功能變化。結(jié)果：腺樣囊性癌發(fā)生嗜神經(jīng)侵襲的方式是，瘤組織細(xì)胞以神經(jīng)干為中心以邊生長邊包裹邊侵襲的方式進(jìn)行的。結(jié)論：腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲是以一種特殊的方式進(jìn)行的，這對臨床診斷與治療具有良好的指導(dǎo)意義。

[關(guān)鍵詞]腺樣囊性癌；坐骨神經(jīng)；神經(jīng)侵襲；裸鼠

[中圖分類號]Q813.1[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A[文章編號]1008-6455（2009）02-0205-03

General morphology study of neural invasion withhuman salivary adonoid cystic carcinoma

SUN Mo-yi,TAN Ai-xing,LV Cheng-peng，JIA Wen-rong, LI Jian-hu，YANG Yao-wu

(Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Stomatological College, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi, China)

Abstract:ObjectiveTo investigate development and grouth process of neural invasion with human salivary adonoid cystic carcinoma by general morphology study.MethodsHuman salivary adenoid cystic carcinoma line Acc-M cells were injected into intramusculary of both sides rump of five nude mice. since tumor can be seen at first, dissection of nude mice to observe their relation between tumor and nerve one time per five days, successive observation have been done for one month, at the same time, function change of all limbs with invaded nerve were observed and compared.ResultsNeurotropism of ACC working at the way of wraping nerve while which be grewing, and neural invasion is specific biological behaviour of adonoid cystic carcinoma. Conclusionneural invasion with adonoid cystic carcinoma were doing at a specific style, it have a good instruction sense in the clinical diagnosis and therapy.

Key words: adonoid cystic carcinoma; sciatic nerve; neural invasion; nude mouse

腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)有沿神經(jīng)侵襲的生物學(xué)特性。近年來人們發(fā)現(xiàn)，這一特性是影響該腫瘤患者復(fù)發(fā)和生存的重要預(yù)后因素[1]。ACC對神經(jīng)的侵襲機(jī)理非常復(fù)雜，目前仍處在探索之中，本實驗采用ACC-M細(xì)胞接種于裸鼠的坐骨神經(jīng)附近，在不同時期觀察腫瘤生長及與外周神經(jīng)的關(guān)系，從大體形態(tài)學(xué)上進(jìn)一步了解ACC神經(jīng)侵襲的特征性生物學(xué)形為，為探討其嗜神經(jīng)侵襲的機(jī)理及防治方法奠定基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1細(xì)胞株：人涎腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移癌Acc-M細(xì)胞株由第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院生物教研室提供，RPMI+15%小牛血清37℃培養(yǎng)。

1.2實驗動物：4周齡雄性BABL/C nu/nu裸小鼠，由上?？茖W(xué)院實驗動物中心提供，共5只，SPF條件下飼養(yǎng)。

1.3細(xì)胞懸液：取體外培養(yǎng)指數(shù)生長期Acc-M細(xì)胞經(jīng)0.125%胰酶消化，吹打成單細(xì)胞懸液，經(jīng)苔盼藍(lán)染色確定活細(xì)胞數(shù)達(dá)90%以上，細(xì)胞經(jīng)1 000r/min離心，共5min,棄去上清，加入PBS液吹打成單細(xì)胞懸液后再離心，共三次，最后加入無血清培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)稀釋調(diào)整成5×106/ml。

1.4實驗方法：用乙醚麻醉裸小鼠，在無菌條件下取制備好的單細(xì)胞懸液注射于裸小鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)(膝蓋至尾巴根部連線的中1/3)附近，各注射0.2ml，自荷瘤長出開始，以后每隔五天在同一部位解剖一次進(jìn)行連續(xù)觀察1個月，同時觀察和對比各裸鼠神經(jīng)受腫瘤侵襲后相應(yīng)肢體功能變化情況。最后比較受腫瘤完全侵襲的神經(jīng)與正常神經(jīng)的離體狀況。

1.5 神經(jīng)受侵襲的標(biāo)準(zhǔn)：侵襲標(biāo)準(zhǔn)為光鏡下有腫瘤細(xì)胞侵入坐骨神經(jīng)束膜內(nèi)，同時觀察神經(jīng)受侵襲后的功能表現(xiàn)。功能障礙標(biāo)準(zhǔn)為受侵襲神經(jīng)所支配的肌肉出現(xiàn)癱瘓，肢體癱瘓表現(xiàn)為肢體不能正常自主運(yùn)動，同時五個小爪自然并攏下垂無抓力。

2結(jié)果

2.1 荷瘤的形成：通過連續(xù)對接種后的裸鼠進(jìn)行密切觀察，于第9天可見有2只裸鼠雙側(cè)及2只裸鼠單側(cè)臀部長出荷瘤，第10天見剩下那只裸鼠雙側(cè)臀部長出荷瘤，其中1只的另一側(cè)始終未發(fā)現(xiàn)長出荷瘤。于30天時發(fā)現(xiàn)有一只出現(xiàn)單側(cè)肢體運(yùn)動功能障礙。

2.2 荷瘤的成長對神經(jīng)的侵襲過程：見表1，圖1。

2.3 受侵襲神經(jīng)的離體狀況：切除受腫瘤完全侵襲的神經(jīng)，與正常離體神經(jīng)相比，見神經(jīng)外膜大部分被破壞，色暗紅而失出光澤，彈性明顯減退，卷曲，粘性增加。見圖2。

3討論

ACC的浸潤性極強(qiáng)，術(shù)后局部復(fù)發(fā)與其嗜神經(jīng)侵襲密切相關(guān)，故臨床治療難點之一就是ACC侵襲中的嗜神經(jīng)性，因而探討ACC嗜神經(jīng)侵襲的機(jī)制具有重要的臨床意義。多年來研究嗜神經(jīng)侵襲性腫瘤的特性以關(guān)注癌細(xì)胞對于神經(jīng)組織特異性的趨化移動、粘附為主，來解釋嗜神經(jīng)性侵襲[2-3]。本實驗通過對Acc-M接種于臀部肌肉內(nèi)坐骨神經(jīng)附近，切除發(fā)生神經(jīng)侵襲并出現(xiàn)功能障礙的荷瘤，以從組織學(xué)形態(tài)上來研究ACC嗜神經(jīng)侵襲的機(jī)制。

肉眼觀荷瘤塊是沿神經(jīng)的長軸方向呈膨脹性生長，并為多個瘤結(jié)節(jié)融合而成。從而可以推理出，移植瘤對神經(jīng)的侵襲是在神經(jīng)的周圍瘤細(xì)胞先形成一小瘤結(jié)節(jié)，先向神經(jīng)靠近和粘附，瘤結(jié)節(jié)在生長的同時，其周邊沿神經(jīng)又長出小的突起，在神經(jīng)的背或腹側(cè)融合，對神經(jīng)形成包裹，然后沿神經(jīng)長軸向近遠(yuǎn)兩端發(fā)展，同時向周圍肌肉組織內(nèi)長出新的瘤結(jié)節(jié)突起，從而完成腫瘤對神經(jīng)及周圍組織的侵襲過程。

從以上結(jié)果不難分析出受腫瘤完全侵襲的神經(jīng)外觀表現(xiàn)，由于外周神經(jīng)長時間受腫瘤組織包裹和擠壓，一方面神經(jīng)失出了正常的血液供給而缺氧變性；另一方面腫瘤細(xì)胞侵襲和破壞了周圍神經(jīng)的保護(hù)屏障，從而失出了正常的組織保護(hù)和支持，最終致周圍神經(jīng)萎縮而喪失功能。

之所以選擇坐骨神經(jīng)做為本實驗的研究對象，坐骨神經(jīng)為裸鼠體內(nèi)最粗的運(yùn)動神經(jīng)之一，能較好地模擬ACC在頭頸部對神經(jīng)的侵襲所致相應(yīng)的肌肉癱瘓，能真實可靠地反映ACC對神經(jīng)侵襲的程度和過程，坐骨神經(jīng)位于肌肉內(nèi)，全長約為 2.3cm，5號針頭進(jìn)針約 0.3cm，腫瘤種植時只需將細(xì)胞懸液注入肌肉內(nèi)即可，范圍較大且較容易掌握。此外，本實驗從腫瘤生長與神經(jīng)關(guān)系進(jìn)一步證實了ACC的嗜神經(jīng)性。

在本實驗中發(fā)現(xiàn)ACC以神經(jīng)為中心向近遠(yuǎn)端呈連續(xù)性侵襲，ACC不但是一個主動的神經(jīng)侵襲過程，而且是一個與神經(jīng)互相作用的結(jié)果。本實驗是我們研究ACC神經(jīng)侵襲機(jī)制及防治方法的良好模型。

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[收稿日期]2008-12-18

編輯/張惠娟