王翔飛　潘旭東　劉雯霞　譚　勇

【摘要】目的：本文以新疆產(chǎn)瓦松作為研究對象，采用比色法，測定瓦松有效成分總?cè)频暮?。方法：以齊墩果酸作為對照品，以5%香草醛-冰醋酸、高氯酸作為顯色劑，在540nm波長處處測定樣品吸收度。結(jié)果：齊墩果酸在4～16μg／ml線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，其回歸方程為：A=0.1082C+0.1105，r=0.9981，所測瓦松中總?cè)瞥煞譃?.51％,RSD=1.31%。

【關(guān)鍵詞】瓦松;總?cè)?比色法

【中圖分類號】R284.2【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)10-0011-01

黃花瓦松(Orostachys spinosa (L.) C.A. Mey.)為景天科瓦松屬(Orostachys)二年生肉質(zhì)草本植物，又名昨葉荷草、向天草，為我國傳統(tǒng)用藥^[1]。其性味酸、苦、涼（《唐本草》等），歸肝、肺、脾經(jīng)（《本草再新》），具有清熱解毒、涼血止血、利濕消腫、抗菌消炎等功效，中國藥典(2005年版)對其進行了收錄。瓦松屬植物全世界約有13種，主要分布于溫帶地區(qū)，我國約有10種，在新疆也有著廣泛的分布（新疆藥用植物志第三冊）。經(jīng)研究表明，萜類化合物是其主要有效化學成分之一。為了更好地利用和開發(fā)其藥用成分，本實驗以齊墩果酸為對照，采用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸顯色的方法，首次對瓦松中總?cè)祁惓煞值暮窟M行測定，為其進一步開發(fā)利用提供了可靠的鑒定依據(jù)。

1試藥及儀器

試藥：所用試劑均為國產(chǎn)分析純，黃花瓦松采自新疆農(nóng)九師165團。齊墩果酸對照品購于武漢卓康科技發(fā)展有限公司。儀器：水浴鍋（SB-1000上海愛明儀器有限公司）、分光光度計（722N型上海精密科學儀器有限公司）

2方法^[2~5]及結(jié)果

2.1對照液的制備精確稱取齊墩果酸對照品20mg，置于100ml容量瓶中。加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.2測定波長的選擇將齊墩果酸對照品加顯色劑后，于分光光度計上掃描，得吸收光譜圖，結(jié)果如圖1，齊墩果酸在540nm處有一吸收峰，故確定540nm為測定波長。

2.3顯色劑用量及條件選擇

2.3.15％香草醛-冰醋酸溶液用量的選擇取齊墩果酸對照品溶液1.0ml5份，水浴揮干，分別加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，各加入高氯酸1.4ml，置70水浴加熱15min，冰浴冷卻后，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度。搖勻，在540nm波長處測定吸收值，結(jié)果見表1。結(jié)果表明5%香草醛-冰醋酸用量為0.4ml時最佳。

2.3.2高氯酸的用量的選擇取齊墩果酸對照品溶液1.0ml5份，水浴揮干，分別加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸1.0、1.2、1.4、1.6、1.8ml，置70℃水浴加熱15 min，冰浴冷卻后，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度。搖勻，在540nm波長處測定吸收值，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，高氯酸用量為1.6ml時最佳。

2.4對照曲線的制備精確吸取對照液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，分別置具塞試管中，揮去溶劑，準確加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，置7O℃恒溫水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在540nm波長處測定吸收度，以不加對照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度的混合溶液為空白對照，并以A對濃度C回歸得方程：A=0.1082C + 0.1105，r =0.9981，線性范圍在4～16μg/ml。

2.5供試品溶液的置備精確稱取瓦松25mg。置25ml容量瓶中。加乙醚15ml。超聲提取3O分鐘，再添加乙醚至刻度。精密吸取15.0ml，置于25ml容量瓶內(nèi)，揮干溶劑，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.6含量測定方法精確稱取供試液溶液3ml，加入10ml容量瓶內(nèi)，揮干溶劑，加乙酸乙酯至刻度，再從中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶內(nèi)，揮干溶劑后，加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6 ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，按樣品測定項下操作。代入標準曲線方程，計算含量。結(jié)果表明總?cè)祁惓煞趾繛?.51%(n=5)，RSD=1.31%。2.7穩(wěn)定性試驗同一份樣品按上述方法處理，在1日之內(nèi)，隔1h測定，共測6次，得平均含量為1.50，RSD為1.58%，結(jié)果說明顯色反應(yīng)在6h基本穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的瓦松粉末0.2g，6份，精密加入齊墩果酸對照品1mg，照供試品溶液制備方法制成10ml樣品液，各吸取0.1ml，依法顯色后測定吸收度，見表3，計算回收率，得平均回收率為98.718%，RSD=0.8644%。

3討論

三萜類化合物為藥用植物中主要的有效化學成份之一，對藥用植物黃花瓦松中總?cè)瞥煞值臏y定未見文獻報道，本文所得結(jié)果表明黃花瓦松中三萜類成分含量較高，作為我國的傳統(tǒng)用藥，可對其進行更深入的研究與開發(fā)。比色法是測定三萜類化合物常用方法，本文探討了顯色條件以及反應(yīng)后放置時間對含量測定的影響，結(jié)果表明，香草醛-冰醋酸溶液以及高氯酸用量等因素的影響較為顯著，反應(yīng)后的放置時間在6h內(nèi)基本穩(wěn)定，此方法簡單可行，

其結(jié)果較穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，為測量瓦松中活性成分總?cè)祁惓煞痔峁┝艘环N有效可靠的分析方法。

參考文獻

[1] 傅書遐,傅坤俊.中國植物志[J].北京:科學出版社,1984

[2]帕麗達,堵年生.比色法測定瑣瑣葡萄中三萜類成分的含量[J].天津藥學，2002,14(4):70

[3]陳明珠.齊墩果酸片的比色測定[J].中草藥，1981,12(9):13

[4]余志堅,包水明,李榮同.比色法測定菌核側(cè)耳中三萜類成分的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2006,6(l7):911

[5]舒任庚,劉玉鳳,舒積成.比色法測定青錢柳中三萜類成分的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學雜志，2006,23(5):406-408

(收稿日期：2009.03.14)