梁 明,李志源

(1.廣西柳州市水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局,柳州 545005;2.廣西柳州市動物疫病預防控制中心,柳州 545005)

1 材料

1.1 試驗奶牛 均為柳州地區(qū)奶牛場飼養(yǎng)的奶牛,外表情況較好,無任何結(jié)核病臨床癥狀,年均產(chǎn)奶量約3 500kg。

1.2 主要試劑

1)牛型提純結(jié)核菌素:黑龍江省生物制品廠一廠生產(chǎn),規(guī)格5 mL/瓶,凍干型。

2)禽型提純結(jié)核菌素:中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn),規(guī)格20頭份/瓶 、2 mL/瓶,凍干型。

2 方法

2.1 檢疫方法:

1)牛只編號。

2)注射部位:為牛頸側(cè)中部上1/3處,對同一奶牛場所有牛只相對固定在同一側(cè)進行,以便檢疫操作和觀察結(jié)果。注射時應避開病變或硬結(jié)部位。

3)剃毛:用刮須刀在注射部位剃毛,直徑約 10 cm,使注射部位完全暴露。

4)測量與記錄:指定專人測量并進行記錄,包括奶牛場名稱、棟欄號、順序號、牛號、注射時間、注射部位、注射前皮皺厚度(游標卡尺)、72 h皮皺厚度(游標卡尺)、皮皺厚度差值、判定結(jié)果、檢疫、測量人員姓名等。

5)注射方法:采用一次性1 mL注射器,一牛一付,用完即焚燒處理。注射部位用75%酒精消毒,術(shù)者用左手食指和拇指捏提中央皺皮,針頭斜向皮膚刺入,注射后觀察,出現(xiàn)一個小皰,說明注射正確。如注射劑量不準,則另選15 cm以外的部位或?qū)?cè)重作,同時做記錄說明。

6)觀察結(jié)果:皮內(nèi)注射后經(jīng)72 h觀察術(shù)部有無熱痛、腫脹等炎性反應,如發(fā)現(xiàn)有此反應,用游標卡尺測量皮皺厚度,并做好詳細記錄。

7)結(jié)果判定:2003年前按農(nóng)業(yè)部1988年頒布的《牛結(jié)核病提純結(jié)核菌素變態(tài)反應操作規(guī)程》進行判定,2003年后則以GB/T18645-2002《動物結(jié)核病診斷技術(shù)》進行判定。

2.2 同一奶牛場不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比試驗

1)奶牛:為柳州市某結(jié)核病陽性奶牛場準備淘汰的陽性牛和可疑牛共12頭,年齡在4～6歲之間。

2)試驗部位:選取奶牛頸部右側(cè)約上、中、下和前、中、后的居中位置,分上、下兩排剃毛,上下兩排相距3～5 cm,每個部位20～30 cm2。

3)診斷試劑稀釋方法:取5個無菌小玻璃瓶,分別標為牛型10 000 u、牛型5 000 u、牛型 2 000 u、禽型5 000 u、禽型2 500 u,用生理鹽水分別稀釋牛型和禽型結(jié)核病菌素,從高濃度向低濃度方向進行。稀釋后含量分別為 10 000、5 000 、2 000、5 000、2 500 u 。

4)注射方法:用1 mL一次性注射器進行皮內(nèi)注射。在上排3個注射部位部位由后往前分別注射牛型提純結(jié)核菌素10 000 u、5 000 u、2 000 u各 0.2 mL,下排由后往前分別注射禽型結(jié)核菌素5 000 u、2 500 u各0.2 mL。

5)觀察記錄:在注射牛型、禽型提純結(jié)核菌素后48 h、72 h、96 h、120 h 分別對每個部位測量,并做記錄。

6)判定標準:按GB/T18645-2002的判定標準進行判定。

2.3 不同奶牛場不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比試驗 方法與2.2相同。

2.4 同一奶牛場不同稀釋濃度牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比試驗 方法與2.2相同。用1 mL一次性注射器進行皮內(nèi)注射。在上排2個注射部位由后往前分別注射牛型提純結(jié)核菌素0.2 mL(2 000 u/0.2 mL)、0.1 mL(2 000 u/0.1 mL),下排由后往前分別注射禽型結(jié)核菌素0.2 mL(2 500 u/0.2 mL)、0.1 mL(2 500 u/0.1 mL)。

2.5 間隔4月對結(jié)核陽性可疑牛的重復試驗第1次檢疫后4個月重復檢疫1次。方法同2.1。

3 結(jié)果

3.1 同一奶牛場不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比 對12頭結(jié)核病陽性和可疑奶牛進行試驗,48 h、72 h、96 h、120 h 觀察記錄與原皮厚進行對比,“++++”為皮差大于1.6 cm,“+++”為皮差大于1.2 cm,“++”為皮差大于 0.8 cm,“+”為皮差大于或等于0.4 cm,“±”為皮差介于 0.2～0.4 cm之間,“-”為皮差小于0.2 cm(以下表同)。根據(jù)皮差作出判定,結(jié)果見表1、2。從表中可以看出,除11號牛禽型反應強于牛型之外,其余多是牛型反應強于禽型。從陽性數(shù)來看,兩種劑量于72 h檢測出的陽性數(shù)最多,隨著時間推移,陽性數(shù)趨少。

表1 12頭奶牛48 h、72 h、96 h、120 h牛型和禽型提純結(jié)核菌素反應結(jié)果

表2 不同劑量不同時間奶牛結(jié)核病陽性數(shù)、可疑數(shù)檢測結(jié)果

3.2 不同奶牛場不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比

對8個奶牛結(jié)核病陽性場初檢為陽性或可疑的21頭奶牛進行不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比試驗。結(jié)果見表3、4。

表3 不同奶牛場不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素檢出陽性數(shù)對比

表4 不同奶牛場不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素檢出可疑數(shù)對比

3.3 測量時間與最大皮差 對不同奶牛場注射牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比試驗中21頭奶牛進行分類,統(tǒng)計不同時間測量出現(xiàn)最大皮差頭數(shù),結(jié)果見表5～7。結(jié)果表明,5種不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素同時達皮差最大值的時間后移,個別奶牛場發(fā)生相似的后移情況。

表5 不同測量時間出現(xiàn)的最大皮差頭數(shù)分布

表6 不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素同一時間皮差均達最大的頭數(shù)分布

表7 不同奶牛場牛型和禽型提純結(jié)核菌素同一時間皮差均達最大的頭數(shù)分布

3.4 間隔4個月后對初檢為陽性或可疑的奶牛進行復檢 對初次檢疫的21頭陽性牛、可疑牛隔離飼養(yǎng),不進行任何治療,4個月后復檢,采取國家標準劑量2 000 u,72 h后觀察,結(jié)果見表8。結(jié)果表明,初檢結(jié)核病陽性奶牛5頭,經(jīng)復檢后為可疑2頭,陰性3頭;初檢可疑16頭,經(jīng)復檢后為可疑5頭,陰性11頭。復檢后奶牛結(jié)核病陽性率為0%。

表8 間隔4個月前后奶牛結(jié)核病檢疫結(jié)果對照

3.5 同一奶牛場不同稀釋濃度牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比 用14頭1～3歲青年奶牛進行不同稀釋濃度對比,牛型提純結(jié)核菌素含量2 000 u,禽型提純結(jié)核菌素含量2 500 u,72 h后觀察結(jié)果,見表9。結(jié)果表明,兩種稀釋劑量檢測結(jié)果無明顯差異。

表9 不同稀釋濃度牛型和禽型提純結(jié)核菌素對比

3.6 禽型與牛型反應強度對比 采用牛型和禽型提純結(jié)核菌素對陽性牛、可疑牛及假定健康牛群進行檢疫,對同一奶牛場的12頭陽性可疑奶牛、不同奶牛場的21頭陽性可疑奶牛和同場進行不同稀釋劑量進行試驗的14頭假定健康奶牛進行統(tǒng)計,根據(jù)結(jié)果判斷牛結(jié)核和副結(jié)核存在的可能性。結(jié)果見表10。

3.7 不同劑量檢疫對生產(chǎn)的影響 采用不同劑量、不同稀釋濃度的牛型和禽型提純結(jié)核菌素進行檢疫,比較其陽性檢出數(shù)。結(jié)果見表11。

表10 禽型與牛型提純結(jié)核菌素反應強度對比

4 討論

4.1 采用不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素在同一奶牛場檢疫時,兩種劑量于注射后72 h檢出陽性數(shù)最多,隨著時間推移,陽性數(shù)趨少,說明最佳觀察時間為注射后72 h。同時可以看出,不同注射劑量對檢測結(jié)果無顯著性影響,不會造成誤判。提示在奶牛結(jié)核病臨床檢疫中。應以72 h觀察為主,同時在96 h再觀察1次,可提高檢出率。

表11 不同檢疫方法的陽性檢出數(shù)對比

4.2 在同一奶牛場進行陽性可疑牛不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素試驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn),禽型反應較輕,只有1例奶牛表現(xiàn)為禽型提純結(jié)核菌素反應強于牛型提純結(jié)核菌素,且反應消失極緩慢,該牛可能是感染了禽型結(jié)核病,而非牛型結(jié)核病,具體待進一步研究。

4.3 不同個體可能患不同程度的結(jié)核病,或在不同部位或多個部位發(fā)生結(jié)核病,它們誘發(fā)機體產(chǎn)生數(shù)量不一的免疫因子,導致奶牛發(fā)生不同程度的變態(tài)反應。同時,無論是牛型或是禽型提純結(jié)核菌素,其注射劑量與皮差有很大相關(guān)性,劑量越大皮差也越大,反之,劑量越小,皮差越小。表明檢測時注射劑量大,反應強,則陽性檢出率提高,淘汰率也增加,對畜牧業(yè)發(fā)展不利。

4.4 本試驗表明,采用目前國家標準劑量,雖然檢出率稍低,但與劑量大的檢疫方法無顯著差異,對畜牧生產(chǎn)有利。