不同條件影響冷凍血小板質(zhì)量的研究

陳興智,李聚林,韋常健

(廣西壯族自治區(qū)血液中心,廣西 柳州 545005)

血小板輸注是臨床治療因血小板減少或血小板功能障礙所致的出血等疾病的重要手段,目前可供應(yīng)臨床輸注的血小板制劑有多種類型,主要有濃縮血小板和單采血小板制劑。以保存方式可以分為4℃冷藏、22℃常溫保存、血小板冰凍干燥保存和深低溫冰凍保存等。4℃冷藏血小板對細(xì)胞功能活性損傷很大,基本已經(jīng)不被使用,22℃常溫保存比較普遍,但是保存時(shí)間比較短,一般只有 5-7 d,低溫冰凍干燥保存技術(shù)使用受眾多因素影響,一時(shí)難以推廣,而深低溫保存冰凍血小板技術(shù)設(shè)備要求不高,也容易推廣使用,目前許多血液中心或中心血站都開展這個項(xiàng)目,然而冷凍血小板制備與保存過程的質(zhì)量問題是直接影響臨床使用效果的主要原因。筆者對影響深低溫保存冰凍血小板制備質(zhì)量的多種因素進(jìn)行研究,現(xiàn)報(bào)道如下:

1 材料與方法

1.1 設(shè)備 -80℃超低溫冰箱,型號:MDF-382E,日本 SANYO生產(chǎn);-135℃超低溫冰柜,型號:MDF-2136,日本 SANYO生產(chǎn);42℃電熱恒溫水浴箱,型號:BHW-2,北京醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn);數(shù)字顯示測溫儀,規(guī)格型號:FLuKE 50S＆50DKJ,美國進(jìn)口;血小板保存箱,型號:PC 100 h和型號:PC 1200i,美國進(jìn)口;澄明度檢測儀,型號:CM-Ⅲ,天津大學(xué)無線電廠生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 5%-6%二甲基亞砜(DMSO)加入到機(jī)采血小板中,血小板采集量均≥2.8×1011/袋;分別放置于調(diào)節(jié)并顯示溫度為 -80℃至 -120℃之間的超低溫保存箱中冷凍保存。臨床輸注前迅速把不同保存溫度的冷凍血小板取出立即于 42℃水浴箱中融化解凍復(fù)蘇,時(shí)間控制在 3 min左右。然后在澄明度檢測儀前觀察判斷冷凍血小板的穩(wěn)定性。如果在澄明度檢測儀前肉眼觀察有絮狀不可逆聚集物或纖維蛋白等則判斷質(zhì)量為不合格;如果無以上現(xiàn)象出現(xiàn),血小板呈均勻云霧狀則判質(zhì)量為合格。

1.2.2 方式 1:血小板由 -80℃超低溫冰箱凍結(jié)后由于出現(xiàn)質(zhì)量問題轉(zhuǎn)移入 -135℃超低溫冰柜保存;方式 2:直接將血小板放入 -135℃超低溫冰柜凍結(jié)進(jìn)行冰凍保存;方式 3:將血小板由 -85℃凍結(jié)成型后降溫至 -135℃再升溫至 -85℃條件下解凍。冷凍血小板復(fù)蘇后分別室溫下放置玻璃或瓷磚冷面介質(zhì)、導(dǎo)熱慢的紗布或毛巾等不同介質(zhì)上保存一定時(shí)間,觀察血小板質(zhì)量情況。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用 SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)不是所有溫度到達(dá) -135℃保存的血小板都會發(fā)生爛袋等質(zhì)量問題。經(jīng)過對方式1、方式 2、方式 3三種不同冷凍、解凍方式進(jìn)行考察分析,發(fā)現(xiàn)保存成型的溫度和解凍溫差是絮狀不可逆聚集或纖維蛋白析出及爛袋等的主要原因。見表1。

表1 凍結(jié)與解凍溫差對血小板解凍后質(zhì)量的影響情況[例(%)]

2.2 -90℃條件保存的冷凍血小板共 1 483袋,其中 4袋融化解凍后放置于玻璃、瓷磚、不銹鋼平面上,5 min左右出現(xiàn)絮狀或纖維蛋白析出等。而解凍融化后放置于木板介質(zhì)上或放置保存箱內(nèi)震蕩的 1 479袋均無絮狀或纖維蛋白析出,與放置瓷磚或玻璃比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表 2。

表2 冷凍血小板融化后放置不同介質(zhì)上纖維蛋白及絮狀不可逆聚集物析出情況統(tǒng)計(jì)分析

2.3 2003年至 2008年我中心制備冷凍血小板在加藥前均未經(jīng)過震蕩,冷凍保存于 -85℃至 -120℃超低溫冰箱中的1 101袋冷凍血小板均已經(jīng)融化復(fù)蘇并應(yīng)用于臨床,未發(fā)現(xiàn)復(fù)蘇后絮狀不可逆聚集物和纖維蛋白析出。見表 3。

表3 加藥前未震蕩保存于 -85至 -120℃條件下的冷凍血小板融化復(fù)蘇后放置于(22±2)℃保存質(zhì)量分析

3 討 論

血小板在參與機(jī)體凝血過程中發(fā)揮了重要的止血功能,尤其是肝臟移植手術(shù)中嚴(yán)重出血患者及時(shí)補(bǔ)充血小板及凝血因子可消除其凝血障礙[1]。隨著臨床醫(yī)生的輸血理念的改變,臨床輸血技術(shù)的不斷提高,血小板輸注在臨床血液輸注中占有很大的比率。然而,血小板保存在 4℃條件下活性很快下降。22℃持續(xù)振蕩保存對血小板活力維持的可靠性和穩(wěn)定性已經(jīng)被公眾認(rèn)可。但是 22℃保存的血小板保存時(shí)間短,不能長期保存,采供血機(jī)構(gòu)在“無償獻(xiàn)血”血液資源寶貴的情況下,也不能大量采集以免造成浪費(fèi),勢必影響臨床緊急情況的需求。在深低溫條件,血小板細(xì)胞膜內(nèi)外的水分都處于凝固狀態(tài),細(xì)胞生命代謝基本停止,血小板及凝血因子等功能活性物質(zhì)可長期保存而不會衰退或功能耗竭,在降復(fù)溫過程中添加冰凍保護(hù)劑保護(hù)下可以降低血小板低溫保存經(jīng)歷降復(fù)溫過程的損害,從而達(dá)到低溫保存的目的[2]。冷凍血小板制備過程中或多或少出現(xiàn)絮狀物的情況,并且隨著保存時(shí)間的延長而出現(xiàn)概率逐漸增加[3]。

眾多資料表明,DMSO作為冷凍保護(hù)劑,不控制降溫速度情況,-80℃冰箱冷凍保存血小板在臨床應(yīng)用中具有顯著的效果。同樣也有報(bào)道 -80℃冷凍保存血小板融化復(fù)蘇后有絮狀不可逆聚集物或纖維蛋白析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象的發(fā)生[4]。筆者研究發(fā)現(xiàn),方式 1:血小板由 -80℃超低溫冰箱凍結(jié)后由于出現(xiàn)質(zhì)量問題轉(zhuǎn)移入 -135℃超低溫冰柜保存血小板 150人份,結(jié)果出現(xiàn)不穩(wěn)定因素的有 36人份;方式 2:直接將血小板放入 -135℃超低溫冰柜凍結(jié)進(jìn)行冰凍保存 7份均爛袋。方式 3:將血小板由 -85℃凍結(jié)成型后降溫至 -135℃再升溫至 -85℃條件下解凍 132人份均無爛袋或絮狀聚集物或纖維蛋白析出,與前兩者比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。調(diào)節(jié)冰箱溫度為 -80℃時(shí),在 0℃以下冷凍保存血小板內(nèi)部實(shí)際降溫速度較慢,特別是關(guān)鍵的 0℃和 -30至 -40℃之間的下降速度;而冰箱調(diào)節(jié)溫度在 -85℃以下,冷凍保存血小板內(nèi)部實(shí)際降溫速度可以達(dá)到1℃-3℃/min[5]。正是這種原因?qū)е路绞?1影響血小板的保存質(zhì)量,同時(shí)表明,一旦保存過程導(dǎo)致質(zhì)量的問題是無法復(fù)原的。

在處理醫(yī)院退回有絮狀聚集物血小板的調(diào)查中發(fā)現(xiàn),醫(yī)院取回冷凍血小板進(jìn)行出入庫登記過程,將血小板暫存于玻璃或瓷磚等導(dǎo)熱性能較好的介質(zhì)上,導(dǎo)致了冷凍血小板出現(xiàn)絮狀聚集物析出。而我們進(jìn)行出入庫過程將血小板放置室溫紗布、毛巾介質(zhì)或(22±2)℃暫存,均未發(fā)生類似質(zhì)量問題。筆者總結(jié)發(fā)現(xiàn)冷凍血小板融化后輸血前放置的介質(zhì)對血小板質(zhì)量有影響,即導(dǎo)熱性能好的玻璃或瓷磚上放置融化后的血小板 100%出現(xiàn)絮狀聚集物,而室溫條件下短時(shí)間放置墊有紗布、毛巾介質(zhì)或(22±2)℃保存,絮狀聚集物為 0%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=547.69,P＜0.01)。

長時(shí)間實(shí)踐表明,冷凍血小板具有止血效果好、作用快等特點(diǎn),經(jīng)臨床應(yīng)用觀察證明其安全可靠[6],其冷凍保護(hù)劑 DMSO在其他血液成分保存中也有應(yīng)用[7]。血小板放置 -85℃至 -120℃之間保存,臨床使用前融化復(fù)蘇,放置于室溫內(nèi)的紗布、毛巾介質(zhì)上或(22±2)℃保存箱暫短存放可保持良好的穩(wěn)定性。影響冷凍保存血小板質(zhì)量的因素眾多,綜合考慮各方面因素可以避免冷凍血小板融化復(fù)蘇過程或復(fù)蘇后絮狀聚集物或纖維蛋白析出,從而確保冷凍血小板的質(zhì)量,保證臨床輸注血小板的有效性,相信在應(yīng)急儲備及臨床急救方面一定能發(fā)揮重要的作用。

[1] 曾永芳,郭 鵬,陳方祥,等.血小板、冷沉淀在肝臟移植術(shù)中的聯(lián)合應(yīng)用[J].重慶醫(yī)學(xué),2009,38(12)∶1 431-1 432.

[2] 劉景漢,車 輯.血小板保存[J].中國輸血雜志,2008,21(4)∶241-242.

[3] 薄玉芳,丁國良.冰凍前存放時(shí)間對冰凍血小板質(zhì)量的影響[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(1)∶75.

[4] 孫艷萍,袁 媛,陳召江,等.冰凍血小板融化復(fù)蘇后不可逆聚集的原因分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2005,7(2)∶88-89.

[5] 陳興智,李聚林,張 源,等.冷凍血小板穩(wěn)定性的研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(1)∶48-51.

[6] 李聚林,羅 志,何偉蘭,等.冷凍血小板臨床應(yīng)用的比較研究[J].廣西醫(yī)學(xué),2005,27(10)∶1 534-1 536.

[7] 莊 遠(yuǎn),劉景漢,歐陽錫林,等.二甲基亞砜在人紅細(xì)胞凍干前負(fù)載海藻糖過程中的作用[J].中國輸血雜志,2007,20(2)∶93-95.