為增強(qiáng)本市醫(yī)療器械監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產(chǎn)關(guān)鍵環(huán)節(jié)的認(rèn)識和掌握，為全市醫(yī)療器械監(jiān)管人員開展監(jiān)督檢查工作和醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)開展醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理工作提供參考，根據(jù)本市生產(chǎn)企業(yè)現(xiàn)狀和監(jiān)督管理工作的實際情況，北京市藥品監(jiān)督管理局組織制訂了《醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南（2010版）》，現(xiàn)印發(fā)給你們，請參照執(zhí)行。

特此通知。

北京市藥品監(jiān)督管理局

2010年9月14日

附件 醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南（2010版）

無菌檢驗是無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)控制過程中的一項重要內(nèi)容。其檢驗方法、檢驗結(jié)果判定及檢驗人員業(yè)務(wù)能力等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。作為無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)，其無菌檢驗工作應(yīng)由本企業(yè)獨立完成。

本指南旨在幫助北京市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員增強(qiáng)對無菌檢驗相關(guān)知識的認(rèn)識，指導(dǎo)和規(guī)范全市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗過程控制水平的監(jiān)督檢查工作，同時，為醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)（以下簡稱生產(chǎn)企業(yè)）在無菌檢驗的過程管理要求提供參考和依據(jù)。

當(dāng)國家相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、檢查要求發(fā)生變化時，應(yīng)重新修訂本指南。

一、適用范圍

本指南適用于北京市藥品監(jiān)督管理局組織、實施的《醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證》核發(fā)、變更、換證等現(xiàn)場檢查、醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系考核、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范檢查、醫(yī)療器械生產(chǎn)日常監(jiān)督等各項涉及無菌檢驗的檢查。

二、檢查內(nèi)容

檢查人員應(yīng)在充分了解生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗活動的情況下，對其無菌檢驗過程的控制水平進(jìn)行客觀的檢查和評價。

一般情況下，檢查人員可按照以下順序開展檢查工作，并適時做好相關(guān)記錄：

1.了解產(chǎn)品特性及生產(chǎn)企業(yè)選擇的無菌檢驗方法。常見的產(chǎn)品無菌檢查法包括直接接種法和薄膜過濾法。當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查方法時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進(jìn)行方法的驗證，以證明所采用的方法能夠給出正確的結(jié)果。若該產(chǎn)品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變時，檢查方法應(yīng)重新驗證。驗證時，應(yīng)按供試品無菌檢查的規(guī)定及有關(guān)要求進(jìn)行操作。對藥典規(guī)定的每一試驗菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗證。驗證試驗也可與供試品的無菌檢查同時進(jìn)行。

2.了解檢驗人員的專業(yè)背景、培訓(xùn)情況及工作經(jīng)歷。可通過查看學(xué)歷證書、培訓(xùn)證書或當(dāng)面詢問檢驗人員的方式，檢查無菌檢驗人員是否具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。

3.現(xiàn)場查看無菌實驗室。無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)（如在萬級潔凈間內(nèi)配置超凈工作臺等）中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期監(jiān)測。

4.現(xiàn)場察看無菌試驗所需的設(shè)備和器具。其中，主要設(shè)備包括：恒溫培養(yǎng)箱（真菌、細(xì)菌）、恒溫水浴箱、壓力蒸汽滅菌器、電熱干燥箱、電子天平、光學(xué)顯微鏡、集菌儀、過濾裝置（無油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子）等；（從試驗安全性考慮，建議陽性對照試驗使用生物安全柜）

主要器具有：試管及試管架、酒精燈、75%乙醇棉、滅菌刻度吸管(1ml)、滅菌平皿（9cm）、錐形瓶、三角燒瓶、滅菌剪刀、鑷子等。

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)采用可靠方法對與供試液接觸的所有器具滅菌，通常置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃30分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2小時。器具滅菌后必須做好標(biāo)識，標(biāo)明滅菌的時間和使用有效期。器皿在滅菌后，最多1周即用完。檢查時還應(yīng)注意清點培養(yǎng)皿的個數(shù)，與試驗記錄中反映的培養(yǎng)基個數(shù)是否一致。

5.對照生產(chǎn)企業(yè)有關(guān)無菌試驗的管理制度、操作規(guī)程等相關(guān)技術(shù)文件，要求檢驗人員當(dāng)場操作或口述無菌檢驗的過程。

（1）培養(yǎng)基制備

生產(chǎn)企業(yè)可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2℃～25℃、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在1年內(nèi)使用。

無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進(jìn)行。

（2）供試品的無菌檢查

無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗條件應(yīng)與驗證的方法相同。無菌試驗過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對微生物無毒性。

無菌操作時，對供試品容器表面應(yīng)用適宜的消毒液進(jìn)行徹底消毒，如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無菌器材（如帶有除菌過濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣，再按無菌操作起開容器取出內(nèi)容物。

（3）培養(yǎng)及觀察

含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

在觀察試驗結(jié)果的過程中，還應(yīng)考慮假陰性的影響。其中影響假陰性發(fā)生的因素有：培養(yǎng)條件不能支持微生物的生長（促生長試驗）；在無菌試驗中，產(chǎn)品中釋放出了殺菌或微生物電解的物質(zhì)（消除抑菌物質(zhì)）；從滅菌處理到培養(yǎng)有一定的時間間隔（確定滅菌后產(chǎn)品的儲存條件及儲存時間）。

（4）結(jié)果判斷

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷：

①若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；②若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長，否則試驗無效。

當(dāng)符合下列至少一個條件時，方可判試驗結(jié)果無效：①無菌檢查試驗所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求；②回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；③供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。

試驗若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。

6.查閱試驗記錄。完整的試驗記錄應(yīng)明確包含下列幾類信息：

（1）樣品記錄，至少應(yīng)包括：取樣日期、樣品名稱、樣品規(guī)格、樣品批號、取樣地點、取樣方式、取樣人、原始試驗記錄序號。

（2）滅菌物品制作記錄

①培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)基批號、培養(yǎng)基用量（g）、蒸餾水用量（ml）、培養(yǎng)基分裝數(shù)量、滅菌日期、滅菌的實際溫度和壓力、滅菌時間、制作人、培養(yǎng)基存放地點和有效期等。

②器具：器具名稱、器具數(shù)量、滅菌日期、滅菌的實際溫度和壓力、滅菌時間、制作人、器具存放地點、有效期等。

（3）原始試驗記錄，至少應(yīng)包括：記錄名稱、記錄序號、樣品名稱、樣品唯一性標(biāo)識（例如：樣品號）、樣品規(guī)格、樣品批號、滅菌批號、樣品數(shù)量、取樣日期、檢驗日期、檢驗依據(jù)、主要試驗設(shè)備及器具、試驗方法、試驗環(huán)境條件、試驗結(jié)果（每日觀察的結(jié)果）、試驗結(jié)論、檢測人、復(fù)核人等。

（4）廢棄物處理記錄，至少應(yīng)包括：廢棄物形態(tài)（固體、液體）、廢棄物數(shù)量、滅菌時間和壓力、經(jīng)辦人、處理日期等。

三、其他應(yīng)注意的問題

1.生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)確保樣品具有代表性：試驗樣品應(yīng)從常規(guī)產(chǎn)品中能夠代表加工過程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機(jī)的。試驗樣品的選擇和處理技術(shù)應(yīng)明確，以免對樣品上所含的微生物的數(shù)量和種類造成污染和改變。試驗樣品可以選擇制造過程中的不合格產(chǎn)品，它們應(yīng)該代表這個生產(chǎn)批的加工程序和條件。用于試驗的不合格產(chǎn)品應(yīng)不會影響無菌測試的有效性。

2.生產(chǎn)企業(yè)對于供試品的選取、轉(zhuǎn)移過程要采取防止污染措施，確保試驗結(jié)果的可靠性。選取制作供試品的試驗樣品時，樣品包裝須完好無損，尤其是只有一層包裝的樣品。進(jìn)入無菌檢驗室的樣品若有兩層（或兩層以上）包裝的，須將外包裝在傳遞窗（或緩沖間）拆除后，傳入實驗室。

3.無菌檢驗中接觸供試品的試驗用具溫度不能過高以防可能存在的菌被燙死。對不同種類和不同批次的產(chǎn)品，在拆包裝及夾取樣品時，應(yīng)更換試驗用具（如：剪刀、鑷子）。

4.進(jìn)入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的外表都應(yīng)采用適用的方法進(jìn)行消毒處理（如：紫外燈照射不少于30分鐘），以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。出具試驗結(jié)果后，所有培養(yǎng)物須經(jīng)121℃高壓滅菌30分鐘的處理。

5.由于無菌檢驗時間跨度較長，因此過程的記錄應(yīng)能夠完整體現(xiàn)試驗的全過程，對于在試驗過程中出現(xiàn)的各種情況，均應(yīng)在記錄中客觀反映。

參考資料一：常見的名詞解釋（略）

參考資料二：無菌室空氣中菌落數(shù)的檢查（略）

參考資料三：供試品數(shù)量的選擇（略）

參考資料四：培養(yǎng)基的制備（略）

參考資料五：培養(yǎng)基的適用性檢查（略）

參考資料六：方法驗證試驗（略）

參考資料七：供試品處理及接種培養(yǎng)基（略）

參考資料八：對照試驗（略）

參考資料九：參考標(biāo)準(zhǔn)（略）