閆 偉 施壽榮 楊海明 鄒劍敏 王志躍*

（1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,揚(yáng)州225009;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所,揚(yáng)州 225003）

當(dāng)今社會(huì),在高密度的生產(chǎn)環(huán)境下,接種疫苗已成為防疫的關(guān)鍵措施,但由此而產(chǎn)生的免疫應(yīng)激卻對(duì)生產(chǎn)效果起到了很大的負(fù)面作用[1-2]。李建濤等[3]在研究中發(fā)現(xiàn)免疫應(yīng)激降低了肉仔雞的采食量。劉玉蘭等[4]在仔豬上的研究也表明免疫應(yīng)激可降低仔豬的采食量和日增重。精氨酸是一種半必需氨基酸,成年動(dòng)物在正常生理狀態(tài)下可以通過(guò)自身合成來(lái)滿足需要,但在應(yīng)激、創(chuàng)傷或快速生長(zhǎng)的情況下,機(jī)體對(duì)精氨酸的需求則會(huì)大大增加[5]。Javanmard等[6]研究發(fā)現(xiàn)L-精氨酸可緩解小鼠內(nèi)皮損傷。張?jiān)粕降萚7]的研究表明L-精氨酸可防止在熱應(yīng)激情況下小鼠胸腺和脾臟的萎縮。近年來(lái),人們對(duì)免疫應(yīng)激的研究主要集中在雞、豬以及小鼠上,而對(duì)養(yǎng)殖量日漸增長(zhǎng)的鵝的研究還比較缺乏。本試驗(yàn)以揚(yáng)州鵝為試驗(yàn)動(dòng)物,用脂多糖（LPS）刺激建立免疫應(yīng)激模型,并參照李建濤等[3]和劉玉蘭等[4]分別在肉仔雞和仔豬上的研究方法,在飼糧中添加0.5%和1.0%2個(gè)水平的L-精氨酸,旨在研究免疫應(yīng)激對(duì)鵝生長(zhǎng)發(fā)育的影響情況,同時(shí)探討緩解免疫應(yīng)激的可行方法,為養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

LPS,純度＞99%,血清型O55∶B5,Sigm a公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼糧

試驗(yàn)動(dòng)物選用揚(yáng)州鵝,各組均采用同一基礎(chǔ)飼糧,基礎(chǔ)飼糧配方參照NRC（1994）0～4周齡鵝的營(yíng)養(yǎng)需要量及當(dāng)前我國(guó)養(yǎng)鵝生產(chǎn)實(shí)際設(shè)計(jì),由于有關(guān)仔鵝的精氨酸需要量沒(méi)有確切的標(biāo)準(zhǔn),所以參照0～3周齡肉仔雞的需要量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行設(shè)定,基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用128只1日齡揚(yáng)州鵝公鵝,隨機(jī)分為A、B、C、D 4個(gè)組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8只鵝。1～14日齡各組均飼喂基礎(chǔ)飼糧,14日齡早晨空腹稱(chēng)重,之后A、B 2組繼續(xù)飼喂基礎(chǔ)飼糧,C、D 2組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.5%和1.0%的L-精氨酸。在15、17、19日齡09:00時(shí),分別對(duì)仔鵝逐個(gè)進(jìn)行免疫應(yīng)激刺激1次,頸部皮下注射濃度為1mg/m L的LPS溶液或生理鹽水,注射量為0.5m L/kg BW（李建濤等[3]）,具體設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。21日齡早晨空腹稱(chēng)重,并從每組取8只鵝,頸靜脈放血致死,稱(chēng)量?jī)?nèi)臟器官重量,并測(cè)定腸道長(zhǎng)度。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Com position and nutrient levels of the basal diet （air-dry basis,%）

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 體重和體增重 分別在14、21日齡早晨（空腹12 h）,逐只稱(chēng)量揚(yáng)州鵝體重,記錄,并計(jì)算體增重,體增重=21日齡體重-14日齡體重。

1.4.2 內(nèi)臟及免疫器官重量及腸道長(zhǎng)度 分別摘取心臟、肝臟、肌胃、脾臟、胸腺、腔上囊,用蒸餾水沖洗干凈,用濾紙吸干后稱(chēng)重。其中肌胃稱(chēng)重前去除其食糜及內(nèi)角質(zhì)層,并用水洗凈。用皮尺測(cè)量腸道總長(zhǎng)度。

1.4.3 免疫器官指數(shù) 計(jì)算脾臟、胸腺和腔上囊的指數(shù)。器官指數(shù)（‰）=器官重×1 000/活體重。

1.5 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行One-way ANOVA分析,組間多重比較采用LSD法,數(shù)據(jù)表示方法采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié) 果

2.1 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝14～21日齡體重變化的影響

由表3可以看出,B組的體增重顯著小于A組（P＜0.05）,C組的體增重與A組沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）,而D組的體增重極顯著小于A組（P＜0.01）。在21日齡體重方面,各組之間均差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝免疫器官發(fā)育的影響

由表4可以看出,各組鵝在胸腺重和胸腺指數(shù)方面,均沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）;B、C、D 3組脾臟重均大于A組,但均差異不顯著（P＞0.05）;C、D 2組脾臟指數(shù)均顯著高于A組（P＜0.05）,B組與其他各組均差異不顯著（P＞0.05）;B、D 2組腔上囊重與A組相比顯著降低（P＜0.05）;B組腔上囊指數(shù)顯著小于A組（P＜0.05）,C、D 2組與A組均差異不顯著（P＞0.05）。

表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組Table 2 Experiment design and groups

表3 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝體重變化的影響Table 3 Ef fec ts of L-A rg on w eight changes of LPS challenged goslings（g）

表4 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝體免疫器官發(fā)育的影響Table 4 Effec ts o f L-A rg on the development o f immune organs of LPS challenged goslings（g）

2.3 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝內(nèi)臟器官發(fā)育的影響

由表5可以看出,各組鵝心臟、肝臟、肌胃的重量均無(wú)顯著差異（P＞0.05）;B、D 2組的腸道總長(zhǎng)度顯著小于A組（P＜0.05）,而C組與A組差異不顯著（P＞0.05）。

表5 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝內(nèi)臟器官發(fā)育的影響Tab le 5 Effects o f L-A rg on the development of internal organs of LPS challenged goslings（g）

3 討 論

3.1 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝體增重的影響

在免疫應(yīng)激情況下,動(dòng)物機(jī)體代謝產(chǎn)生的腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素等因子增多[8],從而引發(fā)全身炎性反應(yīng),致使動(dòng)物體溫升高,繼而使一些酶的活性降低,動(dòng)物表現(xiàn)出厭食、嗜睡等生理現(xiàn)象。此時(shí)動(dòng)物體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也由在骨骼肌沉積轉(zhuǎn)向了參與分解代謝來(lái)維持免疫系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn)[1]。隨著采食活動(dòng)的削弱以及機(jī)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率的降低,畜禽的生長(zhǎng)也受到了限制。本試驗(yàn)使用LPS刺激仔鵝,結(jié)果表明,免疫應(yīng)激對(duì)仔鵝的生長(zhǎng)產(chǎn)生了不利影響,但基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%的精氨酸可以緩解免疫應(yīng)激產(chǎn)生的不利影響。

精氨酸作為一種半必需氨基酸,正常情況下,機(jī)體自身合成就可滿足生長(zhǎng)需要,但在免疫應(yīng)激情況下,機(jī)體對(duì)其需求量增加。精氨酸是重要的免疫調(diào)節(jié)器,具有促進(jìn)內(nèi)分泌激素（生長(zhǎng)激素等）釋放的功能[9]。本試驗(yàn)在飼糧中添加0.5%精氨酸,可能因此促進(jìn)了生長(zhǎng)激素的釋放,從而間接地緩解了免疫應(yīng)激對(duì)仔鵝增重的影響,而當(dāng)精氨酸添加量達(dá)到1.0%時(shí),反而會(huì)消除原有精氨酸的良性作用,這可能與動(dòng)物機(jī)體中精氨酸與賴氨酸存在的拮抗作用有關(guān)[10],過(guò)量的精氨酸打破了理想氨基酸模式,抑制了賴氨酸發(fā)揮作用,從而降低了氨基酸的利用率。

3.2 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝免疫器官發(fā)育的影響

免疫器官是抵御病原菌侵襲的主要器官,同時(shí)它們也較容易受到免疫刺激的影響。腔上囊是重要的外周免疫器官,可為B淋巴細(xì)胞成熟分化提供必要的場(chǎng)所[11]。本試驗(yàn)中LPS刺激所產(chǎn)生的應(yīng)激使仔鵝腔上囊發(fā)生萎縮,這與張樂(lè)萃等[12]和崔亞利等[13]在肉雞熱應(yīng)激方面的研究結(jié)果一致。精氨酸影響免疫器官生長(zhǎng)的機(jī)制可能是精氨酸促進(jìn)了生長(zhǎng)激素、胰島素等激素的釋放,而這些激素可能增加了淋巴細(xì)胞的增殖;另外,精氨酸可在一氧化氮（NO）合酶的作用下生成NO,低濃度的NO可能增加T淋巴細(xì)胞的有絲分裂[14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,飼糧中添加0.5%精氨酸緩解了免疫應(yīng)激對(duì)法氏囊的不利影響。Kelley[15]和Gross[16]的研究表明雛雞在接種弱毒苗后脾臟淋巴細(xì)胞明顯增多。本試驗(yàn)中LPS刺激使仔鵝脾臟增大,可能是在免疫應(yīng)激下,脾臟淋巴細(xì)胞增殖以暫時(shí)提高機(jī)體免疫能力的結(jié)果[17]。而本試驗(yàn)也表明在飼糧中添加精氨酸可加強(qiáng)脾臟的這種變化,另外,精氨酸也可維持巨噬細(xì)胞活性,加強(qiáng)機(jī)體抵抗外界病原侵襲的能力[18]。

3.3 L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激仔鵝內(nèi)臟器官發(fā)育的影響

免疫應(yīng)激可能對(duì)畜禽生長(zhǎng)性能的發(fā)揮產(chǎn)生長(zhǎng)遠(yuǎn)的影響,其原因可能是影響了畜禽內(nèi)臟器官及消化系統(tǒng)的發(fā)育。本試驗(yàn)表明,免疫應(yīng)激對(duì)3周齡仔鵝心臟、肝臟、肌胃的影響不顯著,這與劉玉蘭等[4]在仔豬上的研究一致。范志勇等[19]在仔豬上的研究發(fā)現(xiàn),斷奶應(yīng)激會(huì)影響仔豬腸道的發(fā)育,而本試驗(yàn)研究表明,免疫應(yīng)激也會(huì)影響仔鵝腸道的發(fā)育,從而降低腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收利用,影響其增重。

精氨酸是動(dòng)物體蛋白質(zhì)合成的必需氨基酸,所有組織均利用其合成細(xì)胞漿蛋白和核蛋白[20]。精氨酸可以顯著增加內(nèi)皮原細(xì)胞（EPCs）的數(shù)量[21],此外,精氨酸還是合成多胺的前體物質(zhì),而多胺是黏膜生長(zhǎng)發(fā)育所必需的物質(zhì)[22]。本試驗(yàn)中精氨酸在一定程度上減輕了免疫應(yīng)激所產(chǎn)生的不利影響,但精氨酸的添加量并不是越多越好,當(dāng)超過(guò)最適添加量（本試驗(yàn)表明為0.5%）時(shí),更多的添加可能會(huì)抵消原有添加量的作用,從而使精氨酸的添加起不到良好效果。這一結(jié)論與王紀(jì)亭等[23]在肉雞上的研究是不相符的,對(duì)此我們還將做進(jìn)一步的研究予以證實(shí)。

4 結(jié) 論

①LPS免疫應(yīng)激對(duì)仔鵝的生長(zhǎng)和早期器官發(fā)育產(chǎn)生了不利影響。

②飼糧中添加0.5%精氨酸對(duì)免疫應(yīng)激有一定的緩解作用。

③添加過(guò)多（1.0%）精氨酸會(huì)消除原有精氨酸的良性作用。

[1] 徐衛(wèi)丹,林日春.免疫應(yīng)激與畜禽生產(chǎn)及蛋白質(zhì)代謝的研究現(xiàn)狀[J].廣東飼料,2005,44（1）:22-23.

[2] 易正戟.免疫應(yīng)激對(duì)畜禽生長(zhǎng)及代謝的影響[J].飼料博覽,2000（9）:35-37.

[3] 李建濤,蔡輝益,劉國(guó)華,等.免疫應(yīng)激對(duì)肉仔雞采食量、能量及氮消化率和內(nèi)源氮損失的影響[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,28（6）:90-94.

[4] 劉玉蘭,黃晶晶,范 偉,等.L-精氨酸對(duì)脂多糖刺激斷奶仔豬生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)和內(nèi)臟器官重量的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2008,20（2）:140-145.

[5] Duggan C,Gannon J,W alker W A.Protective nutrients and func tional foods for the gastrointestinal tract[J].American Journal of Clinical Nutrition, 2002,75:789-808.

[6] Javanm ard S H,Gheisari Y,Soleim ani M,et al. Effect ofL-arginine on circulating endothelial progenitor cells in hypercholestero lem ic rabbits[J].International Journal of Cardiology,2010（6）:16-19.

[7] 張?jiān)粕?羅海吉,吉雁鴻,等.L-精氨酸對(duì)熱應(yīng)激大鼠胸腺和脾臟的影響[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2004, 20（5）:596-597.

[8] Takahashi K,Mashiko T,Akiba Y.Effect of dietary concentration of xylitol on grow th in male broiler chicks during imm unological stress[J].Poultry Science,2000,79:743-747.

[9] Butcher G D,M iles R D.Interrelationship of nutrition and immunity[Z].Institute of Food and Agricultural Sciences,University o f Florida,Gainesville,Florida,2002,6:1-10.

[10] 周小秋,楊 鳳,周安國(guó),等.鱉賴氨酸和精氨酸拮抗研究[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,21（2）:157-160.

[11] 袁中彪,陳代文.精氨酸的免疫作用[J].飼料工業(yè), 2003,24（3）:11-14.

[12] 張樂(lè)萃,劉世華,王述柏,等.熱應(yīng)激對(duì)肉雞免疫器官形態(tài)學(xué)影響的研究[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,1998,24 （7）:24-25.

[13] 崔亞利,鄭世學(xué),胡永芬,等.熱應(yīng)激后雛雞免疫器官組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)觀察[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2004,27（2）:93-96.

[14] 郭廣倫,劉玉蘭.精氨酸對(duì)動(dòng)物免疫功能影響研究進(jìn)展[J].中國(guó)飼料,2006,20:27-29.

[15] Kelley K W.G row th hormone,lymphocytes and macrophages[J].Biochem ical Pharmaco logy,1989,38 （5）:705-713.

[16] G ross W B.Effect of exposure to a short-duration sound on the stress response of ch ickens[J].Avian Disease,1990,34:759-761.

[17] 陳黎龍,朱曉彤,江青燕,等.三肽囊素對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化、IL-2和IL-6分泌及其基因表達(dá)的影響[J].動(dòng)物學(xué)報(bào),2006,52（1）:170-174.

[18] 黃 軍,姜國(guó)均,周幫會(huì),等.中藥“增免散”對(duì)雞腔上囊細(xì)胞凋亡和外周血T細(xì)胞亞群的影響[J].中國(guó)家禽,2006,28（17）:19-21.

[19] 范志勇,王康寧.豬生長(zhǎng)激素釋放因子基因?qū)υ缙跀嗄套胸i生長(zhǎng)性能、免疫功能及消化道發(fā)育的影響[J].中國(guó)畜牧雜志,2003,39（3）:16-17.

[20] 雷 奇,車(chē)向榮.仔豬精氨酸營(yíng)養(yǎng)的研究進(jìn)展[J].養(yǎng)豬,2008（2）:13-15.

[21] Shaghayegh H J,Yousof G,M asoud S,et al.Effect o fL-arginine on circu lating endothelial p rogenitor cells in hypercho lesterolem ic rabbits[J].International Journal of Cardiology,2009（1）:11-13.

[22] Duggan C,Gannon J,W alker W A.Protective nutrients and func tional foods for the gastrointestinal tract[J].American Journal o f Clinical Nutrition, 2002,75:789-808.

[23] 王紀(jì)亭,孫存孝,楊在賓,等.肉雞日糧中賴氨酸與精氨酸適宜比例的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),1999, 30（3）:217-224.

*Correspond ing au thor,p rofessor,E-m ail:dkw zy@263.net

（編輯 何麗霞）