凌 希

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010）

肩周膠囊是由防風(fēng)、葛根、甘草等提取制成的中藥制劑，具祛風(fēng)散寒、養(yǎng)血通絡(luò)的功效，主治肩痹，用于肩關(guān)節(jié)周圍炎、肩臂疼痛等癥。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定該制劑中5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2996型高效液相色譜儀。5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；肩周膠囊（市售，批號(hào)分別為 090801，090802，090803，090901，090902）；水為純化水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DiamonsilTMC18柱（200 mm × 4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，按表1比例進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。理論塔板數(shù)按5-O-甲基維斯阿米醇苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫比例（%）

2.2 溶液制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取0.8 g，精密稱定，加甲醇30 mL，超聲處理40 min，過(guò)濾，甲醇少量分次洗滌殘?jiān)?，合并濾液及洗滌液，濾液濃縮至約2 mL，加中性氧化鋁1.5 g，攪拌均勻，干燥，置中性氧化鋁柱（100～200目，1.5 g，內(nèi)徑1 cm）上，用 60 mL水洗脫，水洗液用水飽和的正丁醇提取5次，每次30 mL，合并水飽和的正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，移至25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.025 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按肩周膠囊制備工藝，制備缺防風(fēng)的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：照上述色譜條件，取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀。結(jié)果供試品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有一相同色譜峰，陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間無(wú)相應(yīng)吸收峰，表明陰性對(duì)照品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾（圖 1）。

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液 2，4，8，16，20μL，注入液相色譜儀，以5-O-甲基維斯阿米醇苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=3158224 X-172655，r=0.9999（n=5）。結(jié)果表明5-O-甲基維斯阿米醇苷進(jìn)樣量在0.05～0.50μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定5-O-甲基維斯阿米醇苷峰峰面積。結(jié)果的 RSD=0.8%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，10，14 h 進(jìn)樣。結(jié)果5-O-甲基維斯阿米醇苷峰峰面積值的 RSD=0.5%（n=5），表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：按擬訂的含量測(cè)定方法，取同一批樣品6份，依法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果樣品中5-O-甲基維斯阿米醇苷的平均含量為 0.16 mg/粒，RSD=1.20%（n=6）。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品6份，分別加入適量對(duì)照品溶液，依法測(cè)定5-O-甲基維斯阿米醇苷含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測(cè)定

按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定，結(jié)果批號(hào)為090801，090802，090803，090901，090902 的 5 批樣品中，5-O-甲基維斯阿米醇苷含量分別為 0.16，0.14，0.16，0.13，0.13 mg/粒。

3 討論

參考2005年版《中國(guó)藥典（一部）》[1]選擇流動(dòng)相，多次試驗(yàn)表明，以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，能使樣品中5-O-甲基維斯阿米醇苷峰與相鄰色譜峰達(dá)到基線分離，且分離良好，峰形對(duì)稱，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，故該高效液相色譜法可用于肩周膠囊的質(zhì)量控制。

表2 5-O-甲基維斯阿米醇苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：102.