梁春慧，宋更申（1.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院藥劑科，石家莊市050051；.河北省藥品檢驗(yàn)所，石家莊市050011）

鹽酸倍他司?。˙etahistine hydrochloride）是治療眩暈、不穩(wěn)定心絞痛等心血管疾病的常用藥。鹽酸倍他司汀在合成過(guò)程中，使用了乙醇、異丙醇、二氯甲烷等3種有機(jī)溶劑，這些溶劑會(huì)對(duì)人體健康造成危害，控制其殘留量對(duì)保證藥品質(zhì)量和用藥安全有重要意義。關(guān)于其殘留溶劑的研究，尚未見國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道。本文根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[1]的指導(dǎo)原則和《中國(guó)藥典》2005年版[2]的相關(guān)規(guī)定，并參考有關(guān)文獻(xiàn)[3]，采用頂空氣相色譜法，以水為溶解介質(zhì)，同時(shí)測(cè)定上述3種溶劑的殘留量。結(jié)果表明，本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于該藥物中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀與7694E型頂空進(jìn)樣器、B.02.01-SR1工作站（美國(guó)Agilent公司）；BP 211D型電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

鹽酸倍他司汀原料（國(guó)內(nèi)S公司，批號(hào)：2009-05-028、2009-05-029、2009-05-030，含量分別為：99.1%、99.3%、99.2%）；乙醇、異丙醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺均為色譜純（美國(guó)Fisher公司）；試驗(yàn)用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱（60 m×530 μm×1 μm），柱溫：70℃；氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；分流進(jìn)樣，分流比：1∶1，進(jìn)樣口溫度：180 ℃；載氣：氮?dú)猓魉伲?.0 mL·min－1；頂空進(jìn)樣，平衡溫度：90 ℃，平衡時(shí)間：30 min；頂空瓶加壓時(shí)間：0.2 min；進(jìn)樣時(shí)間：1 min；定量環(huán)體積：1 mL；定量環(huán)溫度：100℃；傳輸線溫度：110℃。

2.2 溶液的制備

對(duì)照品貯備液：精密稱取乙醇100 mg、異丙醇100 mg、二氯甲烷12 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加50%的N，N-二甲基甲酰胺溶液50 mL使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

對(duì)照品溶液：精密量取對(duì)照品貯備液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，即得。

供試品溶液：精密稱取本品約0.1 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水5 mL，密封，振搖使溶解，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”

圖1 氣相色譜圖A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；1.乙醇；2.異丙醇；3.二氯甲烷Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substances solution；B.sample solution；1.alcohol；2.isopropyl alcohol；3.dichloromethane

圖1 結(jié)果表明，乙醇、異丙醇、二氯甲烷分離良好，理論板數(shù)均不低于10 000。鹽酸倍他司汀和水不干擾有機(jī)溶劑的測(cè)定。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取對(duì)照品貯備液10、10、5、5、5、2 mL分別置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5 mL，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of linear ranges（n＝6）

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算乙醇、異丙醇、二氯甲烷的峰面積的RSD分別為1.1%、0.8%、1.3%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取本品（批號(hào)：2009-05-028）約0.1 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共6份，精密加水5 mL，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，檢出本品中乙醇含量平均為0.04%，RSD＝1.5%，異丙醇平均含量為0.02%，RSD＝1.2%，二氯甲烷均未檢出。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號(hào)：2009-05-028）0.1 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共9份，分別精密加入對(duì)照品貯備液0.40、0.50、0.60 mL，各3份，再分別用水稀釋至5.0 mL，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，按外標(biāo)法計(jì)算，乙醇、異丙醇、二氯甲烷的平均回收率分別為99.6%、99.4%、98.6%，RSD分別為0.1%、0.1%、0.3%，結(jié)果見表2。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下的供試品溶液（批號(hào)：2009-05-028），于室溫下放置0、1、2、4、8、12 h，分別按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果，樣品中乙醇在12 h內(nèi)測(cè)定的峰面積的RSD＝1.3%，異丙醇在12 h內(nèi)測(cè)定的峰面積的RSD＝1.0%，二氯甲烷均未檢出，表明本溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of recovery tests

2.9 檢出限與定量限

用逐步稀釋法進(jìn)行測(cè)定，以信噪比約為3時(shí)計(jì)算檢出限，以信噪比約為10時(shí)計(jì)算定量限，結(jié)果乙醇、異丙醇、二氯甲烷的檢出限分別為1.89、1.11、0.49 μg·mL－1，定量限度分別為5.71、3.36、1.51 μg·mL－1。

2.10 樣品中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定

取3批樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，外標(biāo)法計(jì)算3種溶劑的含量，結(jié)果樣品中乙醇含量均為0.04%，異丙醇均為0.02%，二氯甲烷均未檢出，符合《中國(guó)藥典》要求。

3 討論

筆者在預(yù)試驗(yàn)中先后選擇了HP-1、HP-20M、DB-624等不同極性的色譜柱，以乙醇、異丙醇、二氯甲烷3種溶劑在DB-624上的峰形和分離度最佳。

試驗(yàn)曾考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時(shí)間對(duì)樣品測(cè)定的影響，結(jié)果表明，樣品在70、80、90℃的頂空溫度下均穩(wěn)定，為了提高檢測(cè)靈敏度，本試驗(yàn)選擇90℃作為頂空溫度；本品在30、40 min的頂空平衡時(shí)間內(nèi)得到的峰面積基本一致，故選擇30 min作為頂空平衡時(shí)間。研究中發(fā)現(xiàn)頂空瓶中溶液的體積對(duì)色譜峰面積有較大影響，試驗(yàn)分別考察了20 mL頂空瓶中溶液的體積分別為2、3、5、6 mL，以及10 mL頂空瓶中溶液的體積分別為1、2、3 mL時(shí)的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)選擇20 mL頂空瓶中溶液的體積為5 mL時(shí)，各色譜峰的峰面積最大。有關(guān)最佳氣液平衡狀態(tài)還有待于進(jìn)一步研究。

本方法3種有機(jī)溶劑的定量限為1.51～5.71 μg·mL－1，靈敏度完全可以滿足鹽酸倍他司汀原料藥中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定的需要。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：343.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：54～57.

[3]宋更申，姜建國(guó)，劉紅莉，等.頂空氣相色譜法測(cè)定美羅培南中有機(jī)溶劑的殘留量[J].中國(guó)藥房，2010，21（5）：447.