張 穩(wěn) ,唐 瑩 ,譚勝真 ,雍蘇南 ,何澤云 ,譚元生 *
(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410007;2.南華大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 衡陽(yáng) 421001)
高血壓病是當(dāng)前最常見(jiàn)的心血管疾病之一,其具有“三高三低”的特點(diǎn)。目前已認(rèn)識(shí)到降壓治療不能消除與高血壓病相關(guān)的心血管疾病危險(xiǎn),在血壓被控制后,這些危險(xiǎn)因子依然存在[1]。高血壓病引起的左心室肥厚(LVH)已被公認(rèn)是與死亡率密切相關(guān)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,也是發(fā)生各種心血管病并發(fā)癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。本研究通過(guò)觀察SHR血壓及心臟改變來(lái)進(jìn)一步探討復(fù)方七芍降壓片的可能作用機(jī)制,為原發(fā)性高血壓的預(yù)防、診斷和治療提供客觀、有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果報(bào)道如下。
1.1.1 動(dòng)物 14 周齡 SHR 60 只,體質(zhì)量(206±17.5)g,健康雄性,批號(hào):SCXK(滬 2008-0003);14周齡 WKY 大鼠12 只,體質(zhì)量(213±19.4)g,健康雄性;批號(hào):SCXK(滬2008-0003);均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。
1.1.2 藥物 復(fù)方七芍降壓片:每片5.5 g,湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科制備,批號(hào):080103;卡托普利片:每片25 mg,湖南湘雅制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):0809106;硫酸氫氯吡格雷片:每片25 mg,深圳信立泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào):0810112。
1.1.3 儀器 MP150十六導(dǎo)生理記錄儀(美國(guó)BIOPAC),BS-600L型高精度電子天平 (上海友聲衡器有限公司制造);BTS-20型數(shù)字彩色圖像顯微分析系統(tǒng) (英國(guó)華粵行公司);YH-4型壓力換能器 (航天醫(yī)學(xué)工程研究所);KDC-2046型低溫離心機(jī)(中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司,中德光電儀器分公司);AF100型制冰機(jī) (意大利SCOTSMAN);D-8型切 割 式勻 漿 器 (德 國(guó) ART公司);LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī) (廣州市華俊醫(yī)療器械有限公司)。
1.2.1 動(dòng)物分組及給藥方法 將60只SHR稱(chēng)質(zhì)量,按體質(zhì)量大小排序編號(hào),按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組,即復(fù)方七芍降壓片高劑量組42.12 g/(kg·d)、 中劑量組21.06g/(kg·d)、 低劑量組 10.53g/(kg·d)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)復(fù)方七芍高、中、低劑量組)、卡托普利組 0.0135g/(kg·d)、硫酸氫氯吡格雷片組 0.0135g/(kg·d);12 只 WKY 大鼠為空白組。復(fù)方七芍降壓片高、中、低劑量組,卡托普利組、硫酸氫氯吡格雷片組均以60 kg成人體表面積換算給藥。以上藥物用蒸餾水溶解稀釋?zhuān)? mL/(100 g·只)灌胃,1次/d,連續(xù)4周??瞻捉M以2 mL蒸餾水開(kāi)始灌胃,1次/d,連續(xù)4周。
1.2.2 SHR一般情況觀察 體質(zhì)量、皮毛、飲食、易激惹、大小便等。
1.2.3 血壓測(cè)定 溫度控制在18~22℃;濕度控制在55%~70%;室內(nèi)自然光線(xiàn)。應(yīng)用尾袖法連接小動(dòng)物血壓儀和MP150十六導(dǎo)生理記錄儀測(cè)量大鼠血壓。測(cè)量前將大鼠固定在錐形白布袋中,放入(37±1)℃電熱加溫箱內(nèi)預(yù)熱10 min后置于測(cè)壓臺(tái)上測(cè)壓。待MP150十六導(dǎo)生理記錄儀的記錄系統(tǒng)出現(xiàn)規(guī)律的脈搏波后,將血壓儀加壓至圖像上脈搏波振幅為0,再加壓升高30 mmHg,緩慢放氣后再次看到規(guī)律性振幅時(shí)血壓計(jì)數(shù)即為收縮壓。大鼠安靜狀態(tài)下測(cè)量3次,取其均值作為該樣本的血壓。
1.2.4 HE染色 觀察各組大鼠心臟形態(tài)、顏色、質(zhì)地、病變特征。制備心臟組織切片:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將大鼠處死,迅速取出心臟,0.9%氯化鈉注射液沖洗心臟表面及內(nèi)部血液,10%多聚甲醛固定24 h以上,常規(guī)乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,于心臟的中部每隔1 mm連續(xù)切取數(shù)個(gè)5μm厚的切片,做HE染色,光鏡下觀察心臟形態(tài)、顏色、質(zhì)地、病變特征性改變。
1.2.5 左心室重量指數(shù)(LVMI)的測(cè)定 觀察各組大鼠心臟及左心室形態(tài)、顏色、質(zhì)地、病變特征。左室濕質(zhì)量(包括室間隔)/體質(zhì)量之比:大鼠處死后迅速取出心臟,除去大血管殘根和結(jié)締組織,沿房室環(huán)剪去心房,沿室間隔剪去右心室,保留室間隔,左心室肌以濾紙吸干后稱(chēng)質(zhì)量,計(jì)算 LVMI。
數(shù)據(jù)以“x±s”表示,應(yīng)用 SPSS 11.5 軟件,采用方差分析和t檢驗(yàn)。
各組大鼠的體質(zhì)量、皮毛、飲食、大小便、易激惹程度在實(shí)驗(yàn)全過(guò)程中均未見(jiàn)明顯異常。用藥4周后,復(fù)方七芍降壓片高劑量組性情比空白組稍溫和,中、低劑量組和卡托普利組、硫酸氫氯吡格雷片組性情與空白組比較無(wú)明顯差異。
各組給藥前后比較,復(fù)方七芍降壓片低、中、高劑量組及卡托普利組SHR血壓均有不同程度降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中復(fù)方七芍降壓片高劑量組療效顯著;硫酸氫氯吡格雷片組及空白組血壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)果見(jiàn)表 1。
表1 給藥前后各組大鼠收縮壓的比較 ,mmHg,n=12)
表1 給藥前后各組大鼠收縮壓的比較 ,mmHg,n=12)
注:與空白組、硫酸氫氯吡格雷片組比較*P<0.05。
藥物劑量給藥前收縮壓 給藥后收縮壓
光鏡下可見(jiàn):空白組(圖1a)心肌纖維排列整齊,心肌細(xì)胞大小、形態(tài)正常;卡托普利組(圖1b)心肌間質(zhì)活躍增生,細(xì)胞橫徑增大,核明顯增大;硫酸氫氯吡格雷片組(圖1c)心肌細(xì)胞輕度肥大;復(fù)方七芍低劑量組(圖1d)心肌間質(zhì)輕度增生,心肌細(xì)胞輕-中度肥大;復(fù)方七芍中劑量組(圖1e)心肌間質(zhì)增生明顯,心肌細(xì)胞輕-中度肥大;復(fù)方七芍高劑量組(圖1f)心肌纖維排列較整齊,細(xì)胞橫徑略有增大。
圖1 復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR左室心肌組織的影響光鏡圖(HE×400)
大體病理觀察:與硫酸氫氯吡格雷片組比較,復(fù)方七芍降壓片高劑量組心臟大,顏色、質(zhì)地未見(jiàn)明顯變化,剪開(kāi)后可見(jiàn)左心室壁增厚,乳頭肌和肉柱增粗,心腔略有縮小。
與空白組比較,各組差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與硫酸氫氯吡格雷片組比較,復(fù)方七芍降壓片低、中、高劑量組及卡托普利組均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。說(shuō)明復(fù)方七芍降壓片低、中、高劑量組及卡托普利組均有不用程度的逆轉(zhuǎn)左心室肥厚作用。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 各組大鼠給藥后LVMI的比較 ,n=12)
表2 各組大鼠給藥后LVMI的比較 ,n=12)
組 別空白組復(fù)方七芍高劑量組復(fù)方七芍中劑量組復(fù)方七芍低劑量組卡托普利組硫酸氫氯吡格雷片組藥物劑量 g/(kg·d)—42.120 21.060 10.530 0.0135 0.0135 LVMI(mg/g)2.69±0.15 3.85±0.20 4.11±0.16 4.05±0.20 4.17±0.18 4.98±0.33
高血壓病歸屬中醫(yī)學(xué)“眩暈”、“頭痛”、“風(fēng)?!狈懂?,其病位在絡(luò)脈,陰虛陽(yáng)亢是其基本病機(jī),瘀血貫穿于高血壓病的整個(gè)病程中,因此臨床治療高血壓病時(shí)應(yīng)緊扣陰虛、陽(yáng)亢、瘀血這三個(gè)病理環(huán)節(jié)[3]。高血壓病患者若火甚耗氣傷陰,氣陰(血)不足,血脈凝澀或瘀,或痰濕遏阻,氣機(jī)失暢,致痰瘀阻絡(luò);若久病體衰,肝腎陰虛,或陰陽(yáng)俱損,氣血失和,或血行不暢,因虛致瘀。故不論病機(jī)屬虛屬實(shí)均可導(dǎo)致脈絡(luò)瘀滯,即“久病必虛,久病必瘀”。
復(fù)方七芍降壓片是根據(jù)高血壓病肝腎陰虛、瘀血阻絡(luò)的病理特點(diǎn),經(jīng)過(guò)多年的臨床實(shí)踐研制的有效驗(yàn)方。由三七、白芍、桑寄生、地龍、丹參、鉤藤、天麻、杜仲、羅布麻、葛根、炒香附、甘草等組方,諸藥合用,共奏補(bǔ)益肝腎、活血化瘀之效。臨床應(yīng)用十余年,卓有療效。既往研究表明[4]:復(fù)方七芍降壓片有改善血液高凝狀態(tài),達(dá)到治療高血壓病血栓前狀態(tài)的作用。故本課題在采用西藥組卡托普利片對(duì)照的同時(shí),采用硫酸氫氯吡格雷片組對(duì)照,以進(jìn)一步探討復(fù)方七芍降壓片的抗凝作用。
血壓高可引起嚴(yán)重的心、腦、腎并發(fā)癥,對(duì)于高血壓病患者,首要任務(wù)是降低血壓。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者結(jié)合西醫(yī)學(xué)理論對(duì)中醫(yī)藥治療高血壓病進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)及臨床研究對(duì)復(fù)方作用機(jī)制的研究取得了很大的進(jìn)展。中藥對(duì)高血壓病造成的靶器官損害的保護(hù)作用,也成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn),突出表現(xiàn)為逆轉(zhuǎn)左室肥厚,保護(hù)腎功能,抑制血管平滑肌細(xì)胞增生及其凋亡,從而延緩血管重塑。研究表明[5]SHR在4周齡已經(jīng)存在左心室肥厚;考慮在體狀態(tài)下,SHR左心室功能檢測(cè)異常與諸多因素有關(guān)[6],如左心室肥大,激素類(lèi)物質(zhì)水平,腎上腺素能刺激,心肌間質(zhì)組織,心肌內(nèi)冠狀動(dòng)脈循環(huán)情況,以及能量代謝異常等等;故本研究采用離體心臟測(cè)量LVMI。小動(dòng)物血壓儀和MP150十六導(dǎo)生理記錄儀測(cè)量大鼠血壓準(zhǔn)確性較好,尤以測(cè)量收縮壓更為精確,故動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中廣泛采用該法測(cè)量大鼠收縮壓。本研究結(jié)果表明:使用過(guò)復(fù)方七芍降壓片及卡托普利片的SHR在降低尾動(dòng)脈收縮壓的同時(shí),左心室功能障礙的進(jìn)展得到一定程度的控制,表現(xiàn)為L(zhǎng)VMI下降。
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