李成艦，夏新華

（1.湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 衡陽 420001；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208）

降糖靈顆粒系由山茱萸、菟絲子、丹參等組方制備而成，臨床用于治療腎性糖尿病具有良好的療效。為控制其質(zhì)量，對該處方制劑中重要中藥——山茱萸中的主要藥理活性成分馬錢苷進(jìn)行含量測定，以確保該新制劑的質(zhì)量。

1 實驗材料

1.1 藥物

馬錢苷對照品 （中國藥品生物制品檢定所，060809）；甲醇與乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；山茱萸等藥材（均購自湖南省三湘中藥飲片有限公司，山茱萸按照藥典方法測得含量為0.66%，符合規(guī)定要求[1]）。

1.2 儀器

Waters 1525高效液相色譜儀，Waters 2487型紫外檢測器 （美國），Breeze工作站，C-R3A數(shù)據(jù)處理器；MA11O電子分析天平（上海天平儀器廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇[1，3]

kromasil bt14764 C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（9∶91）；檢測波長：240 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃。在此條件下馬錢苷的理論塔板數(shù)在3 000以上，分離度符合要求。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在五氧化二磷中干燥48 h的馬錢苷對照品10.0 mg，用80%的甲醇定溶于50 mL量瓶中，精密量取2 mL置于10 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得（每1 mL含馬錢苷40μg）。

2.3 供試品溶液的制備[2-4]

取本品適量，研細(xì)，取細(xì)粉約1.5 g，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，稱質(zhì)量，置于三角燒瓶中超聲提取30 min，稱質(zhì)量，補充減少的溶劑，搖勻，過0.45μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察

分別精密量取對照品溶液 4、6、8、10，12 μL 進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸直線方程為

Y=1857X-1430，r=0.9997

結(jié)果表明馬錢苷在160～480ng范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 干擾試驗

取缺山茱萸的陰性樣品適量，照供試品溶液的制備方法制備即得。分別精密量取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10μL，按照上述色譜條件測定。供試品色譜圖中，在與馬錢苷對照品色譜圖相應(yīng)的位置上有一相同的色譜峰，而陰性樣品色譜圖中，在與馬錢苷對照品相應(yīng)位置上無峰，說明陰性無干擾，見圖1。

圖1 干擾試驗的HPLC圖譜

2.6 精密度試驗

精密量取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積積分值。6次峰面積積分值的RSD為0.8%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

分別精密量取同一供試品溶液10μL，于0、1、2、4、8、24h進(jìn)樣，測定其馬錢苷峰面積積分值。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)峰面積積分值的RSD為0.5%，說明該制劑在24h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品約1.5g，精密稱定，共6份，按“2.3”項下方法制備溶液。分別精密量取此溶液和對照品溶液10μL進(jìn)樣，測定其馬錢苷含量。得平均含量為5.47×10-4g/g，RSD為0.4%。表明方法的重復(fù)性好。

2.9 回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品 （含量為5.47×10-4g/g）約0.75g，共6份，分別精密加入馬錢苷對照品溶液（200 μg/mL）2mL，然后按“2.3”項下方法制備溶液，并進(jìn)樣10μL測定含量，計算，得平均回收率為99.4%，RSD為 2.5%，見表 1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.10 樣品的測定

按擬定的含量測定方法，測定3批樣品中馬錢苷的含量，重復(fù)測2次，測定樣品中馬錢苷的平均含量為5.45×10-4g/g。 結(jié)果見表 2。

表2 樣品中馬錢苷的含量測定結(jié)果 （10-4g/g）

3 結(jié)論

2005版藥典的藥材山茱萸中馬錢苷的含量測定中其流動相為乙腈-水（15∶85）[1]20，但是對于該復(fù)方的含量測定不適合；本實驗考察了流動相甲醇和水的配比為15∶85、13∶87、11∶89、10∶90、9∶91 以及 8∶92 等， 最終確定流動相為乙腈-水（9∶91）為最佳。

2005版藥典測定山茱萸中馬錢苷的含量的提取方法是回流1h；而以參考資料來看，超聲提取方法效果更好[2]，故本實驗以超聲提取和藥典回流提取方法比較，得供試品溶液的制備方法以超聲30min為佳。

該含量測定方法簡便易行，重復(fù)性好，可以作為降糖靈顆粒中馬錢苷的質(zhì)量控制。

[1]中華人民共和國藥典2005版[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：20.

[2]晏桂敏，林燕飛，孫靜蕓，等.山茱萸中馬錢苷含量測定的樣品處理方法改進(jìn)[J].中國藥業(yè)，2005，14（10）：37-38.

[3]侯 放.高效液相色譜法測定杞菊地黃口服液中馬錢苷的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，25（6）：962-963.

[4]戴 冰，王誠元，鄒雙華，等.不同來源山茱萸中馬錢苷含量的測定[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，26（1）：21-22.