HPLC法測(cè)定枇杷和楊梅中維生素C的含量

朱慶珍

（蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院實(shí)訓(xùn)中心，江蘇蘇州215008）

HPLC法測(cè)定枇杷和楊梅中維生素C的含量

朱慶珍

（蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院實(shí)訓(xùn)中心，江蘇蘇州215008）

建立枇杷和楊梅中VC含量測(cè)定的高效液相色譜法。采用Kromasil100-5C18柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），流動(dòng)相為0.1%草酸溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，線性范圍9.64 mg/L～48.20 mg/L，相關(guān)系數(shù)0.9999，檢測(cè)限為0.69 ng，枇杷的加標(biāo)回收率為94.0%～104.6%，楊梅的加標(biāo)回收率為93.7%～108.4%。

高效液相色譜法；VC；枇杷；楊梅

Abstract：A method for determination of Vitam C in Loquat and Myrica rubra by High Performance Liquid Chromatography was established,Kromasil100-5C18column（4.6 mm×250 mm,5 μm）was used.The mobile phase was 0.1%Oxalic acid,Detected at 254 nm by Ultraviolet detector,Linear range was 9.64 mg/L-48.20 mg/L（r=0.9999）,the Detection limit was 0.69 ng,The recoveries of Loquat was 94.0%-104.6%and of Myrica rubra was 93.7%-108.4%.

Key words：High Performance Liquid Chromatography;Vitam C;Loquat;Myrica rubra

枇杷是我國(guó)南方特有的珍稀水果,其果肉柔軟多汁，酸甜適度，味道鮮美，被譽(yù)為“果中之皇”。枇杷不但味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，而且有很高的保健價(jià)值?！侗静菥V目》記載“枇杷能潤(rùn)五臟，滋心肺”，中醫(yī)傳統(tǒng)認(rèn)為，枇杷果有祛痰止咳、生津潤(rùn)肺、清熱健胃之功效。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)更證明，枇杷果中含有豐富的維生素、苦杏仁甙和白蘆梨醇等防癌、抗癌物質(zhì)。

楊梅原產(chǎn)我國(guó)溫帶、亞熱帶濕潤(rùn)氣候的山區(qū)，主要分布在長(zhǎng)江流域以南、海南島以北，即北緯20度至31度之間，與柑桔、枇杷、茶樹、毛竹等分布相仿。楊梅營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是天然的綠色保健食品。據(jù)測(cè)定：優(yōu)質(zhì)楊梅果肉的含糖量為12%～13%，含酸量為0.5%～1.1%，富含纖維素、礦質(zhì)元素、維生素和一定量的蛋白質(zhì)、脂肪、果膠及8種對(duì)人體有益的氨基酸，其果實(shí)中鈣、磷、鐵含量要高出其他水果10多倍。楊梅生長(zhǎng)在遠(yuǎn)離大城市的山區(qū)，極少或沒有被大氣污染，栽培管理粗放，病蟲危害較少，具有“綠色無公害水果”之美譽(yù)。

枇杷和楊梅因其提取液有顏色，采用滴定和比色法測(cè)定其中的VC有干擾，本文采用高效液相色譜法測(cè)定其中的VC含量，既簡(jiǎn)單快速，又無干擾，準(zhǔn)確度又高。

1 樣品與方法

1.1 樣品、試劑與儀器

枇杷：蘇州東山的冠玉枇杷；楊梅：蘇州東山的大葉細(xì)地楊梅。草酸與VC標(biāo)準(zhǔn)品：市售；水：二次去離子水；液相色譜儀：戴安公司DIONEX高效液相色譜儀，P680HPLC泵，PDA100檢測(cè)器，色譜柱：Kromasil100-5C18柱，流動(dòng)相：0.1%的草酸溶液；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的配制

準(zhǔn)確稱取VC標(biāo)準(zhǔn)品0.0482 g置100 mL量瓶中，加1%的草酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

1.2.2 樣品的處理

取一定量的枇杷和楊梅果肉置1%的草酸溶液中研磨（草酸的量以將樣品覆蓋為宜，因枇杷果肉較滑而難以研磨，應(yīng)用紗布將果肉包裹起來放入草酸溶液中研磨），定容后，離心分離，取上清液經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾后進(jìn)樣。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

VC在245 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。張秀梅[1]等測(cè)定菠蘿中的VC采用240 nm，龐燕軍[2]、張培[3]等測(cè)定飲料和食品中的VC采用262 nm,劉長(zhǎng)建[4]測(cè)定青椒中的VC采用254 nm。分別于3種波長(zhǎng)處測(cè)定了枇杷和楊梅中的VC，結(jié)果見表1。

表1 不同波長(zhǎng)下枇杷和楊梅中VC的測(cè)定結(jié)果Table 1 Test result of vitamin C in Loquat and Myrica rubra on different wavelengths

試驗(yàn)結(jié)果表明，3種波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果沒有明顯差異。采用254 nm波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 提取液濃度的選擇

VC在酸性條件下較穩(wěn)定，所以采用草酸溶液來提取。開始時(shí)用0.1%的草酸溶液提取，測(cè)定結(jié)果明顯偏低，后來采用1%的草酸溶液研磨提取，定容后離心分離，取得了良好的結(jié)果。

2.3 線性與范圍

準(zhǔn)確量取 2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品貯備液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻后分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，以峰面積與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品濃度作線性回歸，得到線性回歸方程為Y=0.3942X-0.6812，相關(guān)系數(shù)r=0.9999（n=5），線性范圍為9.64 mg/L～48.20 mg/L。

2.4 檢測(cè)限

當(dāng)信噪比約為3時(shí)，VC的檢測(cè)限為0.69 ng。

2.5 回收率

取一定量的枇杷和楊梅果肉置1%草酸中，加入一定量的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液共同研磨，測(cè)定回收率。結(jié)果枇杷的加標(biāo)回收率為94.0%～104.6%，楊梅的加標(biāo)回收率為93.7%～108.4%。

2.6 樣品的測(cè)定

按1.2.2方法測(cè)定枇杷和楊梅中的VC含量，結(jié)果見表2，色譜圖見圖1、圖2、圖3。

表2 枇杷和楊梅中維生素C含量的測(cè)定結(jié)果Table 2 The amount of vitamin Cin Loquat and Myrica rubra on 254 nm mg/100 g

3 結(jié)論

用該法測(cè)定枇杷和楊梅中的VC含量不受樣品顏色的影響，方便，快速，無干擾，線性良好，準(zhǔn)確度高。

[1]張秀梅，杜麗清，謝江輝，等.高效液相色譜法測(cè)定菠蘿果實(shí)維生素 C 含量[J].福建果樹，2007(1)：20-22

[2]龐燕軍，陳靖，曹春英，等.高效液相色譜法測(cè)定食品和飲料中的維生素C含量[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18(5)：555-556

[3]張培，馮慧予.高效液相色譜法測(cè)定保健食品和飲料中的維生素C[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2008，20(4)：311-313

[4]劉長(zhǎng)建.青椒中維生素C的高效液相色譜分析[J].大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004,23(3)：229-230

Determination of Vitam C in Loquat and Myrica rubra by High Performance Liquid Chromatography

ZHU Qing-zhen
（Suzhou Polytechnic Institute of Agriculture Teaching and Training Center，Suzhou 215008，Jiangsu,China）

2009-08-11

朱慶珍（1963—），女（漢），高級(jí)工程師，研究生，主要從事化工分析與藥物分析工作。