朱祥松 張德軍
1 武漢大學(xué)(430000)
2 湖北省鄂州市藥品檢驗(yàn)所(436000)
金剛藤顆粒為我市某醫(yī)院制劑,由百合科植物菝葜Smilas China L.的根莖經(jīng)加工制成,具有清熱解毒,消腫散結(jié)的功效,臨床用于附件炎和附件炎性包塊的治療。菝葜屬植物中含有甾體皂苷、黃酮、植物甾醇等多種化學(xué)成分[1]。該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定采用薄層掃描法,操作繁瑣,專屬性不強(qiáng),且使用毒性較強(qiáng)的苯作為溶劑。本文參考文獻(xiàn)[2]采用了HPLC法對(duì)其中薯蕷皂苷的水解產(chǎn)物薯蕷皂苷元進(jìn)行含量測(cè)定,方法簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,為該制劑質(zhì)量控制提供了有效方法。
1.1 儀器
LC-2000型高效液相色譜儀,包括P2000輸液泵、UV2000紫外檢測(cè)器、TJ2000色譜工作站(北京創(chuàng)新通恒有限公司);BS21S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);SK-3300超聲儀(功率300w,頻率40kHz,上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。
1.2 試藥
薯蕷皂苷元對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)1359-200001);金剛藤顆粒(鄂州市某醫(yī)院,批號(hào)為20090321、20090615、20091216);乙腈為色譜純;水為二次重蒸水,其它試劑均為分析純。
2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性
色譜柱:Kromasil-100 C18 (250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(90∶10);檢測(cè)波長(zhǎng):203nm;流速:1.0mL/min;柱溫:35℃;進(jìn)樣量:20μL。理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)算應(yīng)不少于4000。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取經(jīng)60℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對(duì)照品適量,加乙腈超聲使溶解,制成每1mL含0.2mg的溶液,即得。
圖1 HPLC圖譜
表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)
表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果
2.2.2 供試品溶液的制備
取本品,研細(xì),稱取粉末約10g,精密稱定,置索氏提取器中,加乙醇適量,浸漬過(guò)夜,加熱回流至提取液近無(wú)色,回收溶劑至約100mL,加熱回流水解2.5h,放冷,用石油醚(60~90℃)振搖提取4次,每次40mL,合并石油醚提取液,回收溶劑至干,殘?jiān)右译嫒芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL量瓶中,加乙腈至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
2.2.3 陰性樣品溶液的制備
按處方比例和制法制成不含金剛藤的陰性樣品,按照上法制備陰性樣品溶液。
2.3 干擾試驗(yàn)
在上述色譜條件下,供試品溶液與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致,薯蕷皂苷元峰與其它峰完全分離、峰形較理想,陰性樣品無(wú)干擾。見圖1。
2.4 線性關(guān)系考察
精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品12.05mg,置25mL容量瓶中,加乙腈超聲使溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為儲(chǔ)備液。分別量取儲(chǔ)備液1.0、2.0、3.0、4.0mL至5mL容量瓶中,加乙腈稀釋至刻度,搖勻。取上述4種濃度的溶液及儲(chǔ)備液,共5個(gè)梯度濃度的溶液,用定量環(huán)分別進(jìn)樣20μL,記錄色譜圖,以進(jìn)樣量(X,μg)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,方程為:Y=3.5689×104X+4.2868×103,r=0.9998。結(jié)果表明:在1.928~9.640μg范圍內(nèi),薯蕷皂苷元的進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。.
2.5 精密度試驗(yàn)
取對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,每次20μL,測(cè)定薯蕷皂苷元峰面積,RSD為0.9%(n=5)。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
將供試品溶液常溫放置,分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣20μL,測(cè)定薯蕷皂苷元峰面積,RSD為1.5%(n=5)。結(jié)果表明,供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
取批號(hào)為20091216供試品5份,分別按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照上述相同色譜條件測(cè)定,計(jì)算,薯蕷皂苷元含量的RSD為1.9%(n=5)。
2.8 加樣回收試驗(yàn)
精密稱取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下各份余下的已測(cè)定含量的金剛藤顆粒5份,每份約5g,分別加入對(duì)照品約2mg,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,進(jìn)樣20μL,結(jié)果見表1。
2.9 樣品含量測(cè)定
取金剛藤顆粒,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,取對(duì)照品溶液與供試品溶液分別進(jìn)樣20μL,測(cè)定,以外標(biāo)法(峰面積)計(jì)算含量,結(jié)果見表2。
3.1 菝葜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]中供試品回流時(shí)間為2h,本試驗(yàn)中由于供試品量的增加,為考察水解是否完全,選用了2.0、2.5、3.0h進(jìn)行水解,結(jié)果三者測(cè)定值分別為0.36、0.45、0.44mg/g,故選擇2.5h。
3.2 為考察供試品是否提取完全,分別進(jìn)行了4、5、6次提取,結(jié)果三者測(cè)定值分別為0.43、0.44、0.43mg/g,說(shuō)明4次已基本提取完全,故選擇提取4次。
3.3 薯蕷皂苷元在乙腈中振搖溶解不太理想,通過(guò)超聲處理可得到較好溶解。
[1]趙鐘祥,馮育林,阮金蘭等.菝葜化學(xué)成分及其抗氧化活性的研究[J].中草藥,2008,39(7):975-977.
[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2005年版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:216.