HPLC測(cè)定金剛藤顆粒中薯蕷皂苷元的含量

朱祥松 張德軍

1 武漢大學(xué)（430000）

2 湖北省鄂州市藥品檢驗(yàn)所（436000）

金剛藤顆粒為我市某醫(yī)院制劑，由百合科植物菝葜Smilas China L.的根莖經(jīng)加工制成，具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效，臨床用于附件炎和附件炎性包塊的治療。菝葜屬植物中含有甾體皂苷、黃酮、植物甾醇等多種化學(xué)成分[1]。該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定采用薄層掃描法，操作繁瑣，專屬性不強(qiáng)，且使用毒性較強(qiáng)的苯作為溶劑。本文參考文獻(xiàn)[2]采用了HPLC法對(duì)其中薯蕷皂苷的水解產(chǎn)物薯蕷皂苷元進(jìn)行含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為該制劑質(zhì)量控制提供了有效方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2000型高效液相色譜儀，包括P2000輸液泵、UV2000紫外檢測(cè)器、TJ2000色譜工作站（北京創(chuàng)新通恒有限公司）；BS21S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SK-3300超聲儀（功率300w，頻率40kHz,上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

薯蕷皂苷元對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)1359-200001）；金剛藤顆粒（鄂州市某醫(yī)院，批號(hào)為20090321、20090615、20091216）；乙腈為色譜純；水為二次重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜柱：Kromasil-100 C18 （250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（90∶10）；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)算應(yīng)不少于4000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)60℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對(duì)照品適量，加乙腈超聲使溶解，制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

圖1 HPLC圖譜

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品，研細(xì)，稱取粉末約10g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醇適量，浸漬過(guò)夜，加熱回流至提取液近無(wú)色，回收溶劑至約100mL，加熱回流水解2.5h，放冷，用石油醚（60～90℃）振搖提取4次，每次40mL，合并石油醚提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)右译嫒芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

按處方比例和制法制成不含金剛藤的陰性樣品，按照上法制備陰性樣品溶液。

2.3 干擾試驗(yàn)

在上述色譜條件下，供試品溶液與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，薯蕷皂苷元峰與其它峰完全分離、峰形較理想，陰性樣品無(wú)干擾。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品12.05mg，置25mL容量瓶中，加乙腈超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。分別量取儲(chǔ)備液1.0、2.0、3.0、4.0mL至5mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。取上述4種濃度的溶液及儲(chǔ)備液，共5個(gè)梯度濃度的溶液，用定量環(huán)分別進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，方程為：Y=3.5689×104X+4.2868×103，r=0.9998。結(jié)果表明：在1.928～9.640μg范圍內(nèi)，薯蕷皂苷元的進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。.

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μL，測(cè)定薯蕷皂苷元峰面積，RSD為0.9%（n=5）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將供試品溶液常溫放置，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣20μL，測(cè)定薯蕷皂苷元峰面積，RSD為1.5%（n=5）。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為20091216供試品5份，分別按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照上述相同色譜條件測(cè)定，計(jì)算，薯蕷皂苷元含量的RSD為1.9%（n=5）。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下各份余下的已測(cè)定含量的金剛藤顆粒5份，每份約5g，分別加入對(duì)照品約2mg，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20μL，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定

取金剛藤顆粒，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取對(duì)照品溶液與供試品溶液分別進(jìn)樣20μL，測(cè)定，以外標(biāo)法（峰面積）計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

3 討 論

3.1 菝葜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]中供試品回流時(shí)間為2h，本試驗(yàn)中由于供試品量的增加，為考察水解是否完全，選用了2.0、2.5、3.0h進(jìn)行水解，結(jié)果三者測(cè)定值分別為0.36、0.45、0.44mg/g，故選擇2.5h。

3.2 為考察供試品是否提取完全，分別進(jìn)行了4、5、6次提取，結(jié)果三者測(cè)定值分別為0.43、0.44、0.43mg/g，說(shuō)明4次已基本提取完全，故選擇提取4次。

3.3 薯蕷皂苷元在乙腈中振搖溶解不太理想，通過(guò)超聲處理可得到較好溶解。

[1]趙鐘祥,馮育林,阮金蘭等.菝葜化學(xué)成分及其抗氧化活性的研究[J].中草藥,2008,39(7):975-977.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2005年版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:216.