賴諾普利微粒載藥量與包封率影響因素研究

吳俊珠，王成軍，金 拓

（1.大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000；2.上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海 200240）

賴諾普利微粒載藥量與包封率影響因素研究

吳俊珠1，2，王成軍1，金 拓2

（1.大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000；2.上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海 200240）

目的：考察處方因素對賴諾普利聚乙烯醇微粒（LIS-PVA-MP）載藥量與包封率的影響。方法：噴霧干燥法制備LIS-PVAMP，單因素考察聚乙烯醇（PVA）的醇解度、分子量、濃度和料液中投料比對載藥量與包封率的影響，對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果：PVA醇解度、濃度、料液中投料比三個因素的不同水平組的指標(biāo)均值存在顯著性差異（α＝0.05），PVA分子量的不同水平組的指標(biāo)均值無顯著性差異（α=0.05）。結(jié)論：PVA醇解度、濃度、料液中投料比對微粒載藥量與包封率影響顯著。

賴諾普利；微粒；載藥量；包封率

賴諾普利（lisinopril，LIS）是口服長效血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI），臨床常用于高血壓和心力衰竭等疾病的治療。目前，心血管疾病的治療和二級預(yù)防常常需要多種藥物聯(lián)合使用，雖有必要，患者的順應(yīng)性會成為一個問題，開發(fā)攜帶、使用方便的復(fù)方劑型（Polypill）是一個解決方案〔1-6〕。聚乙烯醇（polyvinyl alcohol，PVA）是藥物制劑中常用的一種水溶性輔料，其理化性質(zhì)穩(wěn)定，且具有良好的生物相容性，已被美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)用于眼用制劑和口服片劑〔7〕。據(jù)LiaoY.H.等〔8〕報(bào)導(dǎo)，PVA可提高噴霧干燥法制備蛋白微粒的穩(wěn)定性。為使LIS與其它活性成分制備復(fù)方制劑時有良好的穩(wěn)定性，現(xiàn)以PVA為載體采用噴霧干燥法〔9〕制備賴諾普利聚乙烯醇微粒（lisinopril-loaded polyvinyl alcohol micro-particles，LIS-PVA-MP）。本研究中采用單因素試驗(yàn)考察PVA的醇解度、分子量、濃度和料液中投藥比四個處方因素對LIS-PVA-MP的載藥量與包封率的影響，為復(fù)方制劑的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 OPDT-8噴霧干燥機(jī)（上海大川原干燥設(shè)備有限公司）；島津高效液相色譜儀（LC-10AT VP泵，SPD-10A VP紫外檢測器，Chromato Solution-Light色譜工作站），HT-130柱溫箱；pHS-3TC數(shù)顯pH計(jì)（上海天達(dá)儀器有限公司）；KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑 LIS（批號050912，符合USP 28）及LIS精制品（純度為99.91%，批號050912，符合USP 28），大洋化工有限公司提供。磷酸二氫鉀、磷酸、氫氧化鈉、鹽酸（分析純），己烷磺酸鈉（含量≥98.0），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。乙腈（色譜純），上海方可唯奇生物化學(xué)技術(shù)有限公司提供。PVA（Mw1 3 000～23 000，醇解度87%～89%），PVA（Mw31 000～5 0 000，醇解度87%～89%），PVA（Mw85 000～124 000，醇解度87%～89%），PVA（Mw13 000～23 000，醇解度98%）購自美國ALDRICH公司。

2 方法及結(jié)果

2.1 LIS-PVA-MP的制備工藝 稱取PVA加入適量去離子水，水浴加熱溶解，冷卻后加入LIS攪拌使之溶解配制含藥料液，采用進(jìn)風(fēng)溫度185℃、出風(fēng)溫度95℃，霧化器轉(zhuǎn)速38Hz，旋風(fēng)分離器壓差0.65kPa，噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP。

2.2 分析方法的建立

2.2.1 檢測波長的選擇 以0.1mol·L-1鹽酸（簡稱溶劑）為溶劑，配制濃度為100μg·mL-1的LIS溶液及400μg·mL-1的PVA溶液，以溶劑為空白，在紫外可見分光光度計(jì)上200～400nm進(jìn)行掃描，LIS在215nm附近處有最大吸收峰，而PVA在此波長處幾乎無吸收，故選擇215nm為檢測波長。

2.2.2 色譜條件 色譜柱：Shim-Pack VP-0DS（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-pH2.5磷酸鹽緩沖液（含0.005 3mol·L-1己烷磺酸鈉）20∶80；流速：0.5mL·min-1；檢測波長：215nm；柱溫：55℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性 在上述色譜條件下，以0.1mol·L-1鹽酸為溶劑，配制LIS精制品溶液、供試品溶液，分別取LIS精制品溶液、供試品溶液及空白樣品溶液（取微粒處方用量的PVA，按供試品溶液制備方法配制）各20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，PVA對測定無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 色譜圖

2.2.4 線性范圍與最低檢測限 精密稱定LIS精制品10mg，用溶劑約50mL溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，得精制品儲備液1。精密吸取儲備液1 50mL于100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，得儲備液2。分別精密吸取儲備液2 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL于10mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，配制一系列不同濃度的LIS溶液。在上述色譜條件下，分別取20μL進(jìn)樣，每個濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，以LIS峰面積平均值（A）對其濃度（C）回歸，得回歸方程：A=30217C+13774，r=0.9998

LIS在5～100μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好，最低檢測限為8ng（信噪比S/N=3）。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 日內(nèi)精密度：取20μg·mL-1精制品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積RSD=0.84%。日間精密度：3d內(nèi)分別配制20μg·mL-1精制品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積RSD=1.36%。

2.2.6 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取LIS精制品10.0，11.0，10.4mg，按1∶3配比，精密稱取PVA，加入，混勻，得3份模擬微粒，分別置于燒杯中，加入溶劑約50mL，60℃水浴加熱5min，完全溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻。再對每份溶液繼續(xù)分別精密吸取0.5mL，置于10mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，共配制得低、中、高3個濃度的9份溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

樣品的平均回收率為100.3%，RSD為1.0%（n= 9），符合含量測定要求。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 對同一批號的LIS-PVA-MP，

分別精密稱定5份，按“2.3”項(xiàng)下操作配制供試品溶液，并配制對照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算微粒載藥量，結(jié)果見表2。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

微粒中LIS載藥量的平均值為39.62%，RSD為1.56%。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將供試品溶液置于冰箱中4℃保存，于0，2，6，8，12，24h取樣，按上述色譜條件進(jìn)樣，6次所得峰面積的RSD為0.66%，表明樣品溶液于4℃保存在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3 載藥量與包封率的測定 取LIS-PVA-MP適量精密稱定，置于燒杯中，加入溶劑約50mL，60℃水浴加熱5min，完全溶解，放冷，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，0.45μM濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；同時以0.1mol·L-1鹽酸為溶劑，配制LIS精制品溶液作為對照液，按上述色譜條件，分別取供試品溶液及對照液各20μL進(jìn)樣，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，按微粒中LIS的百分含量（%，w／w）計(jì)算載藥量，實(shí)際藥物含量與理論藥物含量比值的百分率計(jì)算包封率（Encapsulation efficiency%，EE%）。

2.4 單因素考察影響LIS-PVA-MP載藥量與包封率的處方因素

2.4.1 PVA的醇解度 采用分子量為13000～23000、醇解度（hydrolysis，HD）分別為87%～89%和98%的PVA，配制PVA濃度為4%（w／v）、LIS-PVA投料比為1∶2（w／w）的料液，采用“2.1”項(xiàng)下所述工藝噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP。

分別取微粒適量，精密稱定，置于燒杯中，按“2.3”項(xiàng)下操作配制供試品溶液，并配制對照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法求含量，計(jì)算載藥量、包封率，結(jié)果見表3。

表3 PVA醇解度對LIS-PVA-MP載藥量、包封率的影響（n=3）

PVA醇解度為87%～89%和98%的LIS-PVAMP，載藥量分別為（26.84±0.24）%，（28.06±0.40）%，包封率分別為（80.52±0.71）%，（84.18±1.21）%。對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析（One—Way ANOVA），PVA醇解度為87%～89%和98%的兩組LIS-PVA-MP載藥量均值之間具有顯著性差異（α=0.05）；兩組LISPVA-MP包封率均值之間具有顯著性差異（α= 0.05）。

2.4.2 PVA的分子量 采用醇解度為87%～89%、分子量分別為13 000～23 000、31 000～50 000、85 000～124000的PVA，配制PVA濃度為4%（w／v）、LIS-PVA投料比為1∶2（w/w）的料液，采用“2.1”項(xiàng)下所述工藝噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP。

分別取微粒適量，精密稱定，置于燒杯中，按“2.3”項(xiàng)下操作配制供試品溶液，并配制對照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法求含量，計(jì)算載藥量、包封率，結(jié)果見表4。

表4 PVA分子量對LIS-PVA-MP載藥量、包封率的影響（n=3）

PVA分子量為13000～23000、31000～50000、85 000～124 000的LIS-PVA-MP，載藥量分別為（26.84±0.24）%，（27.27±0.51）%，（27.79±0.45）%，包封率分別為（80.52±0.71）%，（81.83±1.53）%，（83.37±1.34）%。對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，PVA分子量為13 000～23 000、31 000～50 000、85 000～124 000的三組LIS-PVA-MP載藥量均值之間無顯著性差異（α=0.05）；三組LIS-PVA-MP包封率均值之間無顯著性差異（α=0.05）。

2.4.3 PVA的濃度 采用醇解度為87%～89%分子量為13 000～23 000的PVA，分別配制PVA濃度為2%、4%、6%（w／v），LIS-PVA投料比為1∶2（w／w）的料液，采用“2.1”所述工藝噴霧干燥法制備LIS-PVAMP。

分別取微粒適量，精密稱定，置于燒杯中，按“2.3”項(xiàng)下操作配制供試品溶液，并配制對照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法求含量，計(jì)算載藥量、包封率，結(jié)果見表5。

表5 PVA濃度對LIS-PVA-MP載藥量、包封率的影響（n=3）

PVA濃度為2%、4%、6%（w／v）的含藥料液所制備得到的LIS-PVA-MP，載藥量分別為（24.41± 0.56）%，（26.84±0.24）%，（28.05±0.50）%，包封率分別為（73.24±1.67）%，（80.52±0.71）%，（84.15± 1.51）%。對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，PVA濃度為2%、4%、6%的三組LIS-PVA-MP載藥量均值之間具有顯著性差異（α=0.05）；三組LIS-PVA-MP包封率均值之間具有顯著性差異（α=0.05）。

2.4.4 料液中LIS-PVA投料比 采用醇解度為87%～89%分子量為13 000～23 000的PVA，配制PVA濃度為4%（w／v），LIS-PVA投料比分別為2∶1（為混懸液）、1∶2、1∶4、1∶6（w／w）的料液，采用“2.1”所述工藝噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP。

分別取微粒適量，精密稱定，置于燒杯中，按“2.3”項(xiàng)下操作配制供試品溶液，并配制對照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法求含量，計(jì)算載藥量、包封率，結(jié)果見表6。

表6 投藥比對LIS-PVA-MP載藥量、包封率的影響（n=3）

投藥比分別為2∶1、1∶2、1∶4、1∶6（w／w）的料液所制備得到的LIS-PVA-MP，載藥量分別為（57.55± 0.91）%，（26.84±0.24）%，（19.37±0.17）%，（14.21± 0.14）%，包封率分別為（86.32±1.36）%，（80.52± 0.71）%，（96.89±0.88）%，（99.51±0.97）%。對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，投藥比分別為2∶1、1∶2、1∶4、1∶6的四組LIS-PVA-MP載藥量均值之間具有顯著性差異（α=0.05）；四組LIS-PVA-MP包封率均值之間具有顯著性差異（α=0.05）。

3 討論

3.1 色譜條件的確立 基于USP 28 LIS片含量測定方法〔10〕，以本文所述色譜系統(tǒng)，色譜柱為Shim-Pack VP-0DS（150mm×4.6mm，5um），其它條件按USP 28進(jìn)行，結(jié)果主峰拖尾嚴(yán)重，無法達(dá)到其規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。通過調(diào)整流動相pH、柱溫、流速，可獲得適宜保留時間，改善LIS以單峰洗脫時的峰形和拖尾，最終確立了文中的色譜條件，理論塔板數(shù)按LIS計(jì)算為1903，拖尾因子為1.3，符合USP28對本品的規(guī)定。3.2 單因素考察試驗(yàn) 通過單因素試驗(yàn)，在工藝參數(shù)相同條件下，PVA的醇解度對微粒載藥量、包封率的影響顯著，PVA（HD 98%）含藥料液制備的LISPVA-MP兩項(xiàng)指標(biāo)均值顯著高于PVA（HD 87%～89%）。PVA的分子量對微粒載藥量、包封率的影響并不顯著。PVA濃度對微粒載藥量、包封率的影響顯著，隨濃度增大，載藥量、包封率有所增大。料液中投藥比對微粒載藥量、包封率均具有顯著影響，投藥比為1∶2、1∶4、1∶6時，LIS完全溶解，隨投藥比增大，載藥量增大，但包封率降低；當(dāng)投藥比為2∶1時，LIS在料液中以混懸狀態(tài)存在，包封率的變化不符合LIS溶解狀態(tài)時的變化趨勢。

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，對各影響因素的范圍做適當(dāng)調(diào)整后，進(jìn)一步安排正交試驗(yàn)優(yōu)化處方及制備工藝參數(shù)。

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Investigation on the Formulation Factors Influencing Drug Loading Capacity and Encapsulation Efficiency of Lisinopril Loaded Polyvinyl Alcohol Micro-particles

WU Junzhu1,2，WANG Chengjun1，JIN Tuo2
（1.College of Pharmacy,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China; 2.College of Pharmacy,Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200240,China）

Objective:To investigate the formulation factors influencing drug loading capacity and encapsulation efficiency（EE）of lisinopril-loaded polyvinyl alcohol（PVA）micro-particles（LIS-PVA-MP）.Methods:LIS-PVA-MP was prepared by spray-drying and the formulation factors influencing drug loading capacity and EE such as hydrolysis degree（HD）of PVA,molecular weight（Mw）of PVA,concentration of PVA and weight ratio of lisinopril to PVA in the feed solution were investigated by single factor experiments.Results:Differences were analyzed by one-way analysis of variance（ANOVA）.At the 0.05 level,the means are significantly different in the factors such as HD of PVA,concentration of PVA and weight ratio of lisinopril to PVA in the feed solution.However,at the 0.05 level,the means are not significantly different in the factor of Mw of PVA.Conclusion:All of the three factors,HD of PVA,concentration of PVA and weight ratio of lisinopril to PVA in the feed solution,have a significant influence on drug loading capacity and EE of LIS-PVA-MP.

lisinopril;micro-particles;drug loading capacity;encapsulation efficiency

R972［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［文章編號］1672-2345（2010）02-0006-05

大理學(xué)院科研基金資助項(xiàng)目（2007X39）

2009-09-25

吳俊珠，講師，主要從事藥劑學(xué)研究.

（責(zé)任編輯 蔣 康）