高效液相色譜-紫外檢測器法測定化妝品中的苯甲醇

田富饒 王旭強 鄭 瀚

(義烏出入境檢驗檢疫局綜合技術服務中心，義烏 322000)

苯甲醇又稱芐醇 (benzyl alcohol) 是一種芳香族醇，在多種化妝品中用作芳香族組分、防腐劑、溶劑和降粘劑，是近幾年來新增的防腐劑。我國和歐共體規(guī)定化妝品中最大允許質(zhì)量分數(shù)為1.0%。苯甲醇有麻醉作用，對眼部、皮膚和呼吸系統(tǒng)有強烈的刺激作用，吞食、吸入或皮膚接觸均對身體有害，攝入后引起頭痛、惡心、嘔吐、胃腸道刺激、驚厥、昏迷，嚴重時可導致死亡。目前苯甲醇的檢測主要集中在藥品(注射液)方面[1-6]，苯甲醇常用的檢測方法有高效液相色譜法[7，8]和氣相色譜法[9]。

筆者采用高效液相色譜技術建立了一種測定化妝品中苯甲醇含量的方法，該方法簡便、快速，所用試劑毒性小，能滿足對進出口化妝品中苯甲醇含量的監(jiān)管要求。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200型，配帶紫外檢測器(VWD)，美國安捷倫公司；

超聲波清洗器：D-78224型，德國Elma公司；

高速離心機：3-30K型，德國Sigma公司；

分析天平：AL204型，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；

超純水儀：Milli-Q型，美國密理博公司；

有機性樣品濾膜：0.45 μm；

甲醇：色譜純；

苯甲醇標準物質(zhì)(Lot：00907)：純度99.0%，德國Dr．Ehrenstorfer公司。

1.2 標準溶液的配制

精密稱取苯甲醇標準品0.111 6 g，用甲醇溶解后定容至100 mL容量瓶中，得到1.116 mg/mL的苯甲醇標準儲備液，于0～4℃冰箱保存。

分別精密量取一定體積的標準儲備液用甲醇稀釋成濃度為0.046 4、0.092 8、0.185 6、0.232、0.464 mg/mL標準工作溶液。

1.3 樣品前處理

以不含蠟質(zhì)的化妝品如護膚類、香波、粉類等作為樣品。準確稱取樣品1.000 g于25.0 mL具塞比色管中，加入甲醇至10.0 mL，震搖，使試樣與提取溶劑充分混勻，置于50℃水浴中加熱5 min(液體類樣品不需水浴加熱)，超聲波提取20 min，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，以5 000 r/min離心5 min，上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，濾液作為試樣溶液備用，同時做試劑空白。

1.4 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX ODS (4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流動相：水-甲醇(體積比65∶35)；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃；進樣量：10 μL；紫外(VWD)檢測器，檢測波長：210 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

在190～400 nm 波長范圍內(nèi)進行全波長掃描，苯甲醇在200 nm處有最大吸收，但是在檢測過程中發(fā)現(xiàn)過低的波長會造成基線漂移較大，從而影響定量的準確性；另外，甲醇的紫外透明界限是202 nm，水的透明界限是205 nm，同時本實驗以甲醇-水作為流動相和采用紫外檢測器檢測，紫外檢測器在低波長范圍內(nèi)較不穩(wěn)定，因為很多物質(zhì)在此區(qū)域的吸收會變大，直接表現(xiàn)為基線不穩(wěn)噪音較大，因此檢測波長選擇在有較大吸收的210 nm處[10]。在此條件下有較好的分離效果，干擾少，靈敏度高，分析速度快。

2.2 色譜柱及流動相的選擇

實驗選擇了Agilent ZORBAX Eclipse XDB -C18( 4.6 mm×250 mm, 5 μm)色譜柱和Agilent ZORBAX ODS ( 4.6 mm×250 mm, 5 μm)色譜柱及甲醇和不同比例的甲醇-水為流動相。試驗結(jié)果表明，在ZORBAX ODS柱上，少量調(diào)節(jié)兩相(甲醇-水)的比例，苯甲醇峰的保留時間變化不大，且理論塔板數(shù)、分離度和拖尾因子相近，符合系統(tǒng)適用性試驗的要求。在流動相為甲醇-水(體積比35∶65) 條件下分離效果最好，且分析時間短、峰型好、靈敏度高。因此實驗選擇Agilent ZORBAX ODS色譜柱和甲醇-水(體積比35∶65) 作為流動相。苯甲醇標準溶液色譜圖和潤膚乳樣品中苯甲醇的色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 苯甲醇標準溶液色譜圖

圖2 潤膚乳樣品中苯甲醇色譜圖

2.3 提取溶劑的選擇

根據(jù)苯甲醇稍溶于水，可與乙醇、乙醚、苯、氯仿、甲醇等有機溶劑混溶的性質(zhì)，同時兼顧本實驗所選擇的流動相系統(tǒng)，選擇了甲醇、甲醇-水作為提取溶劑。由于甲醇-水系統(tǒng)的提取會引入大量的水溶性雜質(zhì)，干擾檢測結(jié)果，經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，甲醇是理想的提取溶劑，且毒性相對較小，易于操作。

2.4 提取時間的確定

按照1.3樣品前處理方法，分別在10、15、20、25、30 min測定提取物的峰面積，結(jié)果見表1。

表1 提取時間的確定

根據(jù)表1數(shù)據(jù)，確定最佳提取時間為20 min。

2.5 線性方程和檢出限

將配制好的標準工作溶液(0.046 4～0.464 mg/mL)按照1.4條件進行高效液相色譜分析，以峰面積y與濃度x進行線性回歸，線性方程為y= 36.236x+84.964，相關系數(shù)為0.999 92。以3倍信噪比(S/N=3) 計算方法的檢出限為0.10 mg/kg。

2.6 精密度和加標回收率

取同一對照品溶液按1.4條件重復進樣測定6次，測得的苯甲醇含量分別為94.09、94.42、94.42、94.43、94.36、94.44 μg/mL，其相對標準偏差為0.14%，表明方法的精密度良好。

為驗證該方法的可靠性和準確性，以香水為樣品進行了加標回收試驗，經(jīng)反復檢測得出該樣品中苯甲醇的含量為65.77 mg/kg。稱取試樣0.950～1.050 g，加入3個不同濃度的標準溶液，每個濃度平行測定6次，按1.3方法進行樣品處理及1.4條件進行測定，加標回收率為82.3%～118.4%，結(jié)果見表2。

表2 香水的回收試驗結(jié)果(n=6)

2.7 樣品測定

按1.3方法進行樣品處理及1.4條件對來自6個不同企業(yè)的6款產(chǎn)品進行了苯甲醇含量的測定，結(jié)果見表3。

3 結(jié)語

采用高效液相色譜-紫外檢測器法，以水-甲醇體系作為流動相,對膏、乳、液、粉狀化妝品中苯甲醇的含量進行了測定。結(jié)果表明方法簡便易行，精密度好，色譜峰對稱性好，結(jié)果準確、可靠，而且未采用磷酸鹽及強酸體系，可以避免對儀器設備的損壞和腐蝕，能夠準確有效地檢測化妝品中苯甲醇的含量。該法的建立可為化妝品質(zhì)量監(jiān)督提供有力的技術支撐。

表3 樣品中苯甲醇含量的測定結(jié)果 mg/kg

[1] 薛玉榕, 薛玉玲. HPLC法測定勒馬回注射液中苯甲醇的含量[J].海峽藥學, 2008,20(4):46.

[2] 朱建平,張菁,劉云,等. HPLC法測定鹽酸林可霉素注射液中苯甲醇含量的研究[J].中國藥事,2011, 25(1):73-75.

[3] 尹紅霞, 葛海生, 趙康虎. HPLC法測定野木瓜注射液中苯甲醇的含量[J].中國藥師, 2011,14(2):283-284.

[4] 陳詠, 林紅. HPLC法測定魚肝油酸鈉注射液中苯甲醇的含量[J].海峽藥學, 2009, 21(11):71-72.

[5] 張慧, 楊化新, 徐康森. RP-HPLC法測定注射用溶劑中苯甲醇含量[J].藥物分析雜志, 2004，24 (4): 428-429.

[6] 張波, 張謙, 程曉平, 等.苯甲醇注射液含量的高效氣相色譜法測定[J].濟寧醫(yī)學院學報, 2008, 31(2):139.

[7] 趙同剛.化妝品衛(wèi)生規(guī)范[M].北京：軍事醫(yī)學科學出版社, 2007:239-241.

[8] 俞太尉, 李懷林.歐盟化妝品管理法規(guī)及檢測方法與指南[M].2版. 北京：中國輕工出版社，2010:354-357.

[9] 劉青, 陳文銳, 吳宏中，等.氣相色譜法測定化妝品中的防腐劑苯甲醇和苯氧基乙醇[J].檢驗檢疫科學, 2002, 12(1):34-35.

[10] 席海為,馬強,李強，等.高效液相色譜法對化妝品中17種致敏原的同時測定[J].分析測試學報,2010,29(1):46-50.