張 健 羅 輝 張 超 劉小彬 陳澤軍 謝 剛
光合菌發(fā)酵白酒丟糟條件研究
張 健 羅 輝 張 超 劉小彬 陳澤軍 謝 剛
從啤酒廠啤酒糟排水溝中以厭氧法分離得一株光合菌為菌種,對(duì)原料白酒丟糟進(jìn)行預(yù)處理,采用厭氧發(fā)酵裝置,以單因素與正交試驗(yàn)法對(duì)白酒丟糟半固態(tài)培養(yǎng)光合菌的條件進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,當(dāng)料水比1:10(干糟g:水g)、接種量10%(w/w)、光照強(qiáng)度890 Lx、發(fā)酵時(shí)間5 d、發(fā)酵溫度30℃、料層厚度3 cm,發(fā)酵后白酒干糟真蛋白含量可從11.7%(w/w)上升至30.2%(w/w)、粗纖維素從22.4%(w/w)下降至13.6%(w/w)、粗脂肪從 5.6%(w/w)上升至 6.7%(w/w)、粗灰分從 14.8%(w/w)下降至10.1%(w/w)、總磷從 0.5%(w/w)上升至 1.1%(w/w)、發(fā)酵干糟含水量為 10.2%(w/w),提高了白酒丟糟的飼用價(jià)值。
白酒丟糟;光合菌;發(fā)酵;蛋白;纖維素
白酒丟糟以干物質(zhì)計(jì)約含粗蛋白15%、粗纖維23%、脂肪或類(lèi)脂6%,還含有多種維生素和18種氨基酸。低蛋白高纖維是其重要的特征之一,并有較強(qiáng)的酸性易腐敗變質(zhì),也有含一定豐富物質(zhì)、產(chǎn)量大以及低成本等特點(diǎn)。對(duì)白酒丟糟回收利用開(kāi)展的主要研究集中在生產(chǎn)酒精、食用菌、飼料、沼氣、肥料、粗酶制劑、單細(xì)胞蛋白(主要是酵母)以及提取有用成分等方面[1-3]。光合菌(photosynthetic bacteria,簡(jiǎn)稱(chēng) PSB)富含蛋白質(zhì)(60%以上)、脂肪、可溶性糖類(lèi)、胡蘿卜素、維生素B及16種氨基酸,還含有輔酶Q10(coenzyme)、抗病毒物質(zhì)(antibiotic)與促生長(zhǎng)因子等。光合菌生命力極強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)要求低、生長(zhǎng)繁殖快、無(wú)毒害、無(wú)副作用,目前已廣泛應(yīng)用在養(yǎng)殖、種植、醫(yī)藥、環(huán)保與化工等各個(gè)行業(yè)[4-6]。另外,除增加營(yíng)養(yǎng)、降低飼料系數(shù)外,光合菌還可起到刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng),增強(qiáng)消化和抗病能力,促進(jìn)生長(zhǎng)的作用[7]。
目前,還未見(jiàn)利用白酒丟糟制作“光合菌飼料”的相關(guān)報(bào)道。利用白酒糟固態(tài)或半固態(tài)生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白用作飼料的技術(shù)已有很多報(bào)道,也有一些用光和菌轉(zhuǎn)化其他醪渣的報(bào)道[8],其中有一些技術(shù)已經(jīng)運(yùn)用到實(shí)踐中。但由于這些飼料主要應(yīng)用于畜禽的輔助用料,還存在蛋白含量較低、纖維素含量高等不利因素。而光合菌在養(yǎng)殖業(yè)的運(yùn)用中也存在菌體不好保藏、現(xiàn)場(chǎng)需周期進(jìn)行擴(kuò)培等不便因素。
因此,將丟糟與光合菌結(jié)合起來(lái),對(duì)其發(fā)酵工藝進(jìn)行研究,以期白酒丟糟經(jīng)光合菌轉(zhuǎn)化后,營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)能得到改良,更易作為飼料,并為進(jìn)一步制作出“活性光合菌白酒丟糟飼料”奠定重要基礎(chǔ)。
1.1.1 原料與菌種
白酒丟糟:宜賓敘府酒業(yè)公司提供;光合菌(photosynthetic bacteria,PSB):在重啤集團(tuán)宜賓分公司的糖化車(chē)間丟糟排水溝中分離得到,鑒定為沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。
1.1.2 試劑、儀器與設(shè)備
纖維素酶(BR,15 U/mg,上海展云化工有限公司);NH3水(AR,成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn));H3PO4(AR,成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn));氮?dú)猓üI(yè)級(jí),成都旭源化工有限責(zé)任公司生產(chǎn))。
手提式高壓滅菌鍋(YX280B,上海三申醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn));雙人單面超凈工作臺(tái)(SW-CJ-2FD,蘇州凈化設(shè)備有限公司生產(chǎn));冰箱(DCD-254WBG,無(wú)錫松下冷機(jī)有限公司生產(chǎn));電子分析天平(T-214,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司生產(chǎn));數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-S4,金壇市醫(yī)療儀器廠生產(chǎn));電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-905A,上海齊欣科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn));離心機(jī)(TDL-5-A,上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn));人工氣候箱(MGC-300H,上海一恒科技有限公司生產(chǎn));萬(wàn)用電爐(DL-1,北京市永光明醫(yī)療儀器廠生產(chǎn));箱式電爐(SX-2.5-10,天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn));光照計(jì)(LX-101LUXMETER,祥泰精機(jī)股份有限公司生產(chǎn));馬福爐(SX-4-10,上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn));定氮儀(KDN-08B,上海雙旭電子有限公司生產(chǎn));分光光度計(jì)(T6新世紀(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn))。
1.1.3 培養(yǎng)基
種子培養(yǎng)基[9]:MgSO·47H2O 0.2 g、NH4Cl 1 g、Na2CO34 g、K2HPO40.3 g、NaCl 0.5 g、CH3CH2OH 3 g、蛋白胨1.5 g、酵母膏 1 g,H2O 定容至 1 000 ml。
1.2.1 試驗(yàn)流程
①?gòu)陌拙茝S提取新鮮丟糟置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中,80℃恒溫至恒重得干糟,并測(cè)定其指標(biāo);
②準(zhǔn)確稱(chēng)取100 g干糟于250 ml三角瓶中,加入100 ml的 0.8%(v/v)氨水處理 2 h[10],得氨化糟;
③用1%H3PO4調(diào)節(jié)氨化糟pH值至5.0;加入纖維素酶,加酶量為130 U(/g干糟),于水浴鍋50℃處理4 h,得酶處理糟;
④用0.8%(v/v)氨水調(diào)節(jié)酶處理糟pH值至7.2,置于電爐上保持微沸蒸煮30 min,冷卻至室溫得蒸煮糟;
⑤按一定接種量接種光合菌發(fā)酵劑于蒸煮糟中,并加入一定量無(wú)菌水,控制一定料水比(干糟g:水g),在發(fā)酵裝置中造成厭氧條件進(jìn)行發(fā)酵轉(zhuǎn)化,每日觀察酸度變化,用0.8%(v/v)氨水調(diào)節(jié)pH值至7.2,發(fā)酵至一定時(shí)間取樣,得發(fā)酵醪;
⑥將所得的發(fā)酵醪在電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中80℃恒溫干燥至恒重,冷卻后測(cè)定其指標(biāo)。
1.2.2 發(fā)酵劑制備
采用三級(jí)培養(yǎng)工藝。將已分離純化的單菌落光合菌2環(huán)接種于100 ml種子培養(yǎng)基中,在厭氧裝置中光照強(qiáng)度890 Lx、30℃培養(yǎng)4 d;然后分出培養(yǎng)液按10%(w/w)接種量接種于已滅菌的100 g1.2.1節(jié)的蒸煮糟中,在厭氧裝置上進(jìn)行第一次擴(kuò)培,培養(yǎng)條件不變;第二、三次擴(kuò)培方法與第一次相同。以第三次擴(kuò)培后的糟液作為發(fā)酵劑。
1.2.3 發(fā)酵單因素試驗(yàn)
按1.2.1節(jié)流程,對(duì)接種發(fā)酵階段1.2.1節(jié)⑤的條件參數(shù)分別采用單因數(shù)試驗(yàn)法進(jìn)行探討,以發(fā)酵醪干糟真蛋白、粗纖維的含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。
①光照強(qiáng)度的確定:取10%(w/w)接種量、30℃恒溫、培養(yǎng)4 d、料水比1:9(干糟g:水g)、料層厚度4 cm,變化兩只白熾燈功率之和為 30、40、50、60、70、80 W的白熾燈進(jìn)行光照(燈與醪層距離定取30 cm)。
②接種量的確定:取白熾燈功率60 W、30℃恒溫、培養(yǎng)4 d、料水比1:9(干糟g:水g)、料層厚度4 cm,變化接種量 5%、7%、9%、11%、13%、15%(w/w)。
③醪液厚度的確定:取白熾燈功率60 W、30℃恒溫、培養(yǎng)4 d、料水比1:9(干糟g:水g)、接種量10%(w/w),變化料層厚度 1、2、3、4、5、6 cm。
④料水比的確定:取白熾燈功率60 W、30℃恒溫、培養(yǎng) 4 d、料層厚度 4 cm、接種量 10%(w/w),變化料水比(干糟g:水g)1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12。
⑤溫度的確定:取白熾燈功率60 W、培養(yǎng)4 d、料層厚度4 cm、接種量10%(w/w)、料水比(干糟g:水g)1:9,變化培養(yǎng)溫度 24、26、28、30、32、34 ℃。
⑥發(fā)酵時(shí)間的確定:取白熾燈功率60 W、30℃恒溫、料層厚度4 cm、接種量10%(w/w)、料水比(干糟g:水g)1:9,變化培養(yǎng)時(shí)間 1、2、3、4、5、6 d。
1.2.4 正交試驗(yàn)
根據(jù)1.2.3節(jié)6個(gè)因素選取最佳工藝參數(shù)點(diǎn)為參考,每個(gè)因素取3個(gè)水平,進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化。水平與因素見(jiàn)表1,選用L18(37)正交試驗(yàn)表合適。優(yōu)化后重做驗(yàn)證試驗(yàn),測(cè)定樣品指標(biāo)。
表1 正交試驗(yàn)因素與水平
1.2.5 分析方法
白酒丟糟與發(fā)酵干糟真蛋白含量采用沉淀法[11]與凱氏定氮法[12];丟糟與發(fā)酵干糟粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、粗纖維、總磷、水分測(cè)定分別按“中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)”GB/T 6432—94、GB/T 6433—2006、GB/T 6438—2007、GB/T 6434—2006、GB/T 6437—2002、GB/T 6435—2006執(zhí)行。
光照強(qiáng)度對(duì)白酒發(fā)酵糟真蛋白含量和纖維素含量的影響見(jiàn)圖1。圖1可見(jiàn),白酒發(fā)酵糟中蛋白質(zhì)含量隨光照強(qiáng)度的增強(qiáng),呈現(xiàn)先增大后減少的趨勢(shì)。當(dāng)光照強(qiáng)度從白熾燈瓦數(shù)30 W增至50 W時(shí),白酒發(fā)酵糟中真蛋白含量從18.1%上升至29.4%;當(dāng)白熾燈瓦數(shù)再增加時(shí),真蛋白含量下降。如當(dāng)白熾燈總瓦數(shù)為80 W時(shí),真蛋白含量下降至18.8%。而發(fā)酵糟中纖維素含量隨光照強(qiáng)度增強(qiáng)趨勢(shì)卻與蛋白質(zhì)含量相反,即纖維素含量隨光照強(qiáng)度增強(qiáng)有先降低、后又增大的趨勢(shì)。如當(dāng)白熾燈瓦數(shù)從30 W增至50 W時(shí)(890 Lx),纖維素含量從17.8%降至14.2%;后白熾燈瓦數(shù)增大至80 W時(shí),纖維素含量又上升至16.9%。
圖1 光照強(qiáng)度對(duì)發(fā)酵干糟真蛋白與纖維素含量的影響
光合菌生長(zhǎng)需一定光照強(qiáng)度,但并非光照強(qiáng)度越大光合菌生長(zhǎng)越好,光照強(qiáng)度有一合適的范圍。另外,從圖1中可看到發(fā)酵糟纖維素含量雖與蛋白質(zhì)含量呈相反的趨勢(shì),但趨勢(shì)步調(diào)相似。從本試驗(yàn)來(lái)看,光合菌大量生長(zhǎng)從外部攝取氮源(每天必須加氨水,調(diào)節(jié)酸度),能使酒糟纖維素含量相對(duì)降低。
當(dāng)白熾燈瓦數(shù)為50 W、燈與糟層距離為30 cm,即光照強(qiáng)度890 Lx時(shí),光合菌轉(zhuǎn)化丟糟可使蛋白質(zhì)含量處于較高水平,而使丟糟纖維素含量處于較低水平。
接種量對(duì)發(fā)酵糟真蛋白含量和纖維素含量的影響見(jiàn)圖2。圖2可見(jiàn),發(fā)酵干糟真蛋白含量與纖維素含量也具步調(diào)一致的相反走向。當(dāng)接種量從5%增加至9%時(shí),真蛋白含量從21.0%迅速上升至29.1%,而纖維素含量從17.3%迅速下降至14.4%;當(dāng)接種量高于9%時(shí),發(fā)酵干糟真蛋白含量與纖維素含量均處于平緩區(qū)。
當(dāng)接種量升高時(shí),光合菌應(yīng)是大量生長(zhǎng),這樣導(dǎo)致了發(fā)酵干糟中真蛋白含量的升高與纖維素含量的下降。當(dāng)接種量升高到一定程度時(shí),對(duì)最終發(fā)酵糟中的光合菌數(shù)量影響不大,這時(shí)發(fā)酵糟中真蛋白含量與纖維素含量均處于較平穩(wěn)的狀態(tài)。因此,接種量有一合適的范圍,此時(shí)光合菌生長(zhǎng)數(shù)量較大,而又不造成接種量的耗費(fèi)。
圖2 接種量對(duì)發(fā)酵干糟真蛋白與纖維素含量的影響
因此,可選取9%~11%的接種量作為最佳接種量的參考點(diǎn)。
半固態(tài)發(fā)酵糟厚度對(duì)發(fā)酵糟中真蛋白含量與纖維素含量的影響可見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn),發(fā)酵糟真蛋白的含量是隨著醪層厚度的增加而減少、而纖維素含量隨醪層厚度增加而增加,但增減的幅度在隨醪層厚度的不同區(qū)間而不同。如當(dāng)醪層厚度在1~3 cm時(shí),發(fā)酵醪真蛋白含量減少較少,其從31.1%下降至29.7%;醪層厚度再增加至6 cm時(shí),真蛋白含量降至19.0%。同樣的醪層變化區(qū)間,發(fā)酵糟纖維素含量從13.1%平緩增加至14.3%,再劇增至17.9%。
圖3 發(fā)酵糟層厚度對(duì)發(fā)酵干糟真蛋白與纖維素含量的影響
光合菌生長(zhǎng)需要一定的光照強(qiáng)度。從目前的文獻(xiàn)來(lái)看,光合菌較適應(yīng)于液態(tài)培養(yǎng),因?yàn)樵谝簯B(tài)培養(yǎng)過(guò)程中,光透過(guò)率較大,利于液態(tài)內(nèi)部的光合菌生長(zhǎng)。而在固態(tài)或半固態(tài)培養(yǎng)過(guò)程中,因存在大量的固體物會(huì)影響光透過(guò)率,致使發(fā)酵醪層厚度對(duì)光合菌生長(zhǎng)有較大的影響。促進(jìn)光合菌在固態(tài)與半固態(tài)物的大量、快速生長(zhǎng),又要增加實(shí)用價(jià)值,關(guān)鍵因素之一就是如何使光照方式有利于發(fā)酵醪層內(nèi)部的光合菌生長(zhǎng)。
在本試驗(yàn)的條件下,考慮實(shí)用價(jià)值與光合菌生長(zhǎng)兩方面的結(jié)合,取發(fā)酵醪層厚度3~4 cm為最佳厚度參考點(diǎn)。
料水比對(duì)發(fā)酵糟真蛋白含量和纖維素含量的影響見(jiàn)圖4。如圖4可見(jiàn),隨著料水比從1:7降低到1:12,發(fā)酵后丟糟中真蛋白的含量是先上升后下降,粗纖維的含量是先降低后逐漸升高。當(dāng)料水比為1:10時(shí),發(fā)酵糟真蛋白含量達(dá)到最高為30.0%,而纖維素含量達(dá)到最低為13.8%。
圖4 不同料水比對(duì)發(fā)酵干糟真蛋白與纖維素含量的影響
因此可以推論,在半固態(tài)培養(yǎng)光合菌過(guò)程中,水量過(guò)多或過(guò)少都不利于光合細(xì)菌生長(zhǎng),有一適宜的范圍。水過(guò)多可造成水中營(yíng)養(yǎng)物濃度低,不能滿(mǎn)足菌體生長(zhǎng)的需求;水過(guò)少營(yíng)養(yǎng)物濃度雖高,但會(huì)增加光透過(guò)的難度。因此,將料水比1:9~1:10選擇為最佳參考點(diǎn)是合理的。
發(fā)酵溫度的影響見(jiàn)圖5。圖5可見(jiàn),溫度對(duì)光合細(xì)菌的生長(zhǎng)具有一定的影響。隨著溫度的升高,發(fā)酵糟的真蛋白含量是先升高后下降的,當(dāng)溫度為30℃時(shí)真蛋白含量達(dá)到了最高,為29.7%。粗纖維的含量是隨著溫度的升高呈現(xiàn)出先降低后升高的趨勢(shì),在溫度為30℃時(shí),粗纖維的含量降到了最低,為14.3%。
光合菌生長(zhǎng)有一適宜溫度范圍,溫度太高或太低,都會(huì)抑制光合菌的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)條件下,30℃比較適合光合菌的生長(zhǎng),這與其它有關(guān)光合菌研究的文獻(xiàn)報(bào)道相一致,表明即使培養(yǎng)基成分發(fā)生變化,光合菌生長(zhǎng)適宜溫度卻較少變化。
圖5 溫度對(duì)發(fā)酵干糟真蛋白、纖維素含量的影響
發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵糟真蛋白含量和纖維素含量的影響見(jiàn)圖6。圖6可見(jiàn),在發(fā)酵過(guò)程中前3 d發(fā)酵糟真蛋白含量增幅、纖維素含量降幅較大,如真蛋白含量從14.5%上升至29.8%,纖維素含量從17.6%下降至14.3%;從第4 d開(kāi)始到第6 d發(fā)酵糟真蛋白與纖維素含量趨于穩(wěn)定。
圖6 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵干糟真蛋白、纖維素含量的影響
總體來(lái)看,在無(wú)纖維素酶幫助下,白酒丟糟在光合菌的作用下,有外加氮源,纖維素可再降3%~4%。而蛋白質(zhì)含量從發(fā)酵過(guò)程來(lái)看,較纖維素含量變化有較強(qiáng)的劇烈上升幅度,應(yīng)是隨著光合菌數(shù)量增加而增加,真蛋白含量在前3 d的發(fā)酵時(shí)間內(nèi)有近15%的上升。另外,由于光合菌轉(zhuǎn)化白酒糟過(guò)程中不斷利用氮源,致使發(fā)酵糟每天的酸度上升,所以在發(fā)酵過(guò)程中需每天補(bǔ)加NH3水調(diào)節(jié)發(fā)酵糟酸度利于光合菌生長(zhǎng),從而也給光合菌生長(zhǎng)提供了氮源。這樣,可選擇3~4 d作為最佳發(fā)酵時(shí)間的參考點(diǎn)。
以單因素試驗(yàn)提供的選取點(diǎn)為參考,以表1的因素與水平進(jìn)行正交試驗(yàn),正交試驗(yàn)的結(jié)果如表2。從水平均值中可以看出最優(yōu)因素條件組合為A2B2C2D2E2F3,即當(dāng)光照強(qiáng)度890 Lx(取白熾燈50 W,燈距醪層垂直距離為30 cm)、接種量10%、醪層厚度3 cm、料水比1:10、發(fā)酵溫度30℃、發(fā)酵時(shí)間5 d時(shí),發(fā)酵干糟真蛋白含量最高。另外,從極差值分析,各因素影響顯著性排序?yàn)锽[接種量,%(w/w)]與E(發(fā)酵溫度,℃)>A(光照強(qiáng)度,W)> F(發(fā)酵時(shí)間,d)>C(醪層厚度,cm)> D(料水比,干糟 g:水 g)。
表2 正交試驗(yàn)結(jié)果
按以上正交試驗(yàn)結(jié)果的最優(yōu)組合,重新按1.2.1節(jié)步驟試驗(yàn)3次,發(fā)酵干糟平均營(yíng)養(yǎng)成分結(jié)果如表3。從發(fā)酵干糟蛋白(真蛋白30.2%、粗蛋白35.1%)、纖維素、水分、粗脂肪、總磷、灰分等6個(gè)含量指標(biāo)來(lái)看,白酒丟糟經(jīng)過(guò)沼澤紅假單胞菌的轉(zhuǎn)化后,蛋白含量劇增,已達(dá)到草魚(yú)魚(yú)種飼料標(biāo)準(zhǔn)(SC/T1042—2002)中對(duì)蛋白的要求。另外,粗纖維含量下降近9個(gè)百分點(diǎn);灰分下降近5個(gè)百分點(diǎn);總磷含量增大一倍;脂肪含量略有上升,這些均顯示著酒糟飼用價(jià)值的上升。總磷含量增加了一倍多,可能跟白酒丟糟預(yù)處理用磷酸調(diào)節(jié)酸度有關(guān)。
表3 干糟營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)比(%)(w/w)
總之,白酒糟經(jīng)過(guò)光合菌發(fā)酵轉(zhuǎn)化,更加適宜作為飼料,提高了丟糟的飼用價(jià)值,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)出“白酒糟光合菌活性生物蛋白飼料”奠定了重要的基礎(chǔ)。當(dāng)然,擴(kuò)大光合菌發(fā)酵糟在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的關(guān)鍵因素,還需要進(jìn)一步降低粗纖維含量;對(duì)微量元素、維生素與氨基酸進(jìn)行分析與調(diào)整;研究后處理工藝與飼料應(yīng)用品質(zhì);探討工業(yè)化生產(chǎn)路徑等。
采用氨水浸泡、纖維素酶降解等原料預(yù)處理方式,利用沼澤紅假單胞菌厭氧轉(zhuǎn)化丟糟,發(fā)酵轉(zhuǎn)化過(guò)程中的6個(gè)因素都對(duì)沼澤紅假單胞菌轉(zhuǎn)化效果有影響,當(dāng)光照強(qiáng)度890 Lx、接種量 10%(w/w)、醪層厚度3 cm、料水比 1:10(干糟 g:水 g)、發(fā)酵溫度 30 ℃、發(fā)酵時(shí)間5d時(shí),白酒丟干糟真蛋白含量可達(dá)30.2%(w/w)、纖維素含量 13.6%(w/w)、粗脂肪 6.7%(w/w)、粗灰分10.1%(w/w)、總磷1.1%(w/w)、水分含量 10.2%(w/w),提高了白酒丟糟的飼用價(jià)值。
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S816.34
A
1001-991X(2011)07-0041-05
張健,宜賓學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院,副教授,644000,四川宜賓市五糧大道酒圣路8號(hào)。
羅輝、張超,單位及通訊地址同第一作者。
劉小彬、謝剛,重啤集團(tuán)宜賓分公司。
陳澤軍,宜賓敘府酒業(yè)。
2010-11-21
四川省教育廳資助項(xiàng)目(08ZC002)
(編輯:劉敏躍,lm-y@tom.com)