蔣宏偉，陳茂盛，周曉黎，李 劍，董 俊，葉玲玲，艾 軍，馬玉玲，吳雙民，楊建明

（1.陜西出入境檢驗檢疫局，陜西 西安 710068；2.云南出入境檢驗檢疫局，云南 昆明 650228）

1 概況

羚牛是一種極難得的大型?？葡∮姓滟F動物。外形長相奇特，龐大隆起的背脊像棕熊，兩條傾斜的后腿像非洲的斑鬣狗，四肢短粗像家牛，繃緊的臉部像駝鹿，寬而扁的尾像山羊，兩只角長得像角馬，稱為“六不像”，外形似牛，機體結(jié)實又介于山羊和羚羊之間，但在牙齒、角、蹄子等更接近羊。羚牛有四個亞種，高黎貢羚牛亞種（Bt taxicolor）、不丹羚牛亞種（Bt whitei）、四川羚牛亞種（Bt tibetana）和秦嶺亞種（Bt bedfordi），其中四川亞種和秦嶺亞種是中國的特有亞種。此次送給日本的4頭羚牛是秦嶺亞種，秦嶺亞種主要生活在秦嶺西段—陜西省多個縣境內(nèi)，是四個亞種中最漂亮的亞種，數(shù)量稀少，為國家一級保護動物，被視為“國寶”。為了進一步增強中日友誼，我國政府決定無償捐贈給日本的野生動物保護部門4頭羚牛，中日雙方共同簽定了《中華人民共和國向日本出口展覽用羚牛的衛(wèi)生要求》（以下簡稱檢疫條款），并由陜西出入境檢驗檢疫局實施隔離檢疫，陜西局局黨組非常重視此項任務(wù)，從嚴格監(jiān)督隔離場選址和建設(shè)，到實施隔離檢疫和實驗室檢驗等工作認真部署、精心安排，促使隔離檢疫任務(wù)得以圓滿完成。

按照檢疫條款，我們于2010年10月24日至2011年元月22日完成了對羚牛實施樣品采集、口蹄疫、牛肺疫、藍舌病、布氏桿菌病、結(jié)核病、副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉-粘膜病、鉤端螺旋體病、邊蟲病、焦蟲病、錐蟲病等12種動物疫病臨床及實驗室檢疫，4頭羚牛檢疫結(jié)果符合檢疫條款要求，于2011年元月25日乘飛機離開西安到日本大阪，去“完成”進一步增強中日友誼的使命。

2 檢疫檢驗

2.1 檢疫依據(jù)

依據(jù)中日雙方共同簽定的《中華人民共和國向日本出口展覽用羚牛的衛(wèi)生要求》對該批羚牛實施90天的隔離檢疫。

2.2 樣品采集

按檢疫條款規(guī)定，分別于隔離檢疫期間的前30天和后30天采集不同樣品，實施兩次實驗室檢驗。

2.2.1 動物保定

采樣樣品前由野生動物保護中心對羚牛實施麻醉。

2.2.2 采樣

2.2.2.1 首先，于隔離檢疫期間的前30天，在羚牛麻醉狀態(tài)下頸靜脈采集血樣。

2.2.2.2 第二次采樣為隔離檢疫期間的后30天，在羚牛麻醉狀態(tài)下頸靜脈采集血樣、食道探杯采集食道-咽喉液（OP液）和血涂片，分別進行相關(guān)疫病檢疫檢驗。

2.3 實驗室檢驗項目及方法

2.3.1 隔離檢疫期間前30天的檢驗

隔離檢疫期間的前30天，采集羚牛血清樣品，實施口蹄疫、副結(jié)核病等疫病的實驗室檢驗及結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)。

2.3.1.1 口蹄疫檢驗（按規(guī)定須由我國口蹄疫參考實驗室蘭州獸醫(yī)研究所承擔(dān)）

2.3.1.1.1 抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗

按檢疫條款要求，使用英國動物衛(wèi)生研究所Pirbright實驗室提供的抗體捕捉—ELISA試驗試劑盒，完成了對羚牛血清中口蹄疫O型、A型、C型和亞洲1型的抗體檢測。

2.3.1.1.2 病毒中和試驗

分別用口蹄疫O型、A型和亞洲1型標準毒株，完成對羚牛血清中各型中和抗體檢測。

2.3.1.2 副結(jié)核病檢驗

使用美國IDEXX公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒，完成對羚牛血清中副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測。

2.3.2 隔離檢疫期間后30天的檢驗

按檢疫條款規(guī)定，隔離檢疫期間的后30天，采集OP液和血樣，實施口蹄疫、牛肺疫、藍舌病、布氏桿菌病、牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉-粘膜病、邊蟲病、焦蟲病、錐蟲病等疫病的實驗室檢驗。

2.3.2.1 口蹄疫檢驗（由口蹄疫參考實驗室蘭州獸醫(yī)研究所承擔(dān)）

2.3.2.1.1 病毒分離

用OP液進行病毒分離和RT-PCR試驗，完成了對4頭羚牛OP液中口蹄疫病毒的檢驗。

2.3.2.1.2 抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗

使用英國Pirbright實驗室的抗體捕捉—ELISA試驗試劑盒，完成了對4頭羚牛第二次血清中口蹄疫病毒O型、A型、C型和亞洲1型的抗體檢測。

2.3.2.1.3 病毒中和試驗

分別采用口蹄疫O型、A型和亞洲1型標準毒株，完成對第二次羚牛血清中各型中和抗體檢測。

2.3.2.2 牛肺疫檢驗

按檢疫條款規(guī)定，牛肺疫采用補體結(jié)合試驗，其抗原由日本提供，補體、溶血素、綿羊紅細胞自備，正式試驗之前進行溶血素、抗原和補體的效價測定，完成了對4頭羚牛牛肺疫抗體檢測。

2.3.2.3 藍舌病

采用云南出入境檢驗檢疫局提供的藍舌病瓊擴免疫擴散抗原、陽性對照血清、陰性對照血清，對被檢羚牛血清實施藍舌病抗體檢測。

2.3.2.4 布氏桿菌病

采用布氏桿菌病試管凝集試驗（抗原、陽性血清、陰性血清由中國動物CDC提供），對被檢羚牛血清實施布氏桿菌抗體檢測。

2.3.2.5 牛傳染性鼻氣管炎

實驗用牛傳染性鼻氣管炎標準毒株由中國獸藥監(jiān)察所提供，使用MDBK細胞，按要求，采用病毒中和試驗對被檢羚牛血清實施牛傳染性鼻氣管炎中和抗體檢測。

2.3.2.6 牛病毒性腹瀉-粘膜病

2.3.2.6.1 血清中和試驗

牛病毒性腹瀉-粘膜病標準毒株由中國獸醫(yī)監(jiān)察所提供，使用MDBK細胞，完成對羚牛血清牛病毒性腹瀉-粘膜病中和抗體檢測。

2.3.2.6.2 病毒分離

采用實時熒光定量PCR技術(shù)，完成對被檢羚牛樣品的牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒核酸檢測。

2.3.2.7 邊蟲病

按檢疫條款規(guī)定，邊蟲病采用補體結(jié)合試驗，其抗原、陽性對照血清、陰性對照血清由日本提供，補體、溶血素、綿羊紅細胞自備，正式試驗之前進行溶血素、抗原和補體的效價測定，完成了對被檢羚牛血清牛肺疫抗體檢測。

2.3.2.8 錐蟲病

按檢疫條款規(guī)定，完成對羚牛實施血液涂片、姬姆薩染色，錐蟲病顯微鏡檢查。

2.3.2.9 焦蟲病

按檢疫條款規(guī)定，完成對羚牛實施血液涂片、姬姆薩染色，焦蟲病顯微鏡檢查。

2.4 臨床檢疫

2.4.1 隔離檢疫期間前30天

按檢疫條款規(guī)定，對羚牛實施牛肺疫、藍舌病、布氏桿菌病、結(jié)核病、副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉-粘膜病、鉤端螺旋體病、邊蟲病、焦蟲病、錐蟲病和其他疾病的臨床檢驗。

2.4.2 隔離檢疫期間后30天

按檢疫條款規(guī)定，對羚牛實施結(jié)核病、副結(jié)核病和其他疾病臨床檢驗；用指定藥物進行鉤端螺旋體病防治。

2.5 檢疫結(jié)果

2.5.1 隔離檢疫期間前30天檢驗結(jié)果

2.5.1.1 口蹄疫

2.5.1.1.1 抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗（用英國動物衛(wèi)生研究所Pirbright實驗室提供的抗體捕捉—ELISA試驗試劑盒）

所有羚牛血清檢測結(jié)果均為口蹄疫O型抗體陰性、Asia 1型抗體陰性、A型抗體陰性和C型抗體陰性。

2.5.1.1.2 病毒中和試驗

所有羚牛血清檢測結(jié)果均為口蹄疫O型病毒中和抗體陰性、Asia 1型病毒中和抗體陰性、A型病毒中和抗體陰性。

2.5.1.2 副結(jié)核分枝桿菌病

所有羚牛血清檢測結(jié)果均為副結(jié)核分枝桿菌抗體陰性。

2.5.1.3 臨床檢疫

所有羚牛臨床表現(xiàn)健康，均未發(fā)現(xiàn)應(yīng)檢疫病臨床癥狀。

2.5.2 隔離檢疫期間后30天檢驗結(jié)果

2.5.2.1 口蹄疫

2.5.2.1.1 病毒分離

2.5.2.1.1.1 OP液病毒分離

所有被檢羚牛OP液口蹄疫病毒分離結(jié)果均為陰性。

2.5.2.1.1.2 口蹄疫RT-PCR試驗

所有羚牛OP液口蹄疫病毒核酸檢測結(jié)果均為陰性。

2.5.2.1.2 抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗（用英國動物衛(wèi)生研究所Pirbright實驗室提供的抗體捕捉—ELISA試驗試劑盒）

所有羚牛血清檢測結(jié)果均為:口蹄疫O型抗體陰性、Asia 1型抗體陰性、A型抗體陰性和C型抗體陰性。

2.5.2.1.3 病毒中和試驗

所有羚牛血清檢測結(jié)果均為:口蹄疫O型病毒中和抗體陰性、Asia 1型病毒中和抗體陰性、A型病毒中和抗體陰性。

2.5.2.2 牛肺疫

被檢羚牛血清牛肺疫補體結(jié)合試驗檢測結(jié)果均為牛肺疫抗體陰性。

2.5.2.3 藍舌病

被檢羚牛血清瓊擴試驗結(jié)果均為藍舌病抗體陰性。

2.5.2.4 布氏桿菌病

被檢羚牛血清布氏桿菌病檢測結(jié)果均為布氏桿菌抗體陰性。

2.5.2.5 牛傳染性鼻氣管炎

被檢羚牛血清的牛傳染性鼻氣管炎血清中和試驗結(jié)果均為牛傳染性鼻氣管炎血清中和抗體陰性。

2.5.2.6 牛病毒性腹瀉-粘膜病

2.5.2.6.1 血清中和試驗

被檢羚牛血清牛病毒性腹瀉-粘膜病血清中和試驗結(jié)果均為牛病毒性腹瀉-粘膜病血清中和抗體陰性。

2.5.2.6.2 病毒分離

被檢羚牛檢測樣品的牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒核酸結(jié)果均為陰性。

2.5.2.7 邊蟲病

被檢血清邊蟲病補體結(jié)合試驗結(jié)果均為陰性。

2.5.2.8 錐蟲病

所有羚牛血液涂片顯微鏡檢查結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)錐蟲。

2.5.2.9 焦蟲病

所有羚牛血液涂片顯微鏡檢查結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)焦蟲。

2.5.3 臨床檢疫

所有羚牛臨床表現(xiàn)健康，均未呈現(xiàn)應(yīng)檢疫病臨床癥狀。

3 小結(jié)和體會

3.1 經(jīng)過90天的隔離檢疫，被檢羚牛從臨床檢疫到實驗室檢驗，結(jié)果均符合《中華人民共和國向日本出口展覽用羚牛的衛(wèi)生要求》的要求。

3.2 羚牛為野生動物，是國家一級保護動物，性情粗暴，因此，在將選中的羚牛遷移至隔離場所以及對其采集檢疫樣品時，須實施麻醉。在對羚牛實施麻醉，一定要注意正確地計算每頭羚牛的麻醉藥注射劑量，以及搬運體位（保持呼吸道的暢通）、解麻后的護理等等，以免造成羚牛窒息。