劉蘭華 (泰興市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇泰興225400)

宮頸癌發(fā)病率居女性生殖器惡性腫瘤首位,近年來年輕宮頸癌患者有明顯增加趨勢,其死亡原因多是腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)。近年來雖然應(yīng)用包括基因治療在內(nèi)的各種療法,但效果都不盡理想。研究者一致認(rèn)為治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是找到觸發(fā)其發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)因素,采取針對(duì)性靶向治療。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中,多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的改變都發(fā)揮著作用,目前倍受關(guān)注的是Wnt/β-連環(huán)蛋白 (β-Catenin)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此途徑的改變?cè)诖竽c癌發(fā)生中的作用已較明確,在其他惡性腫瘤如肝癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腎母細(xì)胞瘤中的改變也顯示出重要意義,研究表明此途徑改變可能是腫瘤發(fā)生的共同途徑[1]。因此,深入了解該途徑的特點(diǎn)及其在宮頸癌中的變化對(duì)于宮頸癌的靶向治療研究具有重要的意義。通過觀察β-Catenin在正常宮頸—宮頸上皮內(nèi)瘤樣變—宮頸鱗癌中的表達(dá)變化,有利于發(fā)現(xiàn)其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

收集泰興市人民醫(yī)院2007年8月至2008年12月間宮頸鱗癌標(biāo)本30例,患者年齡30～64歲,中位年齡43.5歲,手術(shù)方式主要為宮頸癌根治術(shù)+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。根據(jù)2000年再次修訂后的國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟 (FIGO)提出的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期,Ⅰ期19例,Ⅱ期11例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例;病理分級(jí),Ⅰ級(jí)7例,Ⅱ級(jí)14例,Ⅲ級(jí)9例。同期宮頸上皮內(nèi)瘤樣變50例,患者年齡26～59歲,中位年齡41.2歲,其中CINⅠ16例、CINⅡ15例、CINⅢ19例。同時(shí)選取子宮肌瘤全子宮切除后的正常宮頸組織24例作為對(duì)照組 (術(shù)前宮頸外觀光滑且宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查正常),患者年齡36～55歲,中位年齡44.5歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,制作臘塊。標(biāo)本臘塊以4μ m連續(xù)切片,用防脫片劑多聚賴氨酸處理過的載玻片撈片,置烤箱60℃,120min;切片常規(guī)脫蠟,PBS洗 3次×3min;根據(jù)每一種抗體的要求,對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)修復(fù),本實(shí)驗(yàn)中兩個(gè)指標(biāo)均采用高壓鍋加熱修復(fù),室溫自然冷卻后,PBS洗3次×3min;滴加按一定濃度稀釋的一抗0.05ml(β-Catenin鼠抗人單克隆抗體購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司,即用型),4℃冰箱孵育過夜;冷PBS洗3次×3min,滴加即用型廣譜二抗0.05ml,室溫孵育30min;冷PBS洗3次×3min,DAB顯色;蘇木素輕度復(fù)染,自來水返藍(lán)15min,逐級(jí)脫水,透明,封片。

1.2.2 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)及方法 每例在顯微鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野 (×400),每個(gè)視野各計(jì)數(shù)100個(gè)宮頸鱗形上皮細(xì)胞觀察,β-Catenin染色判斷標(biāo)準(zhǔn)按照Richmond等[2]的方法:以正常組織細(xì)胞上皮細(xì)胞染色強(qiáng)度和方式為對(duì)照,正常組織細(xì)胞β-Catenin表達(dá)呈清晰的棕黃色染色,陽性染色主要定位于細(xì)胞-細(xì)胞連接處的細(xì)胞膜,如大于或等于90%的腫瘤細(xì)胞與正常粘膜上皮細(xì)胞免疫染色相同,則為陽性表達(dá);如陽性染色腫瘤細(xì)胞數(shù)少于90%或出現(xiàn)異位性表達(dá)(細(xì)胞質(zhì)著色或胞核著色),則為陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

計(jì)數(shù)資料采用四格表χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn),應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 β-Catenin在各組織中的表達(dá)

正常宮頸上皮β-Catenin表達(dá)呈清晰的棕黃色,陽性表達(dá)率為87.5%(21/24),陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜,僅少數(shù)標(biāo)本有極弱細(xì)胞質(zhì)染色 (3/24),未見細(xì)胞核表達(dá);宮頸上皮內(nèi)瘤樣變?chǔ)?Catenin陽性表達(dá)率為58.0%(29/50),陰性表達(dá)21例中多數(shù)為細(xì)胞質(zhì)表達(dá) (19/21),少數(shù)標(biāo)本 (CINⅢ中的2例)有核染色 (2/21);宮頸鱗癌β-Catenin陽性表達(dá)率僅6.7%(2/30),陰性表達(dá)28例中細(xì)胞質(zhì) (12/28)和細(xì)胞核 (20/28)表達(dá)明顯增加,有2例同時(shí)有胞漿和胞核表達(dá),結(jié)果顯示正常宮頸組織與宮頸上皮內(nèi)瘤樣變 (P＜0.05)、宮頸鱗癌 (P＜0.01)β-Catenin陽性表達(dá)率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,宮頸上皮內(nèi)瘤樣變與宮頸鱗癌β-Catenin陽性表達(dá)率比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P＜0.01)。

2.2 β-Catenin在不同病理分級(jí)CIN中的表達(dá)

β-Catenin陽性表達(dá)率在CINⅠ級(jí)中為87.5%(14/16),CINⅡ級(jí)中為40.0%(6/15),CINⅢ級(jí)中為47.4%,(9/19),三者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但表達(dá)中顯示CINⅠ級(jí)組與CINⅡ-CINⅢ組二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05),即宮頸癌前病變中β-Catenin的陰性表達(dá)在低度病變 (CINⅠ)與高度病變 (CINⅡ-CINⅢ)中存在明顯差異 (P＜0.05),在低級(jí)別上皮內(nèi)瘤樣變的宮頸組織中,β-Catenin主要表達(dá)于細(xì)胞膜 (14/16),僅有 2例在細(xì)胞漿表達(dá),無細(xì)胞核表達(dá),在高級(jí)別上皮內(nèi)瘤樣變中,β-Catenin陰性表達(dá)明顯增高,陰性表達(dá)病例主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì) (13/15),僅有2例存在細(xì)胞核表達(dá)。

2.3 β-Catenin與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在宮頸浸潤癌病例中,β-Catenin陽性表達(dá)率與患者年齡、組織分化程度、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān) (P＞0.05),見表1。

3 討 論

本研究結(jié)果顯示,正常宮頸粘膜β-Catenin主要為陽性表達(dá),表達(dá)于細(xì)胞膜,而宮頸上皮內(nèi)瘤變胞質(zhì)主要為陰性表達(dá),宮頸癌主要為胞質(zhì)/胞核陰性表達(dá),三者陰性表達(dá)率分別為 12.5%、42.0%、93.3%,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。在低級(jí)別上皮內(nèi)瘤樣變的宮頸組織中,β-Catenin主要為陽性表達(dá),在高級(jí)別上皮內(nèi)瘤樣變及宮頸癌中,β-Catenin陰性表達(dá)明顯增高,宮頸癌多伴有細(xì)胞膜表達(dá)缺失,提示β-Catenin從胞膜到胞核的表達(dá)變化參與了宮頸癌的發(fā)生,可能是宮頸癌發(fā)生的早期事件。HAO等[3]以免疫組化方法發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸瘤、瘤旁正常黏膜和癌變組織有不同程度的β-Catenin表達(dá),正常粘膜為胞膜陽性表達(dá),腺癌和癌組織有不同程度的胞質(zhì)和胞核陰性表達(dá),陰性表達(dá)程度隨上皮異型增生程度的增高而增高。Pirinen等[4]對(duì)261例手術(shù)切除非小細(xì)胞肺癌的研究顯示,β-連環(huán)蛋白的陰性表達(dá)與腫瘤組織發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),上述研究結(jié)論均與本研究相符。

Correa[5]的流行病學(xué)和組織病理學(xué)研究顯示,宮頸癌的演變過程從異型增生到浸潤性癌是一個(gè)連續(xù)的組織學(xué)事件,根據(jù)此模式,宮頸上皮異型增生與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。早期宮頸癌中,40%～100%與中至重度異型增生相關(guān),提示異型增生可能導(dǎo)致宮頸癌形成[6]。本研究低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變CIN中β-Catenin細(xì)胞膜陽性表達(dá)率87.5%,高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變CIN中β-Catenin陽性表達(dá)率降至55.8%,陰性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì),宮頸浸潤鱗癌β-Catenin陽性表達(dá)僅6.7%,高分化鱗癌陰性表達(dá)主要于細(xì)胞質(zhì),中、低分化鱗癌陰性表達(dá)主要于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。提示β-Catenin的表達(dá)變化在一定程度上反映了宮頸上皮組織的惡變程度,高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變CIN在一定程度上己具備宮頸癌的某些特征。

上述研究表明,在正常宮頸粘膜—宮頸CIN—宮頸癌組織中,β-Catenin異常表達(dá)呈顯著正相關(guān),檢測β-Catenin的表達(dá)情況可能有助于早期宮頸癌的診斷,但具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

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