楊 波，徐 建，王 丹，王婷婷，徐 云

(吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司，吉林 長春 130012)

婦康寶口服液源于《金匱要略》中的“膠艾湯”,方由當(dāng)歸、白芍、川芎、熟地黃等7味中藥組成，具有補(bǔ)血調(diào)經(jīng)，止血安胎之功效，用于失血過多，面色萎黃，月經(jīng)不調(diào)，小腹冷痛等婦科病[1]。由于在部頒標(biāo)準(zhǔn)中沒有關(guān)于婦康寶口服液的含量測定項(xiàng),為了更好地控制該藥品的質(zhì)量，提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)采用RP-HPLC法對婦康寶口服液中芍藥的主要成分芍藥苷的含量進(jìn)行了測定，作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，通過試驗(yàn)證明此方法穩(wěn)定可靠、重現(xiàn)性好。

1 實(shí)驗(yàn)材料

高效液相色譜儀：美國安捷倫(1)1200高效液相色譜儀；美國安捷倫(2)1200紫外檢測器；Meltter AE240雙量程電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，AB204-E電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。乙腈為色譜純；磷酸、甲醇均為分析純;水為重蒸水。芍藥苷對照品(批號：110736-200731，規(guī)格：約20 mg，純度97.9%，供含量測定用，購自中國食品藥品檢定研究院)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 色譜柱：AgiLent C18(250 mm×4.6mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速：1.0 mL/min，檢測波長為230 nm，柱溫為35 ℃。

2.2 對照品溶液的制備 稱取芍藥苷對照品約10 mg,精密稱定為12.44 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL,置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含芍藥苷48.72 μg)。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品5 mL，置分液漏斗中，加水10 mL，混勻,用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL,置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系范圍 精密吸取對照品溶液3、5、10、15、20 μL，按上述色譜條件分別注入液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=1.412 9X+6.804 5(r=0.999 8)，結(jié)果表明芍藥苷進(jìn)樣量在146.145～974.30 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 專屬性試驗(yàn) 取按處方比例缺白芍的陰性對照樣品，按上述色譜條件測定HPLC色譜圖。同法測定芍藥苷對照品、供試品及溶劑的HPLC色譜圖。結(jié)果陰性對照樣品的色譜圖中，在與芍藥苷吸收峰保留時(shí)間的相應(yīng)位置上，無吸收峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾，此方法專屬性強(qiáng)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液(批號20100101)5 mL，按2.3項(xiàng)下制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h注入液相色譜儀中，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果顯示樣品溶液峰面積RSD為1.22%，表明樣品在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液(批號20100101)5 mL,共6分，按2.3項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定。結(jié)果芍藥苷峰面積RSD為0.60%,表明方法有良好的重現(xiàn)性。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密吸取同一批(批號20100101)已知含量的樣品2.5 mL，共6分，分別精密加入芍藥苷對照品溶液(濃度為1.215 9 mg/mL)2 mL，按2.3項(xiàng)下制備供試品溶液。計(jì)算6次平均回收率為98.08，RSD為1.90%。結(jié)果表明此方法準(zhǔn)確、可行。

2.9 3批樣品含量測定 分別精密吸取3批婦康寶口服液(批號分別為20100101、20100102、20100103)5 mL，按2.3項(xiàng)下制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液各10 mL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計(jì)算3批樣品含量分別為1.224、1.049、1.253 mg/mL。

3 討論

參考《中國藥典》[2]，又經(jīng)預(yù)試驗(yàn)摸索，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，檢測波長為230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000?？疾?種流動(dòng)相系統(tǒng)：以乙腈-水(26∶74)[3]、乙腈-水-冰醋酸(30∶70∶0.6)[4-5]、乙腈-0.15%磷酸溶液(19∶81)進(jìn)行比較，結(jié)果以乙腈-0.3%磷酸溶液(19∶81)為流動(dòng)相[6-8],樣品分離效果好，理論板數(shù)高，故選擇流動(dòng)相作為檢測本品的流動(dòng)相。

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中還考察了樣品的制備方法，采用大孔樹脂純化法、甲醇法、正丁醇提取法等3種方法對樣品進(jìn)行純化處理[9-10]，通過含量測定，正丁醇提取法得到的樣品中芍藥苷含量較高，且雜質(zhì)峰少，分離較好，故選擇正丁醇提取法為供試品溶液制備方法。

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