肖琦，夏繼飛，何家惠

（1. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，江蘇南京210014；2. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇南京210095；3. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院國(guó)家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心，江蘇南京210014）

下期預(yù)告：我國(guó)的養(yǎng)鴨業(yè)具有悠久的歷史。進(jìn)入20世紀(jì)80年代，飼養(yǎng)量平均每年以5%～8%的速度遞增。2004年我國(guó)肉鴨的出欄量超過24億只，鴨肉產(chǎn)量約530萬噸，占世界肉鴨總產(chǎn)量的70%左右，成年蛋鴨的存欄量達(dá)到3億～4億只，鴨蛋年產(chǎn)量達(dá)到553萬噸，約占我國(guó)禽蛋總產(chǎn)量的20.3%。隨著養(yǎng)鴨數(shù)量的增加，疫病也越來越多。為此下期“禽病防制”欄目將以“鴨病”做主題策劃，歡迎各界同行來稿，分享自己的經(jīng)驗(yàn)和心得。

傳染性喉氣管炎（ILT）是由傳染性喉氣管炎病毒引起的一種急性、接觸性上部呼吸道傳染病，以呼吸困難、咳出血樣粘液、喉部和氣管黏膜水腫出血并導(dǎo)致糜爛為主要特征，可致感染雞的死亡和產(chǎn)蛋率下降，各種日齡和品種的雞均可感染，May等1925年在美國(guó)首次報(bào)道本病，現(xiàn)已遍及世界許多養(yǎng)雞地區(qū)。本病在雞群內(nèi)傳播快、發(fā)病急，發(fā)病率較高，在我國(guó)較多地區(qū)發(fā)生和流行，嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。

一、病原

雞ILTV屬于皰疹病毒Ⅰ型，是一種有囊膜、二十面體對(duì)稱的雙股DNA病毒，具有皰疹病毒的核衣殼及立體形態(tài)的典型形態(tài)。

ILTV在形態(tài)上分為未成熟型和成熟型兩種。成熟的病毒粒子呈球型，其直徑為195～250 nm。未成熟型病毒主要在胞核空泡和胞漿空泡內(nèi)，直徑約為100 nm。病毒主要存在于病雞的氣管及其滲出物中，肝、脾和血液中較少見。對(duì)雞和其它常用試驗(yàn)動(dòng)物的紅細(xì)胞無凝集特性。傳染性喉氣管炎不同的病毒株的致病力和抗原性均有差異，被認(rèn)為僅有一個(gè)血清型，由于病毒株毒力上的差異，對(duì)雞的致病力不同，給本病的防控帶來一定的困難。

本病毒對(duì)脂溶劑、熱以及各種消毒劑均敏感。對(duì)外界環(huán)境的抵抗力不強(qiáng)。乙醚處理24 h失去傳染性；55℃時(shí)10～15 min滅活，未經(jīng)冷藏的雞氣管組織中的病毒37℃,44 h、絨毛尿囊膜中的病毒25℃,5 h均可被破壞；凍干或-20℃～-60℃下可長(zhǎng)期保存毒力。獸醫(yī)上常用的消毒藥如3%來蘇兒、3%甲醛或1%堿液1 min 可殺死。

二、流行病學(xué)

在自然條件下，本病主要侵害雞，各種年齡及品種的雞均可感染。但以成年雞癥狀最為典型。病雞、康復(fù)后的帶毒雞與無癥狀的帶毒雞是主要的傳染源。本病經(jīng)呼吸道及眼傳染，也可經(jīng)消化道感染。呼吸道分泌物污染的飼料及用具可成為傳播媒介。因?yàn)楸桓腥镜碾u胚在出殼前死亡，所以種蛋蛋內(nèi)及蛋殼上的病毒不能傳播。由于康復(fù)后的帶毒雞與無癥狀帶毒雞的存在，本病難以撲滅，并可呈地區(qū)性流行。

本病一年四季均可發(fā)生，秋冬寒冷季節(jié)多發(fā)。雞群擁擠、通風(fēng)不良、維生素缺少等，都可促進(jìn)本病發(fā)生和傳播。本病一旦傳入雞群，則可迅速傳開，感染率可達(dá)90%～100%。致死率波動(dòng)較大，一般為5%～70%，平均在10%～20%，最急性型一般為50%～70%，急性型一般在10%～30%，慢性死亡率一般為5%。更為嚴(yán)重的是，本病治愈后，病愈雞可以長(zhǎng)期散毒，據(jù)報(bào)道，約有2%的病愈雞，可帶毒2年之久。

三、臨床癥狀

本病自然感染的潛伏期為6 ～ 12 d，人工氣管接種后 2 ～ 4 d雞只即可發(fā)病。潛伏期的長(zhǎng)短與病毒株的毒力有關(guān)。

發(fā)病初期，常有數(shù)只病雞突然死亡?；茧u初期有鼻液，半透明狀，眼流淚，伴有結(jié)膜炎，其后表現(xiàn)為特征的呼吸道癥狀，呼吸時(shí)發(fā)出濕性啰音，咳嗽，有喘鳴音，病雞蹲伏地面或棲架上，每次吸氣時(shí)頭和頸部向前向上、張口、盡力吸氣的姿勢(shì)，有喘鳴叫音。嚴(yán)重病例，高度呼吸困難，痙攣咳嗽，可咳出帶血的粘液，可污染喙角、顏面及頭部羽毛。在雞舍墻壁、墊草、雞籠、雞背羽毛或鄰近雞身上沾有血痕。若分泌物不能咳出堵住時(shí)，病雞可窒息死亡。病雞食欲減少或消失，迅速消瘦，雞冠發(fā)紫，有時(shí)還排出綠色稀糞。最后多因衰竭死亡。產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)量迅速減少（可達(dá)35%）或停止，康復(fù)后1～2個(gè)月才能恢復(fù)。

最急性病例病雞可于24 h左右死亡，多數(shù)5～10 d或更長(zhǎng)，不死者多經(jīng)8～10 d恢復(fù)，有的可成為帶毒雞。

有些毒力較弱的毒株引起發(fā)病時(shí)，流行比較緩和，發(fā)病率低，癥狀較輕。病雞只是無精打采，生長(zhǎng)緩慢，產(chǎn)蛋減少，有結(jié)膜炎、眶下竇炎、鼻炎及氣管炎等癥狀出現(xiàn)。病程較長(zhǎng)，長(zhǎng)的可達(dá)1個(gè)月。死亡率一般較低，在2%左右，大部分病雞可以耐過。若有細(xì)菌繼發(fā)感染和應(yīng)激因素存在時(shí)，死亡率則會(huì)增加。

四、病理變化

本病的主要典型病變?cè)跉夤芎秃聿拷M織。病初黏膜充血、腫脹、高度潮紅，有粘液，進(jìn)而黏膜發(fā)生變性、出血和壞死，氣管中含血粘液或血凝塊，氣管管腔變窄，病程2～3 d后有黃白色纖維素性干酪樣假膜。病雞由于劇烈咳嗽和痙攣性呼吸，可以咳出分泌物和混血凝塊以及脫落的上皮組織，病情嚴(yán)重時(shí)，炎癥也可波及到支氣管、肺和氣囊等部，甚至上行至鼻腔和眶下竇。病雞的肺一般正常或有肺充血及小區(qū)域的炎癥變化。

患病雞多為急性死亡，通常無明顯病理變化。少數(shù)慢性死亡的雞只，剖檢可見鼻孔中蓄積粘性滲出物，喉頭、氣管內(nèi)有卡他性或卡他出血性滲出物，滲出物呈血凝塊狀堵塞喉腔和氣管，有的有呈灰黃色纖維素性干酪樣物附著于喉頭周圍，堵塞喉腔，特別是堵塞喉裂部；鼻腔和眶下竇黏膜發(fā)生卡他性或纖維素性炎，充血、腫脹，散布小點(diǎn)狀出血點(diǎn)；氣管上部的氣管環(huán)出血；卵巢異常，卵泡變形、變軟、充血、出血。少數(shù)雞胃、肝、腸、心等實(shí)質(zhì)器官有瘀血現(xiàn)象。

病理組織學(xué)檢查時(shí)，氣管上皮細(xì)胞混濁腫脹，細(xì)胞水腫，纖毛脫落，氣管黏膜和黏膜下層可見淋巴細(xì)胞、組織細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜細(xì)胞變性。病毒感染后12 h時(shí)，在氣管、喉頭黏膜上皮細(xì)胞核內(nèi)可見嗜酸性包涵體，出現(xiàn)臨床癥狀48 h內(nèi)包涵體最多。病毒接種雞胚組織細(xì)胞12 h時(shí)后可見到核內(nèi)包涵體。

五、實(shí)驗(yàn)室診斷

雞傳染性喉氣管炎的臨診癥狀和病理變化與某些呼吸道傳染病，如雞新城疫、傳染性支氣管炎有些相似，易發(fā)生誤診。因此，對(duì)本病應(yīng)進(jìn)行幾方面的檢查，綜合診斷。

1.現(xiàn)場(chǎng)診斷。本病常突然發(fā)生，傳播快，成年雞發(fā)生最多；發(fā)病率高，死亡率因飼養(yǎng)條件不同而差別較大。臨床癥狀較為典型：張口呼吸、喘氣、有啰音，咳嗽時(shí)可咳出帶血的粘液，有頭向前向上吸氣姿勢(shì)。剖檢死雞時(shí)，可見氣管呈卡他性和出血性炎癥病變，以后者為特征，氣管內(nèi)還可見到數(shù)量不等的血凝塊。

2.病毒分離、鑒定?？梢詫⒑?、氣管及其滲出物磨碎，用生理鹽水1:5～1:10稀釋，離心后取上清液加適量青霉素、鏈霉素處理后，在室溫下作用 30 min，取 0.1 ～ 0.2 ml接種9～12日齡雞胚絨毛尿囊膜上或尿囊腔，48 h后，絨毛尿囊膜上可見到痘斑樣壞死病灶，在周圍細(xì)胞內(nèi)可檢出核內(nèi)包涵體。用雞胚絨毛尿囊膜的痘斑制成乳劑離心后，取其上清液與傳染性喉氣管炎的抗血清做瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，24 h后可出現(xiàn)明顯的沉淀線。病毒接種在雞胚腎細(xì)胞單層培養(yǎng)，24 h后出現(xiàn)細(xì)胞病變，可檢出多核細(xì)胞（合胞體）、核內(nèi)包涵體和壞死病變。在病的初期（1～5 d），用氣管和眼結(jié)膜組織，經(jīng)固定、姬姆薩氏染色，可見上皮細(xì)胞核內(nèi)包涵體。據(jù)報(bào)道，在60份樣品中包涵體檢出率為57%，病毒分離率為72%。

3.動(dòng)物接種實(shí)驗(yàn)診斷。病雞的氣管分泌物或組織懸液，經(jīng)喉頭或鼻腔或氣管接種易感雞和雉雞，2～5 d可出現(xiàn)典型的傳染性喉氣管炎癥狀和病變。

傳染性喉氣管炎的診斷應(yīng)區(qū)別于傳染性支氣管炎、支原體病、傳染性鼻炎、雞新城疫、黏膜型雞痘、維生素A缺乏等。感染傳染性喉氣管炎的病雞呼吸困難程度比其他幾種疾病嚴(yán)重，常常痙攣性咳嗽，咳出帶血的粘液懸掛于雞籠或墻壁上，而其它幾種患病雞無咳血現(xiàn)象。

六、防控

雞傳染性喉氣管炎病屬于急性呼吸道傳染病，發(fā)病急，死亡快。發(fā)病后，要做到早發(fā)現(xiàn)，早治療，但目前尚無特異的治療方法，因此，采用加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、注重疫苗防疫等綜合性防控措施，效果較好。

（一） 飼養(yǎng)管理對(duì)飼養(yǎng)管理用具及雞舍定期消毒，注意雞舍通風(fēng)與保暖，提供雞群適宜的生長(zhǎng)環(huán)境、溫度、濕度和飼養(yǎng)密度。滿足雞體營(yíng)養(yǎng)需要，提供適宜的蛋白質(zhì)、能量、維生素、礦物質(zhì)、氨基酸，提高雞體的免疫能力。對(duì)來歷不明的雞要隔離觀察，可放數(shù)只易感雞與其同養(yǎng)，觀察2周，不發(fā)病，證明不帶毒，這時(shí)方可混群飼養(yǎng)。

雞傳染性喉氣管炎病毒同其他皰疹病毒科的病毒一樣，康復(fù)帶毒雞與病雞都是嚴(yán)重的傳染源，臨床治愈的雞可長(zhǎng)期帶毒并不斷向外界環(huán)境排毒，因此病愈雞不可和易感雞混群飼養(yǎng)，最好將病愈雞淘汰。雞場(chǎng)一旦發(fā)生雞傳染性喉氣管炎病疫情，全場(chǎng)所有雞都要按發(fā)病的輕重嚴(yán)格進(jìn)行分群隔離。發(fā)生過雞傳染性喉氣管炎病的雞場(chǎng)，務(wù)必要把該疾病的預(yù)防列入正規(guī)的免疫程序。

雞自然感染傳染性喉氣管炎病毒后可產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫力，一般可獲得至少1年以上甚至終生免疫。易感雞接種疫苗后可獲得半年至1年不等的保護(hù)力。母源抗體可通過卵傳給子代，但其保護(hù)作用甚差，也不干擾雞的免疫接種。

已發(fā)病的雞場(chǎng)，對(duì)發(fā)病雞舍尚未出現(xiàn)癥狀的雞和其他雞舍的育成雞及產(chǎn)蛋雞用ILT弱毒疫苗，采用滴鼻、點(diǎn)眼（也有用飲水）的方法進(jìn)行免疫接種。常用的免疫程序是：蛋雞和種雞第一次免疫在35日齡～45日齡，第二次免疫在90日齡。發(fā)病雞場(chǎng)的糞便要及時(shí)清除，死雞送遠(yuǎn)處深埋，并對(duì)全場(chǎng)雞舍、所有用具及周圍環(huán)境用消毒劑徹底消毒。但不能用自然強(qiáng)毒接種，它不僅可使本病疫源長(zhǎng)期存在，還可能散布其他疫病。

（二） 疫苗防疫目前國(guó)內(nèi)外預(yù)防傳染性喉氣管炎通常采用的疫苗都是弱毒疫苗，但所有的弱毒疫苗都存在以下缺點(diǎn)：（1）疫苗毒力普遍偏強(qiáng)，接種后反應(yīng)大，接種后會(huì)使機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能降低，易導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病。（2）與強(qiáng)毒株一樣，弱毒疫苗株也能引起潛伏感染，潛伏感染的雞將終生帶毒。（3）疫苗病毒可以由接種雞傳染給非接種雞，在雞與雞，雞群與雞群之間的傳播過程中毒力返強(qiáng)，從而成為新的感染源，嚴(yán)重者可引起本病的暴發(fā)。所以，養(yǎng)雞場(chǎng)在沒有傳染性喉氣管炎存在時(shí)，盡量不要使用疫苗，也不要將未接種疫苗的雞和已接種疫苗的雞混養(yǎng)在一起。

鑒于常規(guī)疫苗的這些特點(diǎn)，研制新型安全且有效的基因工程疫苗用于本病的防控十分必要，目前國(guó)內(nèi)外常見的基因工程疫苗有如下幾種。

1.亞單位疫苗。York等研究發(fā)現(xiàn)亞單位疫苗能刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)，對(duì)ILTV強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率高達(dá)83%，但是由于其制備和免疫成本較高至今仍未廣泛應(yīng)用。

2.病毒活載體重組疫苗。目前國(guó)內(nèi)已開發(fā)出商品化的病毒活載體重組疫苗，該疫苗將ILTV gB基因插入雞痘病毒載體中獲得rFPVILTVgB重組雞痘病毒，該疫苗可以對(duì)SPF雞和商品雞提供100%的免疫保護(hù)，并已完成重組病毒的遺傳穩(wěn)定性評(píng)價(jià)、疫苗的安全性試驗(yàn)與最小免疫劑量測(cè)定、同居感染試驗(yàn)、免疫持續(xù)期試驗(yàn)、雞痘母源抗體對(duì)重組雞痘疫苗免疫效果的影響等試驗(yàn)，是理想的活載體重組疫苗候選株，于2005年獲得中華人民共和國(guó)新獸藥注冊(cè)證書，并商品化。

3.基因工程缺失疫苗。ILTV基因組中含有大量的病毒復(fù)制非必須基因，如TK、dUTPase、UL0基因等，國(guó)內(nèi)外有研究將替代基因插入到這些基因位點(diǎn)中，構(gòu)建基因工程缺失疫苗。其中，有些研究獲得的疫苗可以減輕患病雞的癥狀，有些可以保護(hù)雞群免受病毒致死性的攻擊，也有些可以保護(hù)雞抵抗ILTV和其他病原，這些都可以作為基因工程疫苗的候選株。特別是UL10基因缺失和UL0基因缺失的ILTV突變病毒，有望成為預(yù)防本病的有效疫苗。

4.DNA疫苗。一直以來，DNA疫苗在機(jī)體內(nèi)表達(dá)量較低，單獨(dú)使用不足以產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)效果，極大的限制了DNA疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的程度。因此，目前DNA疫苗應(yīng)用的關(guān)鍵問題是如何增強(qiáng)其免疫效果，提高誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答效率。

孟松樹等構(gòu)建了ILTV的gB、gD、gC真核表達(dá)質(zhì)粒，并采用CPG佐劑進(jìn)行了聯(lián)合基因免疫的研究。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，ILTV DNA疫苗能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞介導(dǎo)免疫，保護(hù)機(jī)體抵抗ILTV強(qiáng)毒的攻擊；CPG DNA佐劑對(duì)ILTV DNA疫苗具有免疫增強(qiáng)作用。

邵攀峰等選用重組真核表達(dá)質(zhì)粒pIL-18為ILTV重組DNA疫苗pgB的免疫佐劑，在ILT的免疫過程中，pIL-18可以明顯的增強(qiáng)DNA疫苗pgB的誘導(dǎo)細(xì)胞免疫作用，有效地提高了雞傳染性性喉氣管炎病毒DNA疫苗的免疫保護(hù)力。