周長征

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟南250355)

千柏鼻炎片是由千里光、卷柏、決明子等7味中藥制備的復(fù)方制劑，收載于2005版藥典一部，但質(zhì)量標準中沒有該藥含量測定項目，2010版藥典中亦沒有其含量測定結(jié)果。2010年9～11月，我們采用高效液相色譜技術(shù)測定了其主要成分決明子中大黃酚的含量，現(xiàn)報告如下。

材料:大黃酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所;千柏鼻炎片由濟南康眾醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司提供(批號:20090907);甲醇為色譜純(天津市由科密歐化學(xué)試劑開發(fā)公司);水為雙蒸水;其它試劑均為分析純。P680高效液相色譜儀，UVD170U檢測器，DIODE色譜數(shù)據(jù)工作站(美國戴安公司)，DT-230A型柱溫箱;SP8810高效液相色譜儀，SP200紫外檢測器，N2000色譜數(shù)據(jù)工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)。TU-1800SPC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

實驗條件:①色譜條件:色譜柱為phenomenex C18(4.6×250 mm，0.5 μm)，流動相為甲醇 -0.1%磷酸(85∶15)，柱溫35℃，流速1 ml/min，檢測波長254 nm;理論板數(shù)以大黃酚計不應(yīng)低于2 500。②溶液制備:分別采用甲醇稀釋法制備對照品溶液，甲醇回流提取、三氯甲烷萃取法制備供試品(含決明子)及陰性樣品溶液(不含決明子)。

測定項目、方法及結(jié)果:①專屬性:按上述色譜條件，取上述3種溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜圖中與對照品色譜峰相應(yīng)的位置上有相同的色譜峰，主峰與其他色譜峰之間分離良好;在陰性溶液色譜圖中，與大黃酚保留時間相同的位置上無色譜峰，表明處方中其他組分對大黃酚含量測定無干擾;大黃酚主峰理論塔板數(shù)＞2 500，與其他峰之間分離度均＞1.5，滿足含量測定要求。②線性關(guān)系:精密稱取大黃酚對照品12.68 mg，置50 ml量瓶中，用無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解并定容至刻度，作為線性測定儲備液，分別精密吸取儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml置 25 ml量瓶中，用無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)稀釋至刻度，搖勻，分別取20μl注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。其回歸方程為:Y=74.979X-0.078 7，r=0.999 9。結(jié)果表明大黃酚在 0.12 ～4.04 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。在0.101～0.812μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。③精密度:a重復(fù)性:取樣品5份，每份約3 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法和色譜條件測定大黃酚的含量。結(jié)果顯示重復(fù)性良好。b中間精密度:取樣品約3 g精密稱定，按上述試驗確定的供試品溶液制備方法和色譜條件，于同一實驗室，不同日期、不同分析人員行大黃酚含量測定。結(jié)果顯示中間精密度良好。④穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液制備方法項下提取樣品溶液，室溫下放置，于 0、2、4、6、8、10 h分別進樣，測定其峰面積，平均峰面積為44.563;RSD%=0.16%。結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。⑤檢測范圍:取1.5、3、4 g樣品精密稱定，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定大黃酚含量。結(jié)果表明，在標準取樣量的±50%范圍內(nèi)，測定樣品含量結(jié)果基本穩(wěn)定。⑥加樣回收率試驗:取已知大黃酚含量(0.210 mg/g)的千柏鼻炎片適量，精密稱定，精密加入大黃酚對照品適量，按供試品溶液的制備方法及上述色譜條件進行測定，計算回收率。結(jié)果表明回收率良好。

討論:高效液相色譜技術(shù)以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。目前其已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。本研究采用高效液相色譜技術(shù)測定千柏鼻炎大黃酚含量，結(jié)果表明其專屬性、線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、檢測范圍、回收率均較好，證實高效液相色譜技術(shù)可用于千柏鼻炎片中大黃酚含量的測定。