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(1.吉林大學(xué)第三醫(yī)院,吉林 長春 130021;2.吉林省人民醫(yī)院,吉林 長春 130021)
葛蒡合劑是由葛根、牛蒡子、荊芥、薄荷等5味中藥組成的復(fù)方制劑[1]。具有辛涼透表的功效,用于風(fēng)熱感冒,頭痛發(fā)熱,咳嗽咽痛及麻疹初期或出疹不透等癥。本文選擇葛根中葛根素含量作為指標(biāo)成分,建立了葛蒡合劑中葛根素的HPLC測定法,為該藥的質(zhì)量控制提供了定量評價方法,以便更好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量,保證安全及療效。
島津LC-20A高效液相色譜儀;紫外檢測器,CLASS-VP工作站,色譜柱:Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)。芍藥苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供,批號0736-9913,供含量測定用。葛蒡合劑為通化鴻茂有限公司提供樣品,批號:20090105、20090106、20090107,甲醇為優(yōu)級純,水為純化水,其它試劑均為分析純。
2.1 色譜條件 采用Agilent C18,4.6 mm×150 mm,5 μm色譜柱,以甲醇-水(25∶75)為流動相;檢測波長為250 nm。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。
2.2 測定波長的選擇 取葛根素對照品的甲醇溶液,經(jīng)UV-2201紫外分光光度計(jì)200 nm~320 nm范圍內(nèi)掃描,葛根素在250 nm波長處有最大吸收,故選擇250 nm為本實(shí)驗(yàn)的測定波長。
2.3 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品適量,加甲醇溶解,并配制成每1 mL含0.07 mg的溶液,作為對照品溶液。
2.4 供試品溶液的制備 精密量取本品1.5 mL,置50 mL量瓶中,加60%甲醇適量,超聲處理(功率250 W,頻率33 kHz)20 min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,取上清液,濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.5 陰性對照液制備及干擾試驗(yàn) 按處方取去除葛根藥材的其它藥材,按樣品工藝同法制備,制得陰性對照樣品,再按供試品溶液的制備方法操作,制成陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液,供試品溶液,陰性對照溶液各10 μL,按上述色譜條件進(jìn)樣分析,繪制色譜圖,測定結(jié)果表明:供試品色譜中,與對照品色譜相應(yīng)位置上,具有相同保留時間的色譜峰,而陰性對照色譜中無干擾。
2.6 線性關(guān)系 精密稱取葛根素對照品溶液4、8、12、16、20 μL,分別注入液相色譜儀,按前述色譜條件測定,以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出回歸方程為Y=220 696 1.313X+402 97.677,相關(guān)系數(shù)r=0.999 7,線性范圍為進(jìn)樣量在0.28 μg~1.40 μg范圍內(nèi),與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.7 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液,依法連續(xù)進(jìn)樣5次,每次10 μL,在上述色譜條件下,測定色譜峰面積,測定結(jié)果峰面積平均值為160 928 4.125,RSD=0.54%,表明精密度良好。
2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液10 μL,按上述條件進(jìn)行分析,測定時間為0、2、4、6、8 h,測定色譜峰面積,結(jié)果表明供試品溶液的8 h內(nèi)穩(wěn)定,RSD=0.76%。
2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品5份,按2.4項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。按前述色譜條件進(jìn)行分析,測定結(jié)果表明樣品中葛根素含量(mg/10 mL)分別為25.401 5、25.103 6、25.601 7、25.006 8、24.986 1,平均25.219 9 mg/10 mL,RSD為1.07%。結(jié)果表明重復(fù)性好。
2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知葛根素含量的樣品(批號:20090105,每10 mL葛根素含量為25.219 9 mg)1.0 mL,5份,分別精密加入葛根素對照品適量,按供試品溶液制備方法操作,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表1。
表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
表1結(jié)果表明方法的回收率較好。
2.11 樣品的含量測定 按上述方法,制備供試品溶液,測定3批葛蒡合劑中葛根素的含量,結(jié)果見表2。
表2 3批樣品中葛根素含量測定結(jié)果
在實(shí)驗(yàn)過程中,曾選用甲醇-水-冰醋酸(25∶64∶1)、甲醇-0.5%醋酸(25∶75)等多種流動相,因其色譜峰分離效果不好,而未被應(yīng)用。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明,確定甲醇-水(25∶75)為流動相,其色譜峰得到較好分離,而被采用[2-3]。
本文采用高效液相色譜法,測定了葛蒡合劑中葛根素的含量,其方法簡便、準(zhǔn)確,靈敏,回收率較好,可為該制劑的質(zhì)量控制提供一個有效內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)。
[1]國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):第5冊[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:173.
[2]楊翠微,張俊瑋.HPLC測定參蘇丸中葛根素的含量[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報,2000,6(10):36.
[3]黃亞非,張永明,何翱,等.采用高效液相色譜法測定心脈通口服液中葛根素含量[J].中國中藥雜志,2001,26(11):760.