尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+及CD8+CD25+細(xì)胞的檢測

張艷杰，張士發(fā)，王莉麗，王良民

銀屑病目前發(fā)病機(jī)制尚不明確，其外周血及皮損中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的抑制能力降低，導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞活性增強(qiáng)，是銀屑病免疫功能紊亂的特點(diǎn)之一[1]。目前有關(guān)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與銀屑病的關(guān)系的研究結(jié)果不甚一致，而對于CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與銀屑病關(guān)系的研究更少。本文對進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)行研究，以探討這兩類調(diào)節(jié)性細(xì)胞亞群的變化及作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對象

隨機(jī)選擇進(jìn)展期的尋常型銀屑病患者21例，其中男 13例、女 8例，年齡（35±8）歲，病程（6.2±3.8）年，近2月未接受系統(tǒng)治療和外用藥治療，不伴有系統(tǒng)性疾病。正常對照組21名，其中男13名、女8名，年齡（37±9）歲，均為志愿者，無銀屑病、急慢性疾病史及家族史。

1.2 試劑和儀器

抗 CD4-PE、 抗 CD8-PE、 抗 CD25-FITC、IgG1-FITC和IgG1-PE熒光抗體均為Immunotech公司產(chǎn)品，F(xiàn)ACScan流式細(xì)胞儀（Becton Dickinson公司）。

1.3 外周血淋巴細(xì)胞的提取和流式細(xì)胞術(shù)檢測

常規(guī)分離單一核細(xì)胞，每管分裝3×105～5×105個(gè)細(xì)胞。對照管分別加入10μL的IgG1-FITC和IgG1-PE，實(shí)驗(yàn)管分別加入10μL的CD4-PE+CD25-FITC和CD8-PE+CD25-FITC，混勻，37℃避光30min后洗滌3次，再加入PBS至總體積約0.5mL。進(jìn)入流式細(xì)胞儀Machintosh操作系統(tǒng)進(jìn)行檢測，數(shù)據(jù)經(jīng)Cellquest軟件獲取和分析，每個(gè)樣本檢測約104個(gè)細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

進(jìn)展期尋常型銀屑病外周血CD4+CD25+T細(xì)胞及CD8++CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量與正常對照組相比，均顯著降低，CD4+CD25+/CD8+CD25+比值則無明顯差異（表1）。流式圖見圖1-4。

表1 進(jìn)展期尋常型銀屑病患者與健康人外周血CD4+CD25+及CD8+ CD25+ 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測（ ±s）

表1 進(jìn)展期尋常型銀屑病患者與健康人外周血CD4+CD25+及CD8+ CD25+ 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測（ ±s）

例數(shù) CD4+CD25+ CD8+CD25+ CD4+CD25+/CD8+CD25+患者組 21 19.82±4.86 15.60±2.53 1.14±0.12對照組 21 27.25±4.92 23.73±3.06 1.31±0.16 t 2.29 3.15 0.83 P<0.05 <0.005 >0.05

3 討論

既往研究發(fā)現(xiàn)尋常型銀屑病外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量明顯升高，但與病情嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)[2]，也有報(bào)道其數(shù)量無明顯變化，而僅僅表現(xiàn)為功能上的缺欠[1]。至于這些現(xiàn)象是由于反饋性的升高，還是銀屑病僅與其功能缺欠有關(guān)，尚無統(tǒng)一意見。而近年來更多的研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞明顯降低[3,4]，與本研究的結(jié)果一致。

在銀屑病患者的外周血中，作為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量降低可導(dǎo)致其抑制能力降低，或者其功能存在缺陷，導(dǎo)致Th1細(xì)胞失去抑制而過度活化，從而釋放IFN和IL-2等細(xì)胞因子，通過K17-自身反應(yīng)性T細(xì)胞，IFN環(huán)路等途徑引起或加速銀屑病的免疫病理損傷[5]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用他克莫司等治療尋常型銀屑病，治療前CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞明顯降低，治療后隨著病情的緩解，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞明顯升高[5]，也支持本文觀點(diǎn)。

近年來CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用引起人們的重視。CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞一樣，具有抑制免疫反應(yīng)和誘導(dǎo)免疫耐受作用，但其影響顯著超過了CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用[6]。有報(bào)道尋常型銀屑病患者外周血CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞顯著升高，與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，認(rèn)為CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的激活是銀屑病皮損發(fā)生和加重的重要炎癥細(xì)胞[7]，但從近年來對CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用機(jī)理認(rèn)識(shí)和銀屑病的免疫病理學(xué)特點(diǎn)來看，二者存在矛盾之處，而且難以作出合理解釋。

本研究發(fā)現(xiàn)，進(jìn)展期尋常型銀屑病患者外周血CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞顯著降低，由此可能導(dǎo)致其失去對CD4自身反應(yīng)性T細(xì)胞的增殖、分泌IFN-γ和IL-17等功能的抑制，使STAT3和細(xì)胞毒T細(xì)胞抗原-4（CTLA-4）依賴性機(jī)制誘導(dǎo)的免疫耐受途徑受阻，從而引起銀屑病的病理改變，其作用顯著超過了CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用[7]。因此本文的結(jié)果可以更為合理地解釋銀屑病的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)理。

圖1 尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞流式圖

圖2 正常人外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞流式圖

圖3 尋常型銀屑病患者外周血CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞流式圖

圖4 正常人外周血CD8+CD25+調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞流式圖

既往許多研究發(fā)現(xiàn)尋常型銀屑病外周血CD4+/CD8+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例失調(diào)，與銀屑病的發(fā)病及加重有密切相關(guān)，而本研究發(fā)現(xiàn)，雖然銀屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量均低于正常對照組，但兩組CD4+CD25+/CD8+CD25+比值并未出現(xiàn)顯著性差異。提示尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+與CD8+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分別通過不同的機(jī)制促進(jìn)銀屑病的發(fā)生和發(fā)展，二者是否有內(nèi)在聯(lián)系和詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

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