新疆一枝蒿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

熱依木古麗·阿布都拉，仲婕，佐艾熱·艾孜江，阿吉艾克拜爾·艾薩

(中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830011)

新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)系菊科蒿屬植物，主產(chǎn)于新疆維吾爾自治區(qū)，維吾爾語稱“一孜乎艾曼尼”，是維吾爾醫(yī)常用藥材，民間用藥歷史悠久［1］，具有抗炎、解毒、抗癌、抗變態(tài)反應(yīng)、健胃消食、活血化淤等作用;臨床上常用于感冒、蕁麻疹、咽炎、扁桃體炎、肝炎等疾病的治療，對(duì)感冒和肝炎的療效尤為顯著［2-3］。近年來，一枝蒿一直是新藥開發(fā)研究的熱點(diǎn)。隨著對(duì)一枝蒿藥材需求的不斷增大，導(dǎo)致市場(chǎng)上野生一枝蒿供不應(yīng)求，隨之開始大面積栽培一枝蒿。目前，對(duì)新疆一枝蒿藥材的化學(xué)成分、藥理作用等方面研究較多。而藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面，除了在《維吾爾藥志》有性狀和顯微描述外，尚無比較全面的報(bào)道。因此，筆者對(duì)新疆一枝蒿藥材進(jìn)行了水分、總灰分及含量測(cè)定，規(guī)定其限度，并建立了新疆一枝蒿藥材的薄層色譜鑒別方法，同時(shí)以新疆一枝蒿活性成分酮酸為對(duì)照品，采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)16批不同產(chǎn)地的藥材進(jìn)行含量測(cè)定，建立了一種穩(wěn)定、可靠的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Dionex Ultimate 3000型高效液相色譜儀(美國(guó));TCC-3000自動(dòng)進(jìn)樣器;UVD-3100紫外檢測(cè)器;Chromeleon色譜工作站，四元溶劑系統(tǒng)、在線脫氣機(jī)、柱溫箱;Phenomenex Synergi Fusion-RP(4.6mm×250mm，4 μm)色譜柱;島津 UV-2550型紫外可見分光光度儀(日本);Buchi R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士);ESJ180-4型萬分之一電子天平(沈陽龍騰電子有限公司);SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠);SK2200LH型超聲波清洗機(jī);HSGF254型薄層層析硅膠板(青島海洋化工廠)。

1.2 試劑 甲醇、乙腈(色譜純，F(xiàn)isher公司);其他試劑均為分析純;水為二次重蒸水;酮酸標(biāo)準(zhǔn)樣品為本實(shí)驗(yàn)室從新疆一枝蒿中制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品(批號(hào):20081022)，HPLC法檢測(cè)純度為99.66%;新疆一枝蒿藥材16批次，收集于不同產(chǎn)地，由新疆西域藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)地理研究所克里木教授鑒定為Artemisia rupestris L.，符合衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥材第1冊(cè)(1991年)有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測(cè)定 分別取3批供試品適量，按2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄Ⅸ H第一法規(guī)定測(cè)定［4］，水分含量結(jié)果為 5.87% ～7.11%，平均值為6.59%(n=3)。暫定水分應(yīng)不得超過8.0%。結(jié)果見表1。

2.2 總灰分測(cè)定 分別取3批供試品適量，按《中華人民共和國(guó)藥典》附錄Ⅸ K規(guī)定測(cè)定總灰分含量［4］，結(jié)果為7.65% ～13.33%，平均值為 10.50%(n=3)。因藥材總灰分各地差異比較大，暫定總灰分不得超過16%。結(jié)果見表1。

表1 新疆一枝蒿水分、總灰分測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination of moisture and total ash in Artemisia rupestris L.%，n=3

2.3 定性鑒別 取本品粉末2.5 g，加甲醇100mL，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。另取酮酸對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》附錄Ⅵ B)實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取酮酸對(duì)照品0.005 6 g，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，再精密量取此溶液1mL，置于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每毫升含酮酸56 μg)。

2.4.2 供試品溶液的制備 取新疆一枝蒿藥材粉末(過孔徑0.85mm藥篩)約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 100mL，超聲處理(功率250 W，頻率為 40 kHz)10min，放冷，過濾，置于100mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得。

2.4.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 經(jīng)紫外掃描，化合物一枝蒿酮酸在245 nm處有最大吸收，所以選定245 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 不同采集地的新疆一枝蒿薄層色譜圖1.昌吉;2.新湖農(nóng)場(chǎng);3.南山板房溝;4.對(duì)照品Fig.1 TLC chromatogram of Artemisia rupestris L.from different habitats1.Changji;2.Xinhu farm;3.Nanshan Banfanggou;4.reference

2.4.4 色譜條件 Phenomenex Synergi C18(4.6mm×250mm，4 μm)色譜柱;流動(dòng)相為甲醇-0.2%甲酸水溶液(67∶33);柱溫35℃;流速為1mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm;進(jìn)樣量10 μL;檢測(cè)時(shí)間20min。理論板數(shù)按酮酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。在此條件下，分別吸取對(duì)照品、供試品溶液各10 μL，注入色譜儀，結(jié)果色譜圖保留時(shí)間適中，分離度較好，見圖2。

2.4.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.4.1”配制的酮酸對(duì)照品溶液 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，分別置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，分別取稀釋液10 μL，進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)酮酸進(jìn)樣量做線性回歸，回歸方程為:Y=8.522 3X－6.150 7，r=0.997 2。結(jié)果表明酮酸在5.60～56.00 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.4.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取按“2.4.2”項(xiàng)配制的供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，按上述色譜條件，測(cè)峰面積，以峰面積計(jì)算RSD為1.02%(n=6)，結(jié)果表明方法精密度良好。

圖2 新疆一枝蒿對(duì)照品與藥材的HPLC色譜圖A.對(duì)照品;B.一枝蒿藥材;1.酮酸Fig.2 HPLC chromatograms of reference and Artemisia rupestris L.A reference;B.Artemisia rupestris L.;1.rupestonic acid

2.4.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，放置室溫，分別在0，2，4，6，8，10，12 h 進(jìn)樣測(cè)定酮酸峰面積，以峰面積計(jì)算，RSD為0.72%(n=7)，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取一枝蒿藥材粉末6份，每份約1g，按“2.4.2”項(xiàng)配制，測(cè)定酮酸含量，結(jié)果酮酸平均含量為5.234 mg·g-1，RSD 為0.57%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.4.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取藥材粉末9份，每份0.5 g，置于25mL量瓶中，分3組，每組分別加入1.4，1.7，2.0mL 酮酸對(duì)照品溶液(每毫升含酮酸560 μg)，照“2.4.2”項(xiàng)制備供試品溶液，測(cè)定含量并計(jì)算回收率，酮酸的加樣回收率 99.8%，RSD為0.25%，結(jié)果見表 2。

表2 酮酸加樣回收率測(cè)定結(jié)果Tab.2 Determination results of recovery of rupestonic acid

2.4.10 含量測(cè)定 取16批藥材，按“2.4.2”項(xiàng)制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，取其平均值，結(jié)果酮酸平均含量3.41 mg·g－1。見表3。

表3 樣品來源與含量測(cè)定結(jié)果Tab.3 Sources and content determination of samples

根據(jù)16批不同采購(gòu)地的新疆一枝蒿藥材測(cè)定結(jié)果，新疆一枝蒿藥材中酮酸的含量為 0.079% ～0.624%。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，藥材采收地不同，酮酸含量差別也比較大，因此暫定藥材含酮酸應(yīng)不得少于0.06%。

3 討論

藥材中所含水分和總灰分的高低，直接影響藥材在儲(chǔ)存過程中的質(zhì)量，故筆者對(duì)新疆一枝蒿的水分作了限度檢查。為了控制藥材的純度，因而對(duì)其進(jìn)行了總灰分限度的檢查。

酮酸是新疆一枝蒿中活性最強(qiáng)的一種倍半萜類成分，因此，建立了新疆一枝蒿中酮酸的HPLC法含量測(cè)定方法和薄層色譜鑒別方法。并對(duì)16種不同采購(gòu)地的新疆一枝蒿進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果含量差異比較大。該方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，重復(fù)性好，可有效控制新疆一枝蒿藥材及其成藥的質(zhì)量。

［1］劉勇民，劉偉新，沙吾提·伊克木，等.維吾爾藥志［M］.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:9.

［2］劉勇民.中草藥叢書一枝蒿［M］.烏魯木齊:新疆人民出版社，1986:100－101.

［3］斯拉甫，阿不都熱依木，古力娜，等.新疆一枝蒿提取物保肝作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，22(2):126－128.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:12.