王際亮，唐玉蓉

(勝利油田中心醫(yī)院，山東 東營 257034)

近年來，通過檢測體液中真菌菌體成分或代謝產(chǎn)物來診斷侵襲性真菌感染的研究較多，其中應(yīng)用較廣泛的是血漿葡聚糖檢測［1］。2010年5～11月，我們使用鱟試驗動態(tài)比濁法對62例確診及疑似侵襲性真菌感染患者血漿葡聚糖進行檢測并分析，以探討其臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期在我院綜合ICU、呼吸內(nèi)科、血液科、腫瘤科住院患者62例(觀察組)，男43例、女19例，年齡13～83歲、平均65歲。經(jīng)培養(yǎng)確診或臨床診斷侵襲性真菌感染32例，其中血液念珠菌感染8例，肺念珠菌感染13例，泌尿道念珠菌感染6例，肺曲霉菌感染5例;疑似感染30例。另取我院健康體檢各項檢查指標均正常人員20例為對照組，男11例、女9例，年齡25～55歲、平均46歲，其性別、年齡與觀察組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法 (1，3)-β-D葡聚糖標準液、多黏菌素B購自Sigma公司，鱟試劑盒購自湛江博康海洋生物有限公司，BET-24細菌內(nèi)毒素測定儀為天津天大天發(fā)科技有限公司產(chǎn)品。血漿葡聚糖檢測使用鱟試驗動態(tài)比濁法:①采集1 ml靜脈血加入含有1 ml的Ⅰ號處理液的無熱源帶帽試管內(nèi)，3200 r/min離心6 min。②取①中上清液0.5 ml加0.5 ml的Ⅱ號處理液混勻，90℃加熱6 min，然后4200 r/min離心6 min。③取0.5 ml②中上清液加同體積的0.1 mg/ml多黏菌素B混勻，37℃水浴15 min。④取0.2 ml③中液體加入0.1 ml鱟試劑，混勻后插入內(nèi)毒素測定儀進行檢測。當測定管的吸光度值通過所設(shè)定的閾值(OD=0.02)后，終止反應(yīng)。儀器根據(jù)預(yù)先制做好的標準曲線自動計算出樣本中葡聚糖含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5軟件;計量資料以表示，組間比較采用t檢驗或t’檢驗;陽性率比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各類感染患者及對照組血漿葡聚糖含量 血液念珠菌感染、肺念珠菌感染、泌尿道念珠菌感染、肺曲霉菌感染、疑似感染患者及對照組血漿葡聚糖含量分別為(227.2 ± 129.4)、(160.4 ± 77.8)、(127.8 ±68.1)、(166.4 ±94.1)、(61.2 ±51.1)、(13.2 ±7.8)ng/L。各類感染患者葡聚糖水平均明顯高于對照組(P均＜0.01)。確診或臨床診斷患者與疑似患者比較差別亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.01)。

2.2 血漿葡聚糖含量檢測與真菌培養(yǎng)真菌感染陽性率比較 真菌培養(yǎng)及血漿葡聚糖含量測定(含量大于60 ng/L判為陽性)真菌感染陽性檢出率比較見表1。顯示兩種方法診斷侵襲性真菌感染的陽性率有差異(χ2=4.08，P ＜0.05)，血漿葡聚糖測定陽性率顯著高于真菌培養(yǎng)法。

表1 血漿葡聚糖含量檢測與真菌培養(yǎng)真菌感染陽性率比較(例)

3 討論

真菌細胞壁由葡聚糖、甘露糖和幾丁質(zhì)等成分組成。其中葡聚糖廣泛存在于除接合菌、隱球菌之外的真菌細胞壁中，占細胞壁干重的80% ～90%。其形式以(1，3)-β-D糖苷鍵連接的葡聚糖殘基骨架作為主鏈，分支狀(1，6)-β-D葡聚糖殘基作為側(cè)鏈。細菌、病毒以及動物、人體細胞中均不含葡聚糖成分。當真菌細胞侵入人體的深部組織后，葡聚糖分解成(1，3)-β-D 葡聚糖和(1，6)-β-D 葡聚糖等代謝產(chǎn)物而釋放進入血液和其他體液。葡聚糖可特異性地激活鱟變形細胞溶解產(chǎn)物中的G因子(一種絲氨酸蛋白酶原)，從而旁路激活鱟試驗。國外學(xué)者基于此法發(fā)現(xiàn)，血清中(1，3)-β-D-葡聚糖的檢測對侵襲性真菌感染的診斷有重要價值［2］，為早期快速確診侵襲性真菌感染提供了有力證據(jù)。呂沛華等［3］通過感染動物模型的制作研究表明，淺表真菌感染或真菌定植時血漿葡聚糖水平通常不會升高。國內(nèi)學(xué)者研究也表明，血漿葡聚糖的檢測用于侵襲性真菌感染的早期診斷明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和血清學(xué)診斷試驗［4，5］。本研究結(jié)果顯示，各類感染者葡聚糖水平明顯高于健康對照組(P＜0.01)，確診和臨床診斷各組也高于疑似患者(P＜0.01)。因此血漿葡聚糖的檢測可做為診斷侵襲性真菌感染的一個有意義的指標。

在疑似患者培養(yǎng)陰性的30例標本中有10例葡聚糖陽性。在觀察的所有患者中，真菌培養(yǎng)法陽性率為51.6%，葡聚糖陽性率為64.5%，后者明顯高于前者。真菌培養(yǎng)法一般需要幾天才能發(fā)出報告，而血漿葡聚糖檢測只需1 h左右就能得出實驗結(jié)果，可提高診斷效率、及時觀察病情和評價抗真菌藥物的治療效果［6］。然而，盡管臨床研究已顯示血漿葡聚糖檢測是診斷侵襲性真菌感染的有效指標，但是目前有很多研究也證實在某些物質(zhì)中存在葡聚糖類似物，可造成檢測的假陽性結(jié)果［7］。因此，葡聚糖的檢測結(jié)果需結(jié)合患者的情況綜合判斷以提高診斷的準確性。

［1］李軍，席麗艷.深部真菌抗原成分及代謝產(chǎn)物在系統(tǒng)性深部真菌感染診斷方面的應(yīng)用進展［J］.國外醫(yī)學(xué):皮膚性病學(xué)分冊，2004，30(4):253-255.

［2］Obayashi T，Arimoto Y，Tamura H，et al.Determination of plasma 1，3-β-D-glucan，a new diagnostic aid to deep mycosis［J］.J Med Vet Mycol，1992，30(1):275-280.

［3］呂沛華，趙蓓蕾，施毅，等.侵襲性肺部真菌感染動物模型制作及血漿β-葡聚糖檢測的診斷價值［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2007，17(11):1328-1331.

［4］聞平，郭月芳.深部深部真菌感染患者血清葡聚搪檢測的臨床意義［J］.中國誤診學(xué)雜志，2003，3(1):10-11.

［5］張利俠，李盲會，張華，等.檢測血漿(1，3)β-D葡聚糖對深部真菌感染診斷的研究［J］.西北大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2009，39(1):83-86.

［6］李世榮，王紅，文艷.血漿(1，3)-β-D-葡聚糖與抗深部白色念珠菌感染藥物療效關(guān)系的試驗研究［J］.臨床和試驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，6(6):20-22.

［7］高蕾，周新.(1，3)-β-D-葡聚糖檢測在侵襲性真菌感染中的診斷意義［J］.中國感染與化療雜志，2008，8(2):123-125.