何樂春 重慶醫(yī)療器械質量檢驗中心（重慶 401121）

0.引言

血漿或血清蛋白質是血漿固體成分中含量最多、組成復雜、功能廣泛的一類化合物。檢測許多疾病狀態(tài)下的總蛋白水平變化具有重要意義?？偟鞍咨咄怯捎谝环N或多種免疫球蛋白增加所引起的，如：急性失水，代謝鈉丟失，多發(fā)性骨髓瘤等；總蛋白降低大多是由于白蛋白的降低所引起，如：水鈉潴留，長期營養(yǎng)不良，嚴重結核，甲亢和惡性腫瘤等。因此，臨床上檢測血清總蛋白及其組分，不僅可作為評價營養(yǎng)狀態(tài)及消化功能的指標，而且對肝臟疾病、腎臟疾病、出血性疾病和免疫性疾病等的診斷、治療和愈后判斷有重要價值。

我們對于總蛋白試劑盒試劑合理性和標準品準確性的研究，不僅可以有效地節(jié)約原材料、降低生產成本、規(guī)范行業(yè)，對臨床檢驗的準確性也大有幫助。

實驗原理

雙縮脲法：在堿性條件下，蛋白質分子中的肽鍵與二價銅離子發(fā)生雙縮脲反應生成紫紅色的絡合物，其中每個銅離子與五至六個肽鍵絡合，在540nm波長處有最大吸收峰，且呈色強度在一定濃度范圍內與肽鍵數(shù)量即蛋白質含量成正比，經(jīng)與同樣處理的蛋白質標準液比較，即可求得蛋白質的含量。該法為臨床測定血清總蛋白的首選方法。

1.材料和方法

編號 生產廠家名稱試劑盒1 中生北控生物科技股份有限公司試劑盒2 四川省邁克科技有限責任公司試劑盒3 上海榮盛生物技術有限公司試劑盒4 重慶百克醫(yī)療器械有限責任公司注：四種試劑盒所提供的標準液均為70.0g/L

表1. 總蛋白測定

混合均勻，在37℃下保溫10分鐘，以試劑空白管調零，在546nm波長下測其吸光度，得值。

1.1 儀器

半自動生化分析儀

1.2 材料

選用四個廠家生產的總蛋白測定試劑盒，見下表。

1.3 方法

采用試劑盒1提供的總蛋白標準液作為標準品，以試劑盒2、試劑盒3和試劑盒4生產的標準液作為樣品，分別嚴格按試劑盒1的使用說明書進行操作，得到各樣品的測定值，以原試劑盒提供的標準液濃度為真值，然后按以下公式計算各樣品的檢測誤差（以70.0g/L作為各樣品的真值）。

誤差=（︱測定值-70︱/70）×100%總蛋白測定方法：見表1。

2.結果

表2：

表3：

3.討論

目前，市場上有很多廠家生產的用于臨床上測定人血清總蛋白的總蛋白試劑盒，可謂品種繁多，但試驗原理都是采用雙縮脲法，而且很多廠家在生產試劑盒的同時都相應地生產了與其對應的標準品。盡管蛋白質標準品是一個相對很穩(wěn)定的試劑，雙縮脲法的重復性也好，但各試劑盒對同一樣品的檢測仍存在誤差，誤差范圍很大，有的不足1%，有的已大于5%（但都在 ±10%以內），這一范圍太寬，與臨床上正常人血清總蛋白在60～80g/L這一范圍存在的差異較大。從以上結果來看，試劑盒1和3生產的蛋白質標準品可以互換，而試劑盒1和2以及試劑盒1和4的標準品不能互換。但總的來看，各廠家生產的試劑盒試劑和標準品最好不要互換。

建議一：雙縮脲法是臨床上測定血清總蛋白質首選最方便、最實用方法。雙縮脲試劑有不同配方，大多數(shù)加入灑石酸鉀鈉，與Gu2＋形成穩(wěn)定的絡合銅離子，以防止Gu（OH）2不穩(wěn)定形成沉淀。故建議酒石酸鉀鈉與硫酸銅之比不宜低于3：1。

建議二：各種血清蛋白與雙縮脲反應顯色程度基本一致，不同蛋白質特異性差異甚小。因此，可用混合血清、人血清白蛋白和牛血清白蛋白作標準。為規(guī)范目前市場上各廠家生產的試劑盒的質量及配合臨床需要，建議標準品由國家統(tǒng)一生產發(fā)放。