張立世,姜 敏,楊樹(shù)寶,姜云壘,欒維民

(11吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,吉林長(zhǎng)春 130118;21東豐縣第三中學(xué),吉林東豐 136300)

雞盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)早期發(fā)育的動(dòng)態(tài)觀察

張立世1,姜 敏2,楊樹(shù)寶1,姜云壘1,欒維民1

(11吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,吉林長(zhǎng)春 130118;21東豐縣第三中學(xué),吉林東豐 136300)

本研究利用HE染色方法結(jié)合圖像分析軟件和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件,觀察雛雞不同生長(zhǎng)發(fā)育階段盲腸扁桃體的組織學(xué)發(fā)育過(guò)程和結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明:隨著日齡的增長(zhǎng),盲腸扁桃體特征結(jié)構(gòu)不斷發(fā)育成熟,并在21日齡時(shí)基本達(dá)到成熟水平。21日齡時(shí),盲腸扁桃體粘膜層中下部形成生發(fā)中心,其數(shù)目在35日齡時(shí)達(dá)到穩(wěn)定。證實(shí),雞出殼后初期,盲腸扁桃體免疫功能迅速增強(qiáng),并在35日齡時(shí)達(dá)到成熟水平。

雞;盲腸扁桃體;組織結(jié)構(gòu);發(fā)育

盲腸扁桃體位于直-盲-回腸連接處的盲腸基部,肉眼即可見(jiàn)該處略有膨大,其結(jié)構(gòu)與回腸派氏結(jié)相似,由彌散型淋巴組織和密集型淋巴組織組成,是禽類(lèi)最大的腸相關(guān)性淋巴組織[1]。在盲腸扁桃體的生發(fā)中心中,既有T細(xì)胞存在也有B細(xì)胞分布,漿細(xì)胞表達(dá)表面球蛋白IgG、IgM和IgA[2]。在固有層中部或深部的生發(fā)中心周?chē)植荚S多CD4+T淋巴細(xì)胞,CD8+T淋巴細(xì)胞主要分布在上皮下固有層中[3]。盲腸扁桃體作為禽類(lèi)最大的腸相關(guān)性淋巴組織,對(duì)腸道內(nèi)細(xì)菌和其它抗原物質(zhì)起著局部免疫的作用:人為口服感染沙門(mén)氏菌后,IgA+和IgM+細(xì)胞的數(shù)量顯著增加[4],并且雞自然感染沙門(mén)氏菌后,盲腸扁桃體中的CD4+、CD8+和CD3+細(xì)胞的數(shù)量都不同程度的增加[5]。

目前關(guān)于雞盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)發(fā)育的報(bào)道較少,雖然以往對(duì)特定時(shí)期盲腸扁桃體的組織學(xué)和免疫學(xué)特征有一些研究報(bào)道[6-7],但結(jié)論都有所不同。本研究旨在采用HE染色方法,觀察不同生長(zhǎng)發(fā)育階段雞盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)的發(fā)育情況,從而了解雞腸相關(guān)性淋巴組織特別是盲腸扁桃體發(fā)育早期的免疫狀態(tài),并為進(jìn)一步為確定腸道口服免疫的最佳時(shí)期和最佳途徑的研究打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

海蘭白雞種蛋 (長(zhǎng)春凈月潭旅游開(kāi)發(fā)區(qū)銀河養(yǎng)殖場(chǎng))。

1.1.2 試劑及器具

11主要試劑 伊紅,蘇木精 (中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司);冰凍切片用OCT組織包埋液 (美國(guó)Sakura公司)。

21器具 依愛(ài)EIF/C1DME3456出雛機(jī)/孵化機(jī),Olympus CX41顯微鏡,Leica CM1850冰凍切片機(jī),Pixera pro150ES圖像采集器;Image-pro express 511圖像分析軟件 (美國(guó)Media Cybernetics公司)。

1.2 方法

1.2.1 取材

分別選擇15、18、20日雞胚及1、4、7、14、21、35、56日齡雛雞,每個(gè)時(shí)期取5只雞 (胚)的盲腸扁桃體,制成冰凍切片,片厚6μm。-80℃保存?zhèn)溆?以進(jìn)行HE染色。

1.2.2 冰凍切片HE染色方法

10%甲醛固定1min;蒸餾水洗兩次,2min/次;蘇木素染色8min;1%鹽酸酒精分化20s;自來(lái)水返藍(lán)10min;伊紅復(fù)染30s;梯度酒精脫水:75%酒精20s→85%酒精20s→95%酒精兩次 (1min/次) →無(wú)水酒精兩次 (2min/次);二甲苯透明兩次,5min/次;中性樹(shù)膠封片;照相。

2 結(jié)果

胚胎期時(shí),盲腸腸絨毛的粘膜層細(xì)胞較稀疏 (圖1-a),出殼后1日齡時(shí)細(xì)胞排列較胚胎期更為緊密,腸絨毛變粗并增長(zhǎng),腸腺也較為明顯 (圖1-b)。

圖1 胚胎時(shí)期雞盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)的發(fā)育

4日齡時(shí),粘膜結(jié)構(gòu)同樣發(fā)生較大變化,腸絨毛固有層明顯增寬、增厚,從而使部分腸絨毛互相融合形成大的粘膜皺襞,而且可以明顯觀察到在這較大的粘膜皺襞中有大量淋巴細(xì)胞聚集,形成密集的淋巴組織(圖1-c)。隨著日齡增長(zhǎng),腸腺深度和皺襞高度顯著增加 (P<0105),并且淋巴組織的面積逐漸增加,盲腸扁桃體的這些特征性結(jié)構(gòu)基本在21日齡時(shí)達(dá)到穩(wěn)定 (表1),但生發(fā)中心有較大變化。

表1 不同日齡雞盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)的變化

21日齡時(shí)可觀察到由網(wǎng)狀細(xì)胞包裹的形態(tài)結(jié)構(gòu)完整的生發(fā)中心,而在21日齡之前并未觀察到生發(fā)中心的出現(xiàn)。隨日齡增長(zhǎng)生發(fā)中心的直徑顯著增加 (P<0105),且數(shù)目也逐漸增多 (表1),并基本在35日齡時(shí)達(dá)到穩(wěn)定。各日齡生發(fā)中心大多數(shù)分布在粘膜層的中下部區(qū)域 (圖1-d)。

3 討論

本課題組此前應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法在14日齡時(shí)觀察到由B淋巴細(xì)胞聚集的生發(fā)中心,21日齡時(shí)在粘膜固有層中下部區(qū)域存在輪廓清晰的生發(fā)中心[2]。而本研究應(yīng)用HE染色方法觀察14日齡時(shí)盲腸扁桃體中未見(jiàn)生發(fā)中心,這與Jeurissen等利用一般組織學(xué)方法在14日齡時(shí)并未發(fā)現(xiàn)有生發(fā)中心出現(xiàn)相一致[7],但與Hoshi報(bào)道的2周齡[8]和 G omez報(bào)道的4日齡[9]卻存在著差異。

在外周淋巴組織中,生發(fā)中心的出現(xiàn)在一定程度上與外界抗原的刺激直接相關(guān)[4]。因此,生發(fā)中心在盲腸扁桃體內(nèi)出現(xiàn)的時(shí)間及數(shù)量的變化在很大程度上受到腸道中正常菌群的種類(lèi)、出現(xiàn)的時(shí)間、數(shù)量的多少以及是否被感染感染等多方面因素的影響。另外,雞的飼養(yǎng)條件、品種和免疫程序等也都是生發(fā)中心變化的影響因素。但可以確定的是,盲腸扁桃體中的生發(fā)中心基本出現(xiàn)在1至3周齡之間。本研究中試驗(yàn)雞的飼養(yǎng)環(huán)境相對(duì)較清潔,受到外界抗原的刺激相對(duì)較少,因而組織結(jié)構(gòu)成熟較晚。而Hoshi報(bào)道由于試驗(yàn)雞感染隱孢子蟲(chóng)病,盲腸扁桃體在14日齡時(shí)就出現(xiàn)生發(fā)中心,而且盲腸扁桃體的組織結(jié)構(gòu)基本發(fā)育成熟[8],這說(shuō)明盲腸扁桃體持續(xù)受泄殖腔回流內(nèi)容物抗原的刺激,從而促進(jìn)了盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)的提早成熟。

本研究發(fā)現(xiàn)盲腸扁桃體組織結(jié)構(gòu)的發(fā)育在出殼之后才比較明顯,尤其是在4日齡時(shí),皺襞高度明顯增加。至35日齡,各種組織結(jié)構(gòu)基本達(dá)到成熟水平,也就證明此時(shí)盲腸扁桃體的免疫功能基本成熟,可以提供足夠的免疫保護(hù)作用。

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[2]楊樹(shù)寶,張英楠,高晶晶,等.雞盲腸扁桃體中B淋巴細(xì)胞的發(fā)育[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2009,39(11):999-1002.

[3]欒維民,楊樹(shù)寶,楊麗華,等.雞盲腸扁桃體中T淋巴細(xì)胞及其亞群的發(fā)育[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2008,38(4):338-341.

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Dynamic Observation on the Early Development of Histological Structure of Cecal Tonsil in Chickens

ZHANGLi-shi1,JIANGMin2,Y ANG Shu-bao1,JIANG Yun-lei1,LUAN Wei-min1
(1.College of Animal Science and Technology,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;2.Dongfeng No.3 Middle School,Dongfeng 136300,China)

This study investigated the development process and structural features of cecal tonsil in chickens of different growth stages by the method of HE staining combining with image analysis software and data statistics software.The findings showed that the characteristic structure are mature gradually with the increase of day old,and reach mature level at 21 days old.The germinal center firstly emerges in the middle and inferior part of mucous at 21 days old,and the number is stable at 35 days old.The results reveal that the cellular immune function of cecal tonsil in chickens are enhanced rapidly after hatch2 ing,and reach mature level at 35 days old.

chicken;cecal tonsil;histological structure;development

S831

A

1008-178X(2011)02-0072-03

2010-10-09

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (30901065)。

張立世 (1982-),男,陜西榆林人,吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院助理實(shí)驗(yàn)師,從事動(dòng)物形態(tài)和鳥(niǎo)類(lèi)生態(tài)學(xué)研究。