楊?；?李沖 趙永福 鄭麗麗

·論著·

胰島素瘤及正常胰腺組織中胰島素原、胰島素的表達

楊?；?李沖 趙永福 鄭麗麗

目的檢測胰島素瘤及瘤旁正常胰腺組織中胰島素、胰島素原、C肽的表達水平，探討它們的作用。方法選取2006年9月至2009年12月確診的38例胰島素瘤及20例相應瘤旁正常胰腺組織標本，采用免疫組化染色的方法檢測組織中胰島素原、胰島素、C肽的表達。結(jié)果胰島細胞瘤和瘤旁正常胰腺組織均表達胰島素、C肽、胰島素原。100%的胰島素瘤組織胰島素原和C肽強表達，而55%～60%正常胰腺組織為弱表達；79%的胰島素瘤組織胰島素表達為+++，而85%的正常胰腺組織胰島素的表達為++++。38例胰島素瘤的胰島素原、C肽陽性表達細胞數(shù)占80%～100%，胰島素陽性表達細胞數(shù)占50%～70%，胰島素原/胰島素>1占78.9%，正常胰腺組織分別為20%～80%、 60%～90%、10.0%，兩者差異均非常顯著(P值均<0.05)。結(jié)論胰島素瘤組織的胰島素原/胰島素>1者占78.9%，測定血漿胰島素原可能有助于其診斷。

胰腺； 胰島素瘤； 胰島素； 胰島素原； C肽； 免疫組織化學

胰島素瘤是最常見的胰腺內(nèi)分泌腫瘤，絕大多數(shù)屬良性，惡性占10%左右。腫瘤大量分泌胰島素(原)造成患者低血糖，導致大腦皮質(zhì)退行性改變和萎縮,造成神經(jīng)組織不可逆性損傷，因此早期發(fā)現(xiàn)低血糖并尋找其病因，及早完整切除腫瘤具有重要的臨床意義。研究表明，80%以上胰島素瘤患者血漿胰島素原以及胰島素原/胰島素比值升高，但胰島素瘤組織的胰島素原表達水平是否高于正常胰腺組織尚有待證實。為此，本研究檢測胰島素瘤及瘤旁胰腺組織中胰島素及胰島素原的表達。

資料與方法

一、臨床資料

選取2006年9月至2009年12月我院38例經(jīng)術(shù)后病理證實的胰島素瘤及20例配對的瘤旁正常胰腺組織標本。胰島素瘤的診斷參考Yang等[1]標準。

二、胰島素原、胰島素、C肽的表達檢測

采用免疫組化方法檢測胰島素瘤和配對瘤旁正常胰腺組織中胰島素原、胰島素、C肽的表達。鼠抗人胰島素單抗、PowerVisionTM二步法免疫組化試劑和DAB顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗人C肽多抗、鼠抗人胰島素原單抗購自江蘇希望生物科技有限公司。組織標本常規(guī)行病理檢查。細胞質(zhì)有棕黃色著色為陽性細胞。每張切片于高倍鏡下選取5個視野計數(shù)陽性細胞百分率，<20%為+，20%～<40%為++，40%～<60%為+++，>60%為++++。

三、統(tǒng)計學分析

結(jié) 果

一、臨床一般情況

38例胰島素瘤患者中,男16例,女22例，年齡11～74歲,平均(42±14)歲。發(fā)病到確診時間為15～1970 d，平均(495±673)d。所有胰島素瘤均為良性、散發(fā)，瘤體直徑0.5～3.0 cm，平均(1.78±0.80)cm,其中60.5%的瘤塊直徑≤2.0 cm。腫瘤位于胰頭部8例，胰體尾部24例，鉤突部6例。

二、胰島素、C肽、胰島素原表達

瘤旁正常胰腺組織中胰島素及C肽均表達于胰腺β細胞胞質(zhì)，胰島素原多位于核周；胰島素瘤組織中表達于瘤細胞胞質(zhì)，少數(shù)位于核周(圖1)。

胰島細胞瘤和瘤旁正常胰腺組織均表達胰島素、C肽、胰島素原。但胰島素瘤組織胰島素原和C肽均強表達，為+++～++++，而正常胰腺組織多數(shù)(55%～60%)為弱表達；相反，79%的胰島素瘤組織胰島素的表達為+++，而85%的正常胰腺組織胰島素的表達為++++，兩者間相差非常顯著(P值均<0.05，表1)。

圖1胰島素瘤和正常胰腺組織胰島素(a、b)、胰島素原(c、d)、C肽(e、f)表達(免疫組化 ×400)

表1 胰島素瘤及瘤旁正常胰腺組織中胰島素、C肽、胰島素原陽性表達例數(shù)

三、胰島素原與胰島素的比值

胰島素瘤組織中胰島素原、C肽陽性表達細胞數(shù)為80%～100%，胰島素陽性表達細胞數(shù)50%～70%；正常胰腺組織中胰島素原、C肽陽性表達細胞數(shù)20%～80%，胰島素陽性表達細胞數(shù)60%～90%。30例 (78.9%)胰島素瘤組織的胰島素原/胰島素>1(1.06～1.188)，8例(21.1%)比值<1；而18例 (90.0%)正常胰腺組織的胰島素原/胰島素<1(0.84～0.94)，2例比值(10.0%)>1，兩組間差異非常顯著(P<0.05)。

四、血胰島素水平

38例胰島素瘤患者中28例低血糖發(fā)作時測血清胰島素水平，其中10例為1.8～6.9 mIU/L，平均為(4.1±1.8)mIU/L，其相對應的胰島素瘤組織中胰島素原/胰島素>1者有8例， <1者有2例。18例血清胰島素水平升高，其相對應的胰島素瘤組織中胰島素原/胰島素>1者有14例,<1者有4例。血清胰島素水平與組織中胰島素原/胰島素比值無相關(guān)性(χ2=0.0189，P>0.05)。

討 論

功能性胰腺內(nèi)分泌腫瘤包括胰島素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤等，其中以胰島素瘤最常見，發(fā)病率為1/100萬，占胰腺腫瘤的1%～2%[2-3]。胰島素瘤患者多表現(xiàn)為高胰島素血癥和低血糖[4]。Service等[5]提出,在低血糖情況下(<2.5 mmol/L),胰島素水平高于6 μU/ml(放免法)就是不適當?shù)囊葝u素分泌。

胰島素瘤多存在胰島素原向胰島素轉(zhuǎn)化過程中的酶缺陷,且因胰島素合成過于旺盛,胰島素原在β細胞囊泡中儲存時間明顯縮短,因此常有較多的胰島素原未經(jīng)裂解即被釋放入血，導致患者血胰島素原水平升高。Kao等[6]報道20例胰島素瘤患者,胰島素原明顯升高的患者比例為85%,而僅有70%的患者出現(xiàn)免疫反應性胰島素或C肽水平的升高。Piovesan等[7]報道1例胰島素瘤患者,血胰島素水平為正常低值,而胰島素原水平明顯增高。本研究顯示，胰島素原/胰島素>1的胰島素瘤占78.9%，證實血液中胰島素原水平升高來源于瘤組織。

胰島素瘤患者血糖下降時并不能反饋抑制腫瘤細胞分泌胰島素，胰島素持續(xù)從腫瘤組織中分泌導致血中胰島素水平升高。一般說來，瘤內(nèi)所含胰島素濃度越低，胰島素原越高，提示胰島素瘤的主要缺陷是胰島素的儲存能力降低，引起腫瘤細胞內(nèi)胰島素的自主性分泌。大量研究證實，85%～100%胰島素瘤患者血漿胰島素原以及胰島素原/胰島素比值升高。但部分患者胰島素原/胰島素>1，而血清胰島素水平不高，本組有8例。考慮與以下因素有關(guān)：(1)采血后未立刻檢測或冷凍,導致胰島素分子被內(nèi)源性酶消化降解[7]。但C肽不具生物活性,不易被其他臟器攝取和降解,可檢測C肽以彌補。(2)部分胰島素瘤的分泌功能在一定程度上受血葡萄糖水平影響。當血糖濃度下降到一定程度時,可以對腫瘤起到負反饋調(diào)節(jié),抑制其釋放胰島素[8]。(3)有些胰島素瘤主要或完全分泌類似胰島素活性的、且能調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的激素,如胰島素原。而目前應用的胰島素檢測試劑盒僅有0.3%可以與胰島素原產(chǎn)生交叉反應,因此目前檢測方法不能準確反映胰島素原的水平。(4)胰島素分泌常呈周期性與脈沖性，外周血中峰值與最低值可相差5倍，需多次檢測。

本實驗結(jié)果顯示，胰島素瘤組織的胰島素原、C肽高于正常胰腺組織，胰島素低于正常胰腺組織，這與血液中相應激素水平差異相一致，與楊踐等實驗結(jié)果相似[9]。因此對臨床上胰島素水平不高的胰島素瘤定性有困難的患者，測定其血漿中的胰島素原、C肽水平對明確診斷有較大的指導意義。

[1] Yang YM,Liu TH,Chen YJ,et al.Chromosome 1q lossof heterozygosity frequently occurs in sporadicinsulinomas and is associated with tumor malignancy.Int J Cancer,2005,117:234-240.

[2] Dixon E,Pasieka JL.Functioning and nonfunctioning neuroendocrine tumors of the pancreas.Curr Opin Oncol,2007,19:30-35.

[3] Chavan A,Kirchhoff TD,Brabant G,et al.Role of the intraarterial calcium stimulation test in the preoperative localization of insulino-mas.Eur Radio,2000,10:1582-1586.

[4] Marks V,Teale JD.Tumors producing hypoglycemia.Diabetes Metab Rev,1991,7:79-91.

[5] Service FJ.Classification of hypoglycemic disorders.Endocrinol Metab Clin North Am,1999,28:501-532.

[6] Kao PC,Taylor RL,Service FJ.Proinsulin by immunochemilu-minometric assay for the diagnosis of insulinoma.J Clin Endocrinol Metab,1994,78:1048-1051.

[7] Piovesan A,Pia A,Visconti G,et al.Proinsulin-se-creting neuroendocrine tumor of the pancreas.J Endocrinol Invest,2003,26:758-761.

[8] Czupryniak L,Strzelczyk J,Drzewoski J.Diagnostic difficulties in long-standing insulinoma with near-nor-mal plasma insulin levels.J Endocrinol Invest,2005,28:170-174.

[9] 楊踐,儲謙,許海敏.胰島腫瘤及胰島增生的免疫組化研究,臨床與實驗病理學雜志,1996,37-41.

2010-10-18)

(本文編輯：呂芳萍)

Expressionofproinsulinandinsulinininsulinomaandnormalpancreas

YANGHai-hua,LIChong,ZHAOYong-fu,ZHENGLi-li.

DepartmentofEndocrinology,FirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

ZHENGLi-li,Email:Zhengli1012@126.com

ObjectiveTo investigate the expression of proinsulin, insulin, C-peptide in insulinoma and normal pancreas and their roles.MethodsThirty-eight cases of insulinoma and 20 cases of normal pancreas from Sep. 2006 to Dec. 2009 in our hospital were selected. Immunohistochemistry was used to determine the expression of proinsulin, insulin, C-peptide.ResultsProinsulin, insulin, C-peptide was expressed in insulinoma and normal pancreas. Proinsulin, C-peptide were strongly expressed in 100% insulinoma, while they were weekly expressed in 55%～60% normal pancreas; insulin was expressed as +++ in 79% insulinoma, while it was expressed as ++++ in 85% normal pancreas. Proinsulin, C-peptide positive cell accounted for 80%～100% of 38 insulinoma, and insulin positive cell accounted for 50%～70%, the proinsulin/insulin ratio >1 accounted for 78.9%; while the corresponding values were 20%～80%, 60%～90%, 10.0% in normal pancreas, and the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionsThe proinsulin/insulin ratio >1 is 78.9% in insulinoma, and detection of proinsulin may help to diagnose insulinoma.

Pancreas; Insulinoma; Insulin; Proinsulin; C-peptide; Immunohistochemistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.02.018

450052 河南鄭州，鄭州大學第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科(楊海花、李沖、鄭麗麗)，肝膽外科(趙永福)

鄭麗麗，Email：Zhengli1012@126.com