均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選胡黃連中胡黃連苷的提取工藝Δ

段曉穎，高衛(wèi)芳，吳彩麗，張輝（.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院國家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，鄭州市 450000；.河南新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，衛(wèi)輝市 45300）

均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選胡黃連中胡黃連苷的提取工藝Δ

段曉穎1＊，高衛(wèi)芳2，吳彩麗1，張輝1（1.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院國家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，鄭州市 450000；2.河南新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，衛(wèi)輝市 453100）

目的：優(yōu)選胡黃連中有效成分胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的最佳提取工藝。方法：選用均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的總轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，考察乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)及乙醇用量對(duì)胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ提取的影響。結(jié)果：最佳提取工藝為胡黃連飲片加65%乙醇10倍量，提取3次，每次2h。結(jié)論：所優(yōu)化的工藝可靠，適用于胡黃連中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的提取。

胡黃連；胡黃連苷Ⅰ；胡黃連苷Ⅱ；均勻設(shè)計(jì)；提取工藝

胡黃連為玄參科植物胡黃連Picrorhiza scrophularii flora Pennell的干燥根莖。具有退虛熱、除疳熱、清濕熱的功能，主要用于骨蒸潮熱、小兒疳熱、濕熱瀉痢、黃疸尿赤、痔瘡腫痛，早在《唐本草》就有記載?，F(xiàn)代藥理研究表明，本品具有較好的保肝作用，并可促進(jìn)肝細(xì)胞再生，同時(shí)具有降血糖、降血脂、抗炎及抗?jié)兊淖饔肹1]。胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ是胡黃連的主要有效成分，為環(huán)烯醚萜苷類化合物，是胡黃連及其制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分。為了更好的利用胡黃連，提高胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的轉(zhuǎn)移率，筆者采用均勻設(shè)計(jì)法進(jìn)行胡黃連提取工藝研究，考察了提取次數(shù)、乙醇濃度、提取時(shí)間及乙醇用量對(duì)有效成分轉(zhuǎn)移率的影響，確定了最佳工藝條件。

1 儀器與試藥

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津公司）；CP225D電子天平（德國賽多利斯公司）；RE-520旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-250真空干燥箱（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

胡黃連藥材，購于安徽亳州，由河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院陳天朝主任藥師鑒定為玄參科植物胡黃連P.scrophularii flora Pennell的干燥根莖；胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ?qū)φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所，批號(hào)分別為111727-20050、111596-20030）；磷酸、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇對(duì)提取率影響較大的4個(gè)因素：乙醇濃度（X1）、乙醇用量（X2）、提取時(shí)間（X3）和提取次數(shù)（X4），進(jìn)行9次均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)。因素水平見表1。

2.2 樣品溶液的制備

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

取胡黃連藥材200g，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)，加入一定濃度、一定體積的乙醇，加熱回流提取，收集提取液，濾過，合并，備用。

2.3 胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（35∶65∶0.1）；檢測(cè)波長：275nm，流速：1mL·min-1，柱溫：25℃。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取胡黃連苷Ⅰ對(duì)照品4.97mg、胡黃連苷Ⅱ?qū)φ掌?.09mg，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。精密量取其1mL，置于5mL量瓶中，加甲醇稀釋，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液（每1mL含胡黃連苷Ⅰ39.76μg、胡黃連苷Ⅱ48.72μg）。2.3.3 供試品溶液的制備 精密吸取各樣品溶液適量，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.4 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ色譜峰面積。分別以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的回歸方程分別為Y胡黃連苷Ⅰ＝2408171.25X胡黃連苷Ⅰ+5921.70、Y胡黃連苷Ⅱ＝977847.69X胡黃連苷Ⅱ+1007.00，r均為0.9999。結(jié)果表明，胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的進(jìn)樣量分別在0.08～0.40、0.12～0.60μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。根據(jù)線性范圍分別計(jì)算供試品中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ含量，并按下式分計(jì)算提取液中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總轉(zhuǎn)移率：總轉(zhuǎn)移率＝胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總含量×提取液體積/（藥材質(zhì)量×藥材含量）×100%。

2.4 均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)處理與分析

以胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)優(yōu)選提取工藝。均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果見表2。

以各因素為自變量，總轉(zhuǎn)移率為因變量，采用DPS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多元回歸，得方程：Y＝11.0501+0.7444X1+0.8285X2+6.9676X3+17.1388X4（R＝0.9764，F(xiàn)＝20.4624，P＝0.0063），方程不具有顯著性。在此基礎(chǔ)上以a＝0.05水平進(jìn)行逐步回歸，得方程：Y＝19.1911+6.9817X3+16.9867X4（R＝0.9598，F(xiàn)＝35.1024，P＜0.001），方程具有極顯著性。

由以上方程可知，影響胡黃連中胡黃連苷提取率的各因素作用大小順序?yàn)閄4＞X3＞X2＞X1，即提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞乙醇用量＞乙醇濃度，其中提取次數(shù)和提取時(shí)間取值越大越好，即Y值最大。X4、X3的取值分別為3、2；乙醇用量和乙醇濃度在a＝0.05水平下未能進(jìn)入逐步回歸，說明X4、X3對(duì)方程貢獻(xiàn)值較大，而X2，X1對(duì)方程貢獻(xiàn)不大，可能X2、X1對(duì)胡黃連苷提取率的影響不呈線性，結(jié)合SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)X2、X1進(jìn)行三維分析，結(jié)果見圖1。

表2 均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of uniform design test

圖1 三維效應(yīng)圖A.從X1軸所在平面觀察三維圖；B.從X2軸所在平面觀察三維圖；C.乙醇濃度與乙醇倍數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)移率的影響Fig 1 Three-dimensional response diagramA.three-dimensional response diagram in the plane of X1axis；B.three-dimensional response diagram in the plane of X2axis；C.effects of alcohol concentration and amounts on transfer rate

由圖1可知，胡黃連提取率與X1、X2呈拋物線相關(guān)，Y值最大時(shí)X1取值在65%～70%之間均可，X2取值為10。綜合上述分析結(jié)果，胡黃連提取的最佳工藝條件為：加65%～70%乙醇10倍量，回流提取3次，每次2h。

為進(jìn)一步確定最佳工藝參數(shù)，對(duì)乙醇濃度進(jìn)行了考察。結(jié)果顯示，65%與70%乙醇提取胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總轉(zhuǎn)移率分別是94.5%和93.8%，數(shù)據(jù)接近，為節(jié)省資源，最終確定胡黃連醇提最佳工藝參數(shù)為加65%乙醇10倍量，回流提取3次，每次2h。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按優(yōu)選工藝對(duì)胡黃連中胡黃連苷進(jìn)行提取，分別提取3次。結(jié)果，胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的總轉(zhuǎn)移率分別為92.9%、91.5%、93.8%，表明該工藝提取率較高、重現(xiàn)性較好。

3 討論

胡黃連中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ是環(huán)烯醚萜類化合物，易溶于水和甲醇，可溶于乙醇、丙酮和正丁醇等。但因其在水中易被水解，生成的苷元為半縮醛結(jié)構(gòu)，化學(xué)性質(zhì)活潑，容易進(jìn)一步聚合[2]，通常不用水為溶劑進(jìn)行提取。筆者也分別以中濃度乙醇回流和水煎法提取胡黃連，比較有效成分的轉(zhuǎn)移率，發(fā)現(xiàn)前者胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ轉(zhuǎn)移率較高。因此，為使有效成分得到充分提取，采用中等濃度乙醇作為提取溶劑。

[1] 楊 潔，李 萍，張玉萌，等.胡黃連的藥理作用研究進(jìn)展[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，3（19）：217.

[2] 吳立軍.天然藥物化學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：229.

Optimization of the Extraction Technology of Picroside from Picrorhiza scrophulariiflora with Uniform Design Method

DUAN Xiao-ying，WU Cai-li，ZHANG Hui（The Third Grade Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine，The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM，Zhengzhou 450000，China）
GAO Wei-fang（The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Weihui 453100，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of picrosideⅠand picrosideⅡ from Picrorhiza scrophulariiflora by uniform design method.METHODS：Taking total transfer rate of picrosideⅠ and picrosideⅡ as index，the effects of the concentration of alcohol，solvent amount，extraction time and extraction frequency on extraction technology were evaluated by uniform design method.RESULTS：The optimal technology was as follows：10-fold 65%alcohol，extracting for 3times，2hours each time.CONCLUSION：The extraction process is reliable，and it is suitable for extraction of picrosideⅠ and picrosideⅡ in P.scrophulariiflora.

Picrorhiza scrophulariiflora；PicrosideⅠ；PicrosideⅡ；Uniform design；Extraction technique

R284.2；R283

A

1001-0408（2011）39-3675-02

2010-12-06

2011-07-30）