獨(dú)一味環(huán)烯醚萜苷外用止血作用研究

張泉龍，邱建國，李茂星，尉麗力，何希瑞，賈正平

(蘭州軍區(qū)總醫(yī)院藥材科，全軍高原環(huán)境損傷防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050)

藏藥獨(dú)一味［Lamiophlomis rotata(Benth．)Kudo］為唇形科獨(dú)一味屬植物［1］，其具有活血鎮(zhèn)痛、化瘀止血之功效，用于治療各種外科手術(shù)后的刀口疼痛、出血，外傷骨折，筋骨扭傷，風(fēng)濕痹痛以及崩漏、痛經(jīng)、牙齦腫痛、出血等［2-4］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，獨(dú)一味具有止血、鎮(zhèn)痛、抗炎、促進(jìn)傷口愈合以及保護(hù)神經(jīng)元的作用［5-7］，并且發(fā)現(xiàn)獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷為其止血作用有效部位［8］。目前獲得國家藥品批準(zhǔn)文號的獨(dú)一味制劑劑型有片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、分散片、咀嚼片、滴丸劑等口服劑型，獨(dú)一味的外用制劑很少，但臨床已有將獨(dú)一味膠囊外用于治療鼻出血，拔牙后出血的應(yīng)用報(bào)道，且止血療效顯著［9-10］。筆者在本課題組前期研究的基礎(chǔ)上，將獨(dú)一味水提物及其有效部位總環(huán)烯醚萜苷制成外用散劑，考察其外用止血效果，為新型止血藥物的研制提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥 獨(dú)一味水提物購自甘肅省瑪曲縣黃河首曲藥源開發(fā)有限公司;獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷由本實(shí)驗(yàn)室制備，純度＞56%;云南白藥(云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號:20040320);淀粉。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠80只，雄性，體質(zhì)量20～25 g，購自甘肅省生物制品研究所;健康SD大鼠30只，雄性，體質(zhì)量200～250 g，單籠飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食，由蘭州大學(xué)動物中心提供，動物合格證號:SCXK(甘)2009-0004。新西蘭大耳白兔，雌雄各半，由蘭州生物制品所提供，動物合格證號:SCXK(甘)2009-0012。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠斷尾出血模型 參考文獻(xiàn)［11］的方法。將昆明種小鼠隨機(jī)分為4組，即淀粉組、獨(dú)一味水提物組、總環(huán)烯醚萜苷組、云南白藥組，每組20只。禁食12～16 h后，將小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，在距尾尖1 cm處剪斷，待有血流出時(shí)，將尾巴插入受試藥散中浸沒30 s，然后每隔10 s用濾紙輕輕吸去血滴1次，至血液自然停止(濾紙吸時(shí)無血)，計(jì)算從剪斷尾巴至止血的時(shí)間。若出血量多，可以稱濾紙的質(zhì)量以計(jì)算出血量。

1.2.2 兔腹主動脈、耳中動脈出血模型 參考文獻(xiàn)［12］的方法。將新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為4組，即淀粉組、獨(dú)一味水提物組、總環(huán)烯醚萜苷組、云南白藥組，每組8只。將已禁食24 h的動物用3%戊巴比妥鈉0.9%氯化鈉溶液9 mL耳緣靜脈麻醉，固定，手術(shù)暴露腹主動脈，眼科剪于腹主動脈縱向剪開創(chuàng)口約2 mm。將藥物粉末0.5 g均勻涂灑在創(chuàng)口表面及四周，上鋪一層紗布5 cm×10 cm，將砝碼200 g外包薄塑料膜壓于創(chuàng)口之上，2 min后移除砝碼，觀察是否止血，若未止血則繼續(xù)以砝碼壓住創(chuàng)面，直到止血為止，記錄止血時(shí)間。將已禁食24 h的動物麻醉后，固定于兔固定架上，固定耳朵并暴露耳中動脈，手術(shù)刀割開約2 mm長創(chuàng)口，將藥物粉末0.5 g均勻涂灑在創(chuàng)口表面及四周，上輔一層紗布5 cm×10 cm，將砝碼200 g外包薄塑料膜壓于創(chuàng)口之上，2 min后移除砝碼，觀察是否止血，若未止血則繼續(xù)以砝碼壓住創(chuàng)面，直到止血為止，記錄止血時(shí)間。

1.2.3 大鼠肝損傷模型 參考文獻(xiàn)［12］的方法。SD大鼠28只，隨機(jī)分為淀粉組、獨(dú)一味水提物組、總環(huán)烯醚萜苷組、云南白藥組，每組7只。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg·kg-1，麻醉后仰面固定于手術(shù)臺上。腹部去毛，用酒精棉球消毒。沿腹中線打開腹腔，取出肝左下葉，用10號手術(shù)刀造創(chuàng)面0.8 cm×0.2 cm，擦去血液，立即將藥物0.05 g撒于創(chuàng)口，不進(jìn)行任何處理，觀察10 min，以不再滲血為“止血”，記錄止血時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 小鼠斷尾出血時(shí)間 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷組停止出血時(shí)間為(64.8±25.0)s，獨(dú)一味水提物組為(97.2±44.0)s，云南白藥組為(105.1±65.0)s，淀粉對照組為(124.8±43.2)s。獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜能明顯縮短小鼠斷尾出血時(shí)間，與淀粉對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，獨(dú)一味水提物組和云南白藥組與淀粉對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

2.2 兔腹主動脈和耳中動脈出血時(shí)間 兔腹主動脈和耳中動脈切口模型用4種不同方法處理后，止血時(shí)間結(jié)果見表1。獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷在大動脈、大量出血時(shí)的止血作用更好。

表1 4組兔腹主動脈和耳中動脈創(chuàng)傷止血實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab．1 The hemostatic effects on the trauma of rabbit abdom inal aorta and ears artery in 4 groups ±s

表1 4組兔腹主動脈和耳中動脈創(chuàng)傷止血實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab．1 The hemostatic effects on the trauma of rabbit abdom inal aorta and ears artery in 4 groups ±s

與淀粉對照組比較，*1 P＜0.01;與云南白藥組比較，*2 P＜0.01，*3 P ＜0.05Compared with starch group，*1 P ＜ 0.01;Compared with yunnan baiyao powder group，*2 P ＜0.01，*3 P ＜0.05

組別 兔/只兔腹主動脈創(chuàng)傷止血時(shí)間/min兔耳中動脈創(chuàng)傷止血時(shí)間/s獨(dú)一味水提取物組 8 5.7±3.9*1*2 159.9±48.7*1獨(dú)一位總環(huán)烯醚萜苷組 8 3.2±1.9*1*3 110.0±37.1*1*2云南白藥組 8 8.9±4.7*1 185.6±57.3*1淀粉對照組8 20.3±6.5 378.2±60.3

2.3 大鼠肝臟損傷出血時(shí)間 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總環(huán)烯醚萜苷組平均止血時(shí)間為(93.8±39.5)s，獨(dú)一味水提物組為(101.1±25.9)s，云南白藥組為(74.0±26.3)s，淀粉對照組為(152.8±47.1)s。肝組織止血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷、云南白藥和獨(dú)一味水提物對肝臟的止血時(shí)間均明顯縮短，與淀粉對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。云南白藥的平均止血時(shí)間明顯短于獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷。

3 討論

獨(dú)一味為藏區(qū)重要的止血、鎮(zhèn)痛良藥，目前將其開發(fā)成片劑、膠囊等劑型應(yīng)用廣泛。其主要含包括黃酮類、環(huán)烯醚萜類、苯乙醇苷類、揮發(fā)油及其他類［13］。獨(dú)一味水提物及其有效部位總環(huán)烯醚萜苷顯示出很好的止血作用，能夠提高血漿纖維蛋白原含量［8］。據(jù)其他研究結(jié)果顯示，獨(dú)一味還具有促進(jìn)傷口愈合、鎮(zhèn)痛抗炎的作用，因此具有很好的開發(fā)價(jià)值。

研究結(jié)果表明，與對照組相比，外用獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷或水提物，無論是對小鼠斷尾、兔耳中動脈、腹主動脈，還是對肝組織出血都能明顯縮短出血時(shí)間，但總環(huán)烯醚萜苷組優(yōu)于水提物。由于云南白藥組出血時(shí)間明顯長于兩個(gè)給藥組，故止血作用很可能是由于獨(dú)一味的成分，而不是粉劑本身。在使用中發(fā)現(xiàn)，獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷具有很強(qiáng)的吸水性，可促進(jìn)血液凝固，且吸水后呈糊狀，黏附性增強(qiáng)，能很好黏附在傷口，從而達(dá)到止血目的。但作為外用制劑，其止血機(jī)制是否還與提高血小板聚集率、收縮血管有關(guān)有待進(jìn)一步研究。

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