淋必通顆粒對(duì)慢性前列腺炎細(xì)胞因子的影響

王平，袁敏

(山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014)

淋必通顆粒處方是一位老中醫(yī)在經(jīng)典方五味消毒飲、滋腎通關(guān)丸及程氏萆薢消毒飲的基礎(chǔ)上，結(jié)合多年的臨床經(jīng)驗(yàn)化裁而來(lái)。該藥由蒲公英、金錢草、石韋、綿萆薢等組成，具有清熱利濕、散結(jié)通淋之功效，治療慢性細(xì)菌性前列腺炎、非細(xì)菌性前列腺炎、前列腺痛所致的尿頻、尿急、尿痛、腰痛、小腹痛等癥狀，療效顯著［1］。通過(guò)構(gòu)建非細(xì)菌性前列腺炎模型，檢測(cè)模型大鼠使用淋必通顆粒后前列腺液中的IL-2、IL-8細(xì)胞因子的指數(shù)及白細(xì)胞數(shù)量變化情況，探討淋必通顆粒治療慢性前列腺炎的作用機(jī)理和作用效果，為開發(fā)治療慢性前列腺炎的藥物提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物淋必通顆粒由山東省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào)20100413。淋必通顆粒提取物人日生藥量為92 g，藥液質(zhì)量濃度是3.312 g/mL。使用時(shí)用水配成所需質(zhì)量濃度的藥液。

1.1.2 對(duì)照藥物前列康片:浙江康恩貝制藥股份有限公司，批號(hào)090964，每片質(zhì)量0.57 g?？诜?，1次3～4片，1日3次。

1.1.3 受試藥物與劑量設(shè)置70 kg人日服生藥量92 g，按體表面積折算，確定大鼠高、中、低劑量分別為16.56、8.28、4.14 g/kg(以生藥量計(jì))，相當(dāng)于70 kg人日服量的2、1、0.5倍，按1 mL/100 g體質(zhì)量的體積灌胃給藥。

1.1.4 受試動(dòng)物Wistar種大鼠，雄性，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào):魯動(dòng)質(zhì)scxk(魯)20090001號(hào)。置于不銹鋼鼠籠內(nèi)飼養(yǎng)，自由攝食飲水，室溫控制在23～25℃，通風(fēng)良好。

1.1.5 儀器與試劑Mettler-Toledo基本型天平(PL303，上海梅特勒公司生產(chǎn));酶標(biāo)儀(SANCO 318MC型，上海三科儀器有限公司生產(chǎn));血細(xì)胞分析儀(BC—3000，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn))。

IL-2、IL-8細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒:南京建成生物有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào):201006。1%角叉菜膠:自配。

1.2 方法

1.2.1 大鼠非細(xì)菌性前列腺炎模型的建立［2-6］取健康雄性大鼠，分為正常對(duì)照組、非細(xì)菌性前列腺炎模型組、淋必通顆粒高、中、低劑量組、前列康片對(duì)照組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組建立大鼠非細(xì)菌性前列腺炎模型:取健康雄性大鼠，麻醉后，剖開腹部，向其前列腺兩葉分別注入1%角叉菜膠生理鹽水溶液各0.1 mL，形成非細(xì)菌性前列腺炎模型［2］，術(shù)后灌胃給予復(fù)方磺胺甲基異惡唑(Co SMZ)抗感染。手術(shù)7 d后分別給藥，按照淋必通顆粒高、中、低劑量組、前列康片對(duì)照組分別給大鼠淋必通顆粒提取物16.56、8.28、4.14 g/kg，前列康片0.62 g/kg，按1.0 mL/100 g體質(zhì)量的體積灌胃給藥，持續(xù)4周。

1.2.2 前列腺液的獲取將大鼠在麻醉情況下，固定，剖開腹部，在膀胱的后部找到前列腺。結(jié)扎前列腺根部，將兩葉前列腺完整取出，輕輕將游離端剪開一個(gè)小口，讓前列腺液緩緩流入離心管中，密閉，待用。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)

白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)［7］最后一次給藥后，從各組大鼠眼眶靜脈取血，用Micros-60型血液生化儀檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)，將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和組間分析。

大鼠的IL-2、IL-8細(xì)胞因子檢測(cè)按照試劑盒說(shuō)明采用酶標(biāo)儀檢測(cè)大鼠的IL-2、IL-8細(xì)胞因子，將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和組間分析。

1.2.4 前列腺組織病理檢查將已取出的前列腺，經(jīng)10%中性福爾馬林48 h充分固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)HE染色。HE染色切片在光鏡下觀察。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果各組大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)情況見表1。

表1 各組大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)情況(±s，n=10)

表1 各組大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)情況(±s，n=10)

注:與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05;與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別劑量/(g·kg－1)白細(xì)胞數(shù)值/(109·L－1)9.96±3.02模型對(duì)照組－13.10±1.86*淋必通顆粒高劑量組16.56 10.20±1.43##淋必通顆粒中劑量組8.28 10.90±1.32##淋必通顆粒低劑量組4.14 11.40±1.63#前列康片組0.62 10.38±1.79正常對(duì)照組－##

結(jié)果表明:淋必通顆粒對(duì)非細(xì)菌性前列腺炎模型大鼠的白細(xì)胞升高有明顯的降低作用，其中，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組白細(xì)胞數(shù)值有顯著性差異，說(shuō)明造模成功;與模型對(duì)照組相比，高、中劑量組和前列康組分別有非常顯著性差異(P＜0.01)，低劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。

2.2 IL-2檢測(cè)結(jié)果各組大鼠前列腺液中的IL-2檢測(cè)結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠的IL-2因子的測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)

表2 各組大鼠的IL-2因子的測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)

注:與正常對(duì)照組比較，＊＊＊P＜0.001;與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別劑量/(g·kg－1)IL-2/(ng·L－1)－163.92±13.80模型對(duì)照組－115.29±12.12＊＊＊淋必通顆粒高劑量組16.56 134.86±15.57＊＊#淋必通顆粒中劑量組8.28 123.38±8.94＊＊＊淋必通顆粒低劑量組4.14 121.67±9.37＊＊＊前列康片組0.62 129.38±12.25正常對(duì)照組＊＊

結(jié)果表明:淋必通顆粒對(duì)非細(xì)菌性前列腺炎模型的IL-2水平降低有明顯的升高作用，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組數(shù)值有極其顯著性差異(P＜0.001)，說(shuō)明造模成功;與模型對(duì)照組相比，淋必通顆粒高劑量組有顯著性差異(P＜0.05)，淋必通顆粒高劑量組的數(shù)值高于前列康組。

2.3 IL-8檢測(cè)結(jié)果各組大鼠前列腺液中的IL-8檢測(cè)結(jié)果見表3。

結(jié)果表明:淋必通顆粒對(duì)非細(xì)菌性前列腺炎模型的IL-8水平升高有明顯的降低作用，其中，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組有非常顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明造模成功;與模型對(duì)照組相比，高劑量組和前列康組均有非常顯著性差異(P＜0.01)。

表3 各組大鼠的IL-8測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)

表3 各組大鼠的IL-8測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)

注:與正常對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，##P＜0.01。

組別劑量/(g·kg－1)IL-8/(ng·L－1)－64.66±8.25模型對(duì)照組－99.59±19.31＊＊淋必通顆粒高劑量組16.56 74.17±10.41##淋必通顆粒中劑量組8.28 79.92±17.67淋必通顆粒低劑量組4.14 84.77±26.44前列康片組0.62 70.87±11.04正常對(duì)照組##

2.4 大鼠前列腺病理組織學(xué)檢查結(jié)果正常對(duì)照組前列腺正常，模型對(duì)照組前列腺細(xì)胞出現(xiàn)萎縮、變性、壞死，細(xì)胞間質(zhì)可見慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn);各組前列腺組織可見間質(zhì)不同程度的水腫，腺管間隙增大，其間有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺腔縮小，腔內(nèi)有炎性滲出物，部分可見結(jié)締組織增生。見圖1。淋必通顆粒高劑量組易見前列腺細(xì)胞，未見明顯的萎縮、變性、壞死出現(xiàn);中劑量組前列腺細(xì)胞減少，細(xì)胞輕度水腫。低劑量組前列腺細(xì)胞減少，可見細(xì)胞水腫。前列康組前列腺細(xì)胞未見變性壞死。從組織學(xué)上可見，淋必通顆粒各治療組與模型對(duì)照組相比，病變較輕，表明淋必通顆粒對(duì)前列腺組織具有良好的保護(hù)作用。見圖2。

圖1 前列腺組織肉眼觀察照片

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用向雄性大鼠的前列腺兩葉分別注入1%角叉菜膠生理鹽水溶液，造成前列腺細(xì)胞損傷和炎癥，形成非細(xì)菌性前列腺炎模型［8］。這種動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)效果好，符合臨床實(shí)際病理情況，并創(chuàng)新性地從活體動(dòng)物身上取得了潔凈度高、數(shù)量多的前列腺液，為獲取大鼠前列腺液探索到了一種新的方法。

目前，國(guó)內(nèi)對(duì)前列腺炎治療的考察多集中在炎性指標(biāo)上，對(duì)于直接反映治“本”效果的細(xì)胞因子的研究非常少。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淋必通顆粒不僅對(duì)非細(xì)菌性前列腺炎模型大鼠血液中的白細(xì)胞升高有明顯的降低作用，而且對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠前列腺液中降低的IL-2因子水平有增高作用、增高的IL-8因子水平有降低作用，提示淋必通顆?？梢曰謴?fù)慢性前列腺細(xì)胞的功能，減少促炎性細(xì)胞因子的數(shù)量，重新使體內(nèi)被破壞的免疫系統(tǒng)趨于平衡［9］;光鏡下觀察到對(duì)大鼠前列腺組織發(fā)生的病變均有顯著的改善，表明淋必通顆粒對(duì)前列腺組織具有良好的保護(hù)作用。

圖2 淋必通顆粒對(duì)非細(xì)菌性前列腺炎模型治療病理照片

［1］王憲成，盧少田，段傳懷.中西醫(yī)結(jié)合治療慢性前列腺炎［J］.中國(guó)性科學(xué)，2009，18(8):37-38.

［2］Harris M，F(xiàn)eldberg R S，Lau K M，et al.Expression of proinflammatory genes during estrogen-induced inflammation of the rat prostate［J］.Prostate，2000，44(1):19-25.

［3］Maccioni M，Rivero V E，Riera C M.Prostatein(or rat prostatic steroid binding protein)is a major autoantigen in experimental autoimmune prostatitis［J］.Clin Exp Immunol，1998，112(2):159-165.

［4］邱永生，周瑢，余錦屏，等.前列湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠Th1/Th2細(xì)胞平衡的影響［J］.江西中醫(yī)藥，2009，40(7):22-23.

［5］謝琛靜，周莉，李冬梅，等.慢性非細(xì)菌性前列腺炎對(duì)大鼠生育力的影響［J］.生殖與避孕，2010，30(8):514-518.

［6］閆晗，周莉，李冬梅，等.普適泰片對(duì)SD大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎作用的研究［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2011，16(11):1234-1238.

［7］吳金生，曹亞波，鄧非，等.血白細(xì)胞檢測(cè)的可靠度［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20(1):91-92.

［8］戴蘇林，朱進(jìn)，魏秀德，等.前列腺康栓對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎的抗炎作用［J］.中國(guó)中藥雜志，1991，16(9):562-564.

［9］黃智峰，賴海標(biāo)，曾曄，等.腫節(jié)風(fēng)注射液對(duì)中晚期前列腺癌26例PSA、F-PSA的影響［J］.中醫(yī)研究，2006，19(11):25-26.