韓慶彥，賀奮義，高生智，尚立宏，周 峰，姚奕蕾，王 佳

（甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州730046）

自2005年從幼兒檢測(cè)到博卡病毒（Boca virus）以來，包括中國在內(nèi)的很多國家報(bào)道了人的博卡病毒感染和研究情況，自2009年從豬群中檢測(cè)到博卡病毒以來，包括從臨床健康豬、斷奶多系統(tǒng)衰竭綜合征、高熱病和具有腹瀉癥狀的豬群中檢測(cè)到博卡病毒的報(bào)道也陸續(xù)增多。但其致病性研究還不夠，進(jìn)一步研究博卡病毒具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 病毒

博卡病毒（Boca virus）是細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒亞科、博卡病毒屬的成員。包括人博卡病毒（Human Boca virus，HBoV）、豬博卡病毒（Porcine Boca virus，PboV）。PboV 與犬小病毒（Canine minute virus，MVC）和牛細(xì)小病毒（Bovine parvovirus，BPV）同源性較高。

博卡病毒是單股線狀DNA病毒，其基因組全長(zhǎng)約為4.8kb～5.2kb，包括3個(gè)開放性閱讀框（ORFs），其中ORF1編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS1，ORF2編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP1／VP2，ORF3位于基因組的中間，編碼磷酸化的非結(jié)構(gòu)蛋白 NP1［1－2］。

研究發(fā)現(xiàn)，博卡病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1）較為保守，而兩個(gè)衣殼蛋白（VP1／VP2）較易發(fā)生突變，這提示不穩(wěn)定的VP1／VP2基因突變可能是導(dǎo)致新種群產(chǎn)生和病毒逃逸免疫監(jiān)視的重要原因和機(jī)制，而穩(wěn)定的NS1基因則可能成為制備疫苗和藥物作用的靶點(diǎn)［3］。

基于ORF3基因序列，將曾經(jīng)報(bào)道的6個(gè)PBoV分為四種類：PoBoV1（豬博卡病毒，簡(jiǎn)稱PBoV1），PoBoV2（豬細(xì)小病毒 4，簡(jiǎn)稱 PPV4），PoBoV3（PBoV1／PBoV2）和 PoBoV4（6V／7V），PoBoV3和PoBoV4分別包括2個(gè)基因型［4］。

通過對(duì)PBoV全長(zhǎng)基因組的測(cè)序與分析，發(fā)現(xiàn)我國所流行的PBoV與瑞典的毒株同源性非常高，PBoV基因序列與犬小病毒（CMV）的親緣關(guān)系更為接近，而與引起豬繁殖障礙的豬細(xì)小病毒的基因組同源性為52%～53%。

2 感染狀況

HBoV最早于2005年，在一位患下呼吸道疾病的瑞典兒童體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)［5］。已有許多國家報(bào)道了HBoV的流行［6］。2006年中國疾病預(yù)防控制中心也檢出HBoV［7］。迄今來自五大洲的數(shù)據(jù)均發(fā)現(xiàn)，HBoV常從患急性呼吸道疾病（喘氣、咳嗽、流鼻涕和發(fā)燒等）的病人（大多數(shù)來自兒童）體內(nèi)檢測(cè)到，而且有呼吸道癥狀兒童的病毒載量高于發(fā)熱驚厥或沒有顯著呼吸道發(fā)現(xiàn)物的兒童。HboV也可從急性腹瀉的嬰兒糞便中檢測(cè)出，在西班牙，患有急性腹瀉兒童的527份糞標(biāo)本中有48份檢測(cè)到HBoV；目前臨床尚無 HBoV感染的特效治療方法［8］。HBoV感染可以單獨(dú)存在，也可與其他病毒混合感染，其混合感染率為7%～50%［9－10］，最常見的是與呼吸道合胞病毒共同感染，其次是與甲型流感病毒的共同感染。所報(bào)道病例的流行率從加拿大病人的1.5%到約旦呼吸道感染兒童的18%［11］。

2009年，瑞典科研人員利用宿主DNA清除、隨機(jī)多重置換擴(kuò)增方法（random multiple displacement amplification，MDA），在患仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的豬淋巴結(jié)中檢測(cè)到博卡病毒，命名為豬博卡病毒（Porcine Boca virus，PBoV）［12］。文獻(xiàn)報(bào)道的中國健康豬群PBoV陽性率為7.3%～16.7%，斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬高熱病、仔豬腹瀉等發(fā)病豬群 PBoV 的 陽 性率為 30% ～100%［13－16、19］，斷奶仔豬的感染率明顯高于哺乳仔豬。暗示其對(duì)豬有一定的致病性，但未能按照“科赫法則”進(jìn)一步證實(shí)PBoV是致病性病原。自2006年我國暴發(fā)豬高熱病以來，其主要病原被確定為豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株，但在豬繁殖與呼吸綜合征病毒陽性的病料中也頻繁地檢出豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒及豬瘟病毒等［17－18］。對(duì)2009年中國部分省市豬場(chǎng)的191份疑似患高熱病的病料（組織108份、血清76份及精液7份）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PBoV的總陽性率為39.3%（75／191），組織59.3%（64／108）、血清14.5%（11／76）、精液0%（0／7），其中陽性率大于70% 以上樣品（來自北京、河北、安徽、新疆）所在豬場(chǎng)有著高的發(fā)病率和死亡率［19］。

自2011年年初至今，國內(nèi)很多豬場(chǎng)陸續(xù)暴發(fā)了傳染病性腹瀉病，主要集中在產(chǎn)房哺乳仔豬，哺乳仔豬死亡率在20%～85%，抗生素治療和疫苗免疫均未取得好的效果，疑似為新的病毒病，同時(shí)有些科研單位也報(bào)道，從腹瀉仔豬的糞便中檢測(cè)出PboV［13］；也有研究認(rèn)為，豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus.PEDV）所致［20－21］，但傳統(tǒng)的流行性腹瀉和傳染性胃腸炎弱毒苗、滅活苗反復(fù)免疫，效果不明顯［13］，死亡率可達(dá) 100%［21］，僅9.52%（2／21）的豬場(chǎng)沒有發(fā)病，而且有66.67%（14／21）以上的豬場(chǎng)首次發(fā)病后20～60d左右再次發(fā)病。本次豬腹瀉疫情中，PboV的致病情況怎么樣，還需進(jìn)一步研究。

3 檢測(cè)

目前國內(nèi)尚未見到成功分離病毒的報(bào)道。

HBoV檢測(cè)方面的研究工作均采用PCR擴(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增技術(shù)，科學(xué)家正在建立ELISA、DFA、IFA、Western Blot等［5、9］多種檢測(cè)方法，用于HBoV的臨床診斷，并為進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。

已報(bào)道的PBoV檢測(cè)方法主要是根據(jù)Gen－Bank上遞交的豬博卡病毒核苷酸序列（登錄號(hào)：FJ872544、GU902967－GU902971）設(shè)計(jì)特異性引物，建立的PCR檢測(cè)方法，并將NP1基因克隆、原核表達(dá)，據(jù)報(bào)道已經(jīng)建立的PCR方法特異性強(qiáng)、敏感度高、重復(fù)性好，表達(dá)的NP1蛋白具有良好的反應(yīng)原性［19、22］。

4 小結(jié)和前景

博卡病毒作為一種新發(fā)現(xiàn)的病毒，是對(duì)人呼吸道感染病毒的重要補(bǔ)充。在豬群中，斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬高熱病、豬腹瀉病例以及健康豬群中均檢測(cè)出了該病毒。目前，HBoV和PBoV的分子生物學(xué)和流行病學(xué)研究方面已取得一定的成就，但其檢測(cè)方法需要進(jìn)一步的改進(jìn)，致病性等問題需進(jìn)一步研究，特別是PBoV在2011年年初以來國內(nèi)豬群腹瀉病中的致病作用，以便指導(dǎo)HBoV和PBoV引起疾病的防治。

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