楊美鳳，謝忠禮，宋建平

(1.濮陽市中醫(yī)院，河南濮陽457000;2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南鄭州450008)

彌漫性肺間質(zhì)纖維化簡稱肺纖維化，是多種彌漫性肺間質(zhì)疾病的不良轉(zhuǎn)歸。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等治療，但有效率低，遠(yuǎn)期效果差，若長期大量使用易導(dǎo)致代謝紊亂、免疫抑制、繼發(fā)感染等。近年來人們寄希望于中醫(yī)藥治療肺纖維化。導(dǎo)師宋建平教授曾觀察了瓜蔞薤白湯、麥門冬湯、腎氣丸和大黃?蟲丸對平陽霉素復(fù)制大鼠肺纖維化模型(1～28 d)的影響，結(jié)果表明此4個方劑均能減輕肺泡炎及纖維化的程度［1－3］。本課題在有關(guān)文獻(xiàn)和以往研究基礎(chǔ)上，觀察比較了益氣養(yǎng)陰的麥門冬湯對肺纖維化模型形成階段(14～28 d)肺和海馬中多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、五羥色胺(5-HT)的影響。報道如下。

1 材料與方法

1.1 動 物

普通級雌性健康Wistar大鼠，體質(zhì)量(200± 20)g，由河南省動物實驗中心提供，實驗動物質(zhì)量合格證號:0001432。飼養(yǎng)于河南中醫(yī)學(xué)院動物實驗中心，室溫(22±2)℃，相對濕度60%，常規(guī)飼料喂養(yǎng)，飲水量不限。

1.2 藥品、試劑與儀器

麥門冬湯顆粒劑由各組分的顆粒劑混合而成，均為三九醫(yī)藥公司產(chǎn)品。麥冬 3 g/袋(批號0704021)、半夏1 g/袋(批號0706011)、人參1.5 g/袋(批號0705081)、甘草1 g/袋(批號0706011)，均購自河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院。麥冬、制半夏、生甘草、生曬參比例為42∶6∶6∶9，參照動物與人體的體表面積折算系數(shù)，計算動物每日用藥量為麥冬6 g/kg、半夏0.84 g/kg、甘草0.54 g/kg、生曬參0.54 g/kg，用蒸餾水配制藥液后按0.015 mL/g體質(zhì)量灌胃給藥。平陽霉素，8 mg/支，哈爾濱博萊制藥有限公司產(chǎn)品，批號07010203，按3μg/g體質(zhì)量給藥，使用時用生理鹽水配制成3 g/L，按1μL/g氣管內(nèi)給藥。DA標(biāo)準(zhǔn)品(批號10097602)、5-HT標(biāo)準(zhǔn)品(批號 10119987)與 NE標(biāo)準(zhǔn)品(批號10131292)，均為阿法埃莎(天津)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;正丁醇(批號20070406)、正庚烷(批號20050828)與鄰苯二甲醛(批號20060403)，天津化學(xué)試劑一廠產(chǎn)品;濃鹽酸，洛陽昊華化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號20060208;水合氯醛，常州化學(xué)制藥廠產(chǎn)品，批號 T20050406，用時配成100 g/L的濃度，按3μL/g給予腹腔注射麻醉。F－4500熒光分光光度計，日立公司產(chǎn)品;752N型紫外可見分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 動物分組、模型的建立與給藥方法

實驗大鼠正常飼養(yǎng)3 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、麥門冬湯組3組，每組13只。除正常對照組正常飼養(yǎng)不作任何處理外，模型對照組及麥門冬湯組按以下方法造模:以水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取仰臥固定位，常規(guī)消毒，行頸正中切口，鈍型分離暴露氣管，經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙向心端穿刺注入平陽霉素生理鹽水溶液1μL/g(平陽霉素3μg/g體質(zhì)量)，立即將動物直立并行旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布充分、均勻，縫合皮膚，待動物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。從造模后第14 d開始，麥門冬湯組灌胃藥液0.015 mL/g體質(zhì)量，模型對照組灌入等量蒸餾水。1次/d給藥，1周后復(fù)查動物體質(zhì)量調(diào)整給藥量，各組于造模后第28 d處死。

1.4 檢測指標(biāo)

實驗結(jié)束時處死動物，取右肺組織放入液氮中備作勻漿。快速斷頭取全腦，在經(jīng)冰凍處理的玻片上分離出海馬，置于聚丙烯管中于－80℃保存至測定。采用熒光分光光度法檢測肺和海馬NE、DA、5-HT含量測定。操作程序見文獻(xiàn)［4］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件處理，雙側(cè)檢驗，對服從正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(x－)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，組間差異性判斷采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Dunnett T3檢驗。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肺組織NE、DA、5-HT對比

各組肺NE值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，麥門冬湯組與模型對照組對比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。各組肺DA值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，模型對照組與麥門冬湯、正常對照組對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。各組肺5-HT值由大到小為:模型對照組＞麥門冬湯組＞正常對照組，模型對照組與正常對照組、麥門冬湯組對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組大鼠肺組織NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

表1 各組大鼠肺組織NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

注:與正常對照組對比，*P＜0.05;與模型對照組對比，#P＜0.05。

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2.2 各組大鼠海馬NE、DA、5-HT對比

各組海馬NE值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，麥門冬湯組與模型對照組對比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。各組海馬DA值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，模型對照組與麥門冬湯組對比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。各組海馬5-HT值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，模型對照組與正常對照組、麥門冬湯組對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 各組大鼠海馬NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

表2 各組大鼠海馬NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

注:與正常對照組對比，*P＜0.05;與模型對照組對比，#P＜0.05。

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3 討論

3.1 肺組織NE、DA、5-HT含量分析

去甲腎上腺素能神經(jīng)廣泛分布于肺內(nèi)平滑肌及肺毛細(xì)血管，NE主要由腎上腺素能神經(jīng)末梢釋放，主要與血管平滑肌α受體結(jié)合，使血管收縮。肺除主司呼吸外，還有許多其他重要功能。肺部的血管內(nèi)皮細(xì)胞能從血液中攝取生物活性物質(zhì)，從而影響它們對機(jī)體的作用。研究顯示，血中的NE在通過肺循環(huán)一次后，活性下降35%。用放射自顯影和熒光顯微鏡技術(shù)證明:肺毛細(xì)血管和細(xì)靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞是攝取NE的主要場所，并且可經(jīng)單胺氧化酶(MAO)和兒茶酚胺甲基轉(zhuǎn)換酶進(jìn)行降解［5］。本研究結(jié)果表明，模型對照組肺NE升高，這可能是由于肺部病理損害而影響了NE的滅活，麥門冬湯組肺NE顯著低于模型對照組，提示麥門冬湯可能保護(hù)肺臟對NE的滅活功能，從而影響腎上腺素能神經(jīng);外周組織中的DA能夠作用于交感神經(jīng)末梢，使交感神經(jīng)興奮，釋放NE，而NE能夠使肺支氣管血管平滑肌擴(kuò)張，從而減輕肺水腫，減輕肺炎癥的形成。臨床上，低劑量的多巴胺對支氣管血管平滑肌具有擴(kuò)張作用，可以改善肺的通氣狀態(tài)。本研究顯示，模型對照組肺組織DA升高，用藥組DA降低，這說明DA的升高在肺纖維化的形成過程中可能具有一定作用，麥門冬湯可能影響多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)而抑制肺纖維化的形成。

肺是5-HT移除和滅活的主要部位。在某些疾病狀態(tài)下，可能由于MAO的損傷，肺內(nèi)皮細(xì)胞代謝5-HT的能力降低，5-HT的清除受到抑制，從而導(dǎo)致循環(huán)5-HT水平升高，但也有研究表明，5-HT的增高是單胺類遞質(zhì)代謝障礙或主動運轉(zhuǎn)機(jī)制失調(diào)的結(jié)果［6－7］。文獻(xiàn)報道，游離于血中的5-HT是強(qiáng)力的支氣管和肺血管收縮劑，而且還可引起靜脈壓、右房壓和肺動脈壓升高，損害心肌，是誘發(fā)或加重心肺功能惡化的因素之一［8］。成纖維細(xì)胞和膠原纖維過度增生與肺纖維化關(guān)系密切，而成纖維細(xì)胞合成膠原纖維的速度與5-HT有關(guān)［9］。

本研究結(jié)果表明，模型對照組肺中5-HT升高，證明5-HT在肺纖維化形成過程中可能具有重要作用;麥門冬湯組肺中5-HT降低(P＜0.05)，提示該方防治肺纖維化的作用機(jī)制之一可能是通過抑制肺中5-HT升高。

3.2 海馬組織NE、DA、5-HT含量分析

本研究表明在肺纖維化形成階段，模型對照組海馬組織中NE、DA的含量與正常對照組對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義，提示在肺纖維化形成階段，去甲腎上腺素能神經(jīng)和多巴胺能神經(jīng)在海馬的活動可能無明顯變化。麥門冬湯組NE、DA含量均低于模型對照組和正常對照組(P＜0.05)，說明麥門冬湯能影響海馬組織中去甲腎上腺素能神經(jīng)和多巴胺能神經(jīng)活動，但其在肺纖維化形成和治療中的作用仍需要進(jìn)一步研究。5-HT在中樞是一種重要神經(jīng)遞質(zhì)，在外周又是一種重要的炎性介質(zhì)。本研究結(jié)果表明麥門冬湯能阻止海馬5-HT量的升高，提示海馬區(qū)5-HT能神經(jīng)活動可能參與了肺纖維化的形成，麥門冬湯防治肺纖維化可能與調(diào)節(jié)海馬5-HT能神經(jīng)功能狀態(tài)有關(guān)。

麥門冬湯出于《金匱要略》，其主藥麥冬養(yǎng)陰生津，滋液潤燥;人參、甘草益氣生津，健胃安中;半夏降氣化痰，諸藥合用益氣養(yǎng)陰，治療氣陰兩虛證見咳喘短氣等癥。后世常用于治療肺陰虧虛咳嗽，也是治療肺痿的經(jīng)典代表方。有文獻(xiàn)［10］報道，麥門冬湯加減治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化有良效。本實驗說明麥門冬湯在肺纖維化形成階段影響了NE、DA、及5-HT的變化，而肺纖維化模型的中醫(yī)證型歸屬及NE、DA、5-HT變化與中醫(yī)“證”的關(guān)系需進(jìn)一步研究。在臨床上，面對病機(jī)復(fù)雜的肺纖維化患者，可以根據(jù)病人的具體情況認(rèn)真辨證分析，在大量的作用相似方藥面前有針對性地選用實驗所用經(jīng)方，減少很多盲目性，從而大大提高臨床療效。

［1］宋建平，李瑞琴，李偉，等.瓜蔞薤白湯對肺纖維化大鼠肺組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)的影響［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2005，28(2):40－45.

［2］宋建平，李瑞琴，李偉，等.《金匱要略》不同方藥對肺纖維化模型早期階段的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2006，21(11):692－693.

［3］宋建平，劉方州，李偉，等.金匱腎氣丸對肺纖維化大鼠肺組織中腫瘤壞死因子 α表達(dá)的影響［J］.中成藥，2006，28(1):78－80.

［4］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:207－208.

［5］周舒，婁艾琳.5－羥色胺的生理和病理生理［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1988:52.

［6］Siesjo BK.Calciun in the brain under physiological and pathological conditions［J］.Eur Neurol，1990，30(Suppl 2):3－9.

［7］Canpbell DJ.Tissue rennin angiotoension system:sites of angiotension formation［J］.Cardiowasc Pharmacol，1987，10 (Suppl):1－8.

［8］Hechtman HB.serotonin and the cardiovascular system［M］.New York:Raven Press.1985:213.

［9］孔海云.現(xiàn)代自身免疫病學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，1996:231.

［10］甕恒，曲中平.麥門冬湯加減治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化32例臨床觀察［J］.國醫(yī)論壇，2008，23(1):6－7.