HPLC法測定玉葉清火膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

姚 潔 陳健文

1.湖南省衡陽市中心醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001;2.湖南省衡陽市食品藥品檢驗檢測中心，湖南 衡陽 421001

玉葉清火膠囊是由玉葉金花、穿心蓮、梔子、墨旱蓮、倒扣草等中草藥組成的復方制劑，功能清熱解毒，消腫止痛。用于喉痹，暴喑，急性咽喉炎屬于風熱癥者。玉葉清火膠囊是玉葉清火片改劑型而來的制劑。穿心蓮為本方中有效成分之一，而穿心蓮主要成分為穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯。因此測定本品中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，可作為本品質(zhì)量控制的指標之一。為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證藥品使用安全、有效，本文參考有關文獻［1－3］，采用反相高效色譜法測定了穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。

1 儀器與試藥

儀器 大連依利特P200Ⅱ高壓恒流泵，UV－200Ⅱ型紫外可變波長檢測器;EC2000色譜數(shù)據(jù)處理站;HypersilODS2柱 (C18，4.6×200mm，5μm);BP211D 電子分析天平;kh－250db型超聲處理器。

試藥 穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。玉葉清火膠囊及缺玉葉金花的陰性對照樣品。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:HypersilODS2柱 (C18，4.6×250mm，5μm)，流動相:甲醇 －水 (55∶45);流速:0.85ml·min－1，進樣量為10μl，檢測波長:250nm，柱溫:常溫。理論板數(shù) (n)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯計算，應不低于3000。在上述色譜條件下，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯能完全分離，對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品及脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，分別加甲醇制成每1ml含穿心蓮內(nèi)酯100ug及脫水穿心蓮內(nèi)酯45ug的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品20粒，倒出內(nèi)容物，精密稱定，研細，精密稱取1.5g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，冷浸30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，以上述色譜條件測定，根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯對照品及脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積，以外標法計算供試品中穿心蓮內(nèi)酯對照品及脫水穿心蓮內(nèi)酯含量。

2.5 線性關系考察 ①精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品13.49mg，置于10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取以上對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0ml分別置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以峰面積積分值為橫坐標，對照品濃度為縱坐標繪制標準曲線，則回歸方程為:Y(mg·ml－1)=3.4450×10－4X+9.8835×10－5，r=0.9997;②精密稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品11.21mg，置于50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取以上對照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，5.0ml分別置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以峰面積積分值為橫坐標，對照品濃度為縱坐標繪制標準曲線，則回歸方程為:Y(mg·ml－1)=6.4815 × 10－4X+9.3661 ×10－5，r=0.9997。結(jié)果表明:穿心蓮內(nèi)酯濃度在0.02698～0.2698mg·ml－1范圍內(nèi)，脫水穿心蓮內(nèi)酯濃度在0.02242～0.2242 mg·ml－1范圍內(nèi)，進樣濃度與峰面積呈良好線性關系。

2.6 精密度試驗 分別精密吸取同一對照品溶液 (穿心蓮內(nèi)酯 0.10792mg·ml－1，脫水穿心蓮內(nèi)酯 0.08968mg·ml－1)各10μl，連續(xù)測定5次，依次測定峰面積值，其中穿心蓮內(nèi)酯峰面積平均值為1126.57，RSD為0.56%;脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積平均值為976.16，RSD為0.70%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液 (批號20100416)，每隔4小時分別進樣10μl，依法測定穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積值，其峰面積RSD分別為1.47%、1.41%，表明供試品溶液在20小時內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 陰性對照試驗 按處方量，取缺穿心蓮的陰性樣品，按供試品溶液制備項下的方法提取，測定。結(jié)果在穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯峰相應的保留時間無吸收峰，表明處方中其它成分對測定無干擾。

2.9 重復性試驗 取同一批號供試品 (批號20100416)按供試品溶液項下的方法制備5份供試品溶液，依法測定，結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯平均值0.968 mg/片，RSD%=1.48，脫水穿心蓮內(nèi)酯平均值1.986 mg/片，RSD%=1.05，表明重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量 (穿心蓮內(nèi)酯的含量為2.42 mg·g－1，脫水穿心蓮內(nèi)酯含量為4.99mg·g－1)的玉葉清火膠囊 (批號20100416，平均粒重0.3996g)約0.75g，分別精密加入一定量的穿心蓮內(nèi)酯 (穿心蓮內(nèi)酯22.64mg，加甲醇定容至50ml，精密加入5ml)及脫水穿心蓮內(nèi)酯 (脫水穿心蓮內(nèi)酯45.12mg，加甲醇定容至50ml，精密加入5ml)，照供試品溶液項下的方法制備，測定，計算回收率，結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為101.440%，RSD=1.36%(n=5)，脫水穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為103.94%，RSD=1.82%(n=5)，表明方法回收率較好。

2.11 樣品中穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標法計算，結(jié)果見表1。

表1 玉葉清火膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量測定結(jié)果

3 討論

在供試品溶液制備過程中，比較了浸漬過夜及超聲提取方法，以甲醇和乙醇做不同溶劑進行考察，結(jié)果表明，以甲醇浸泡30分鐘后超聲處理30分鐘的提取效率較高，故選擇甲醇為提取溶劑。

［1］任睿，張園園.反相高效液相色譜法測定喉舒寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量［J］.中南藥學，2011，9(4):271－273.

［2］邱宏聰，李茂，廖展葦.高效液相色譜法同時測定金雞膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2011，31(13):1142－1143.

［3］張火旺.高效液相色譜法同事測定止痢寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量［J］.中國藥業(yè)，2011，20(21):30－31.