馮建華 李潔 王殿云 張萌 劉媛 李國(guó)霞

糖尿病是一種嚴(yán)重威脅人們身體健康的常見內(nèi)分泌代謝性疾病，2型糖尿病的特征是胰島素抵抗和進(jìn)行性胰島β細(xì)胞功能衰竭，這兩方面可能有著共同的基本發(fā)病機(jī)制。近幾年的研究表明，炎癥因子與2型糖尿病之間有密切的關(guān)系[1-3]。目前，西醫(yī)關(guān)于糖尿病炎性因子的研究報(bào)道較多，而中醫(yī)藥針對(duì)DM炎性因子的研究鮮見報(bào)道。筆者提出了2型糖尿病炎癥因子反應(yīng)為中醫(yī)學(xué)“內(nèi)生之毒”的理論假說，其主要的病因病機(jī)為熱毒內(nèi)盛，基于此理論，選擇以清熱解毒為主的中藥復(fù)方，觀察其對(duì)鏈脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)水平的干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

健康雄性清潔級(jí)Sprague-Dawley( SD) 大鼠60只，體質(zhì)量250～300 g，由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(魯)20050015。山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心恒溫飼養(yǎng)、造模和觀察。

1.2 動(dòng)物與試劑

清熱解毒方藥由黃連9 g、黃芩12 g、金銀花30 g、大黃6 g、玄參15 g、生地黃15 g、丹參15 g、西洋參6 g組成，所含的生藥飲片均購(gòu)自濟(jì)南，按照原方比例和制法由山東中醫(yī)藥大學(xué)試驗(yàn)藥廠提供；對(duì)照品鹽酸二甲雙胍由河北天成藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.3 儀器

AB -160 型電子分析天平系德國(guó)Sartornius公司產(chǎn)品；微量加樣器系法國(guó)Gilson公司產(chǎn)品；Elisa酶聯(lián)免疫盒(白介素1、白介素6、胰島素、血清腫瘤壞死因子)均系上海藍(lán)基生物科技有限公司產(chǎn)品；STZ系美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。

1.4 造模與分組

動(dòng)物模型的建立按 Srinivasan等[4]和周迎生等[5]的方法改良，60只大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，隨機(jī)分為2組，正常對(duì)照組12只，給予普通飲食；造模組48只，給予高脂飲食喂養(yǎng)(基礎(chǔ)飼料加上28%蔗糖，20%熟豬油，1%膽固醇，0.25%膽酸鹽)4周后禁食(不禁水)16小時(shí)，一次性腹腔注射低劑量STZ 30 mg/kg(用pH 4.4的0.1 mmol/L無菌檸檬酸緩沖液配成0.25%濃度)；正常對(duì)照組注射等體積的0.1 mmol/L的無菌檸檬酸緩沖液。造模組注射STZ 72小時(shí)后，尾靜脈采血測(cè)血糖大于16.7 mmol/L，即為造模成功。

將造模成功48只動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組12只，即模型組、二甲雙胍組、中藥高劑量組、中藥低劑量組，4組間血糖水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。中藥高、低劑量組每天上午9：00及下午5：00分別以清熱解毒方灌胃，高劑量組為每只每次2.5 ml，低劑量組為每只每次1.2 ml；二甲雙胍組，每天上午9：00及下午5：00分別給予5%鹽酸二甲雙胍溶液2 ml灌胃；模型組，每天上午9：00及下午5：00分別以蒸餾水2 ml灌胃。共干預(yù)4周。

1.5 觀測(cè)指標(biāo)

剪尾取血，采用one-touch(美國(guó)強(qiáng)生)血糖儀測(cè)定空腹血糖；腹主動(dòng)脈取血，采用ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定血清TNF-α、IL-1、IL-6水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠的血糖情況

造模成功后大鼠血糖升高，與正常組相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，經(jīng)過藥物干預(yù)4周后，中藥高劑量組、中藥低劑量組及二甲雙胍組的血糖水平較模型組均明顯下降(P<0.05)，但中藥高劑量組、中藥低劑量組的血糖水平仍高于二甲雙胍組(P<0.05)。說明清熱解毒方具有降低糖尿病模型大鼠的血糖的作用，但其作用不如二甲雙胍。見表1。

表1 造模成功后各組大鼠的血糖比較()

注：與正常組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01；與二甲雙胍組比較，cP>0.05，但整體血糖水平高于二甲雙胍組；與中藥高劑量組及二甲雙胍組比較，dP<0.05。

2.2 清熱解毒方對(duì)糖尿病大鼠外周血TNF-α、IL-1、IL-6的影響

模型組TNF-α顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，中藥高劑量組和中藥低劑量組大鼠的TNF-α水平均顯著低于模型組(P<0.05)，中藥高劑量組、中藥低劑量組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中藥高劑量組和低劑量組大鼠的TNF-α水平顯著均低于二甲雙胍組(P<0.05)。說明糖尿病大鼠存在TNF-α、IL-1和IL-6的升高，清熱解毒方藥高劑量和低劑量均能降低其TNF-α含量，不同劑量效果沒有差異，其降低TNF-α、IL-1和IL-6的功效優(yōu)于二甲雙胍。見表2。

模型組IL-1顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；中藥高劑量組和中藥低劑量組大鼠的IL-1水平均顯著低于模型組(P<0.05)；中藥高劑量組與中藥低劑量組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，2組均顯著低于二甲雙胍組(P<0.05)。見表2。

表2 清熱解毒方對(duì)糖尿病大鼠外周血TNF-α、IL-1和IL-6的影響

注：與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與二甲雙胍組比較，bP<0.05；與中藥高劑量組比較，cP<0.05。

模型組IL-6顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，中藥高劑量組和中藥低劑量組大鼠的IL-6水平均顯著低于模型組(P<0.05)；且中藥高劑量組的IL-6水平顯著低于中藥低劑量組(P<0.05)，2組均顯著低于二甲雙胍組(P<0.05)。見表2。

3 討論

腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素1(IL-1) 和白介素6(IL-6)均是重要的細(xì)胞因子，研究證實(shí)大量TNF-α作用于胰島β細(xì)胞，可造成β細(xì)胞的DNA損傷，而且TNF-α還可通過白介素1(IL-1)及一氧化氮(NO)途徑，抑制胰島素作用，促進(jìn)β細(xì)胞損傷，另一方面TNF-α作用于肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，使胰島素受體底物-1的絲氨酸殘基磷酸化，抑制正常胰島素傳導(dǎo)途徑，間接影響胰島素敏感性[6]。本課題組的前期臨床研究結(jié)果顯示：2型糖尿病患者血清TNF-α、IL-1、IL-6水平較正常人明顯升高(P<0.05)，且伴有血管并發(fā)癥的糖尿病患者血清TNF-α、IL-1、IL-6水平明顯高于無并發(fā)癥的患者(P<0.05)。經(jīng)清熱解毒方治療后可降低2型糖尿病患者血清TNF-α、IL-1和IL-6水平，改善血糖、糖基化血紅蛋白、血清胰島素等指標(biāo)，并顯著改善患者癥狀體征[7]。

炎癥因子既是病理產(chǎn)物又是致病因素，我們從中醫(yī)理論的角度提出了“內(nèi)生之毒”的假說觀點(diǎn)，毒邪內(nèi)盛是消渴病(糖尿病)及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的基本病理機(jī)制。正如《靈樞·五變篇》謂：“怒則氣上逆，胸中蓄積，血?dú)饽媪?，髖皮充肌，血脈不行，轉(zhuǎn)而與熱，熱則消肌膚，故為消癉?！薄兜は姆āは省分赋觯骸熬泼鏌o節(jié)，酷嗜炙旸……于是炎火上熏，臟腑生熱，燥熱熾盛，津液干焦，渴飲水漿，而不能自禁?！边@就從病理方面指出胃腸熱結(jié)，毒邪內(nèi)生，耗傷津液是消渴病發(fā)病的主要機(jī)理。根據(jù)“熱者寒之”、“溫者清之”、“治熱以寒”的治療原則，采用以黃連、黃芩、金銀花、生地黃、玄參、大黃等清熱解毒為主的中藥組成基本方，對(duì)中醫(yī)辨證為肺胃熱盛者2型糖尿病患者進(jìn)行了臨床干預(yù)研究，取得了初步臨床療效[7]。方中的藥物除具有清熱解毒作用外，現(xiàn)代藥理研究表明還具有抗病原微生物、抗炎、免疫抑制和調(diào)節(jié)血糖等作用。

本研究顯示，模型組大鼠外周血中TNF-α、IL-1、IL-6水平均明顯高于正常組，經(jīng)清熱解毒方干預(yù)后均顯著下降，且優(yōu)于二甲雙胍組。本研究證實(shí)了清熱解毒為主的中藥復(fù)方可抑制糖尿病模型大鼠的TNF-α、IL-1、IL-6水平，降低血糖；研究為驗(yàn)證炎癥因子反應(yīng)為“內(nèi)生之毒”的理論假說提供了一定的依據(jù)，為清熱解毒治療2型糖尿病找到了理論根據(jù)和客觀依據(jù)。但對(duì)其具體作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步深入研究。

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