賀春玲，張淑霞，嵇保中，劉曙雯

(1.河南科技大學(xué)林學(xué)院，河南洛陽 471003;2.南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院，南京 210037;3.南京中山陵園管理局，南京 210014)

釀貯蜂糧是膜翅目2萬多種花粉蜂較為普遍的習(xí)性。雌蜂筑好巢室后，一次性備足幼蟲一生所需的蜂糧，然后在蜂糧上產(chǎn)卵并封閉巢室，孵化出的幼蟲完全依賴蜂糧為食完成發(fā)育 (吳燕如，1965)。蜂糧 (Bee bread)也稱蜂面包、蜂巢花粉，是采粉蜂將花粉團(tuán)卸落在巢房中，通過咬碎、吐蜜濕潤等行為對花粉團(tuán)進(jìn)行初步加工后，在微生物的作用下，封藏的花粉團(tuán)經(jīng)過一定時(shí)間的發(fā)酵所形成的蜂花粉釀制產(chǎn)物 (嵇保中等，2006)。蜂糧中含有豐富的微生物資源，貯備的蜂糧在巢房中有一個復(fù)雜的微生物區(qū)系變化和生物化學(xué)變化過程 (袁耀東，1991;蘇松坤，2000)。Gilliam et al.(1989)從杏仁花粉、蜂花粉和1、3、6周蜂糧樣品中分離到芽孢桿菌屬的6種芽孢桿菌41個菌落和148株霉菌。蘇松坤等 (2001)從中國茶的手采花粉、蜂花粉和不同釀制時(shí)間的蜂糧樣品中分離出207個細(xì)菌菌落和9個屬131株霉菌。其中蜂糧中的微生物及其代謝產(chǎn)物能有效抑制蜂糧中雜菌的生長，在蜂糧的釀制過程中具有十分重要的作用 (Gilliam et al，1997;蘇松坤，2002)。

長木蜂Xylocopa tranquebarorum屬蜜蜂科Apidae木蜂屬Xylocopa的野生蜂類，與蜜蜂類似，它們采集芍藥 Paeonia lactiflora、虞美人 Papaver rhoeas、槐花Sophora japonica、云實(shí)Caesalpinia decapetala、薔薇Rosa spp、女貞Ligustrum lucidum等植物花粉制作蜂糧 (賀春玲等，2009)。羅祿怡(1992)報(bào)道長木蜂蜂糧在巢室內(nèi)能較長時(shí)期保持濕潤狀態(tài)不會霉變。賀春玲等 (2009)報(bào)道長木蜂蜂糧的醇提液 (70%)對枯草芽孢桿菌具有很強(qiáng)的抑制作用。關(guān)于長木蜂蜂糧的微生物群落變化規(guī)律、在釀制過程中的功能以及蜂糧長期保持的機(jī)制等問題國內(nèi)外未見報(bào)道。本文以芍藥花粉的長木蜂蜂糧為研究對象，初步研究長木蜂蜂糧在釀制過程中微生物的變化規(guī)律，同時(shí)篩選具有抑菌活性的微生物菌株，為揭示蜂糧釀制及長期保存過程中防腐機(jī)制和開發(fā)新的防腐資源奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試長木蜂

不同巢室中的越冬雌蜂、釀貯蜂糧盛期的雌蜂及長木蜂的幼蟲和蛹均采集于南京林業(yè)大學(xué)樹木標(biāo)本園、南京中山植物園和南京情侶園花卉公園。

1.1.2 樣品的采集

2008年5月芍藥盛花期，在南京情侶園花卉公園采集芍藥花粉、芍藥長木蜂花粉、不同釀制階段的芍藥長木蜂蜂糧樣品。具體的采集方法見賀春玲等 (2010)。

手采芍藥花粉樣品:分為芍藥花未開放前采集的樣品和芍藥花已經(jīng)開放后的樣品，分別表示為花粉 (1)和花粉 (2)。

芍藥花未開放前樣品采集:在芍藥大蕾期，將花苞采下放入滅菌的采集袋中，帶回實(shí)驗(yàn)室后在無菌操作臺上取出花粉放入滅菌的5 mL離心管中，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

芍藥花已經(jīng)開放后樣品的采集:在芍藥大蕾期，用細(xì)尼龍網(wǎng)袋套將花蕾罩上，待花開放后用滅菌的鑷子迅速取下花粉，放入滅菌的的5 mL離心管中，低溫帶回實(shí)驗(yàn)室后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

長木蜂幼蟲蟲糞和長木蜂制作的巢室隔板樣品采集:2008年5月中旬，在南京情侶園花卉公園的芍藥園附近采集捆綁的長木蜂筑巢枯竹，帶回實(shí)驗(yàn)室后，在無菌操作間解剖取出幼蟲的蟲糞和巢室隔板放入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 培養(yǎng)基的配置

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 (簡稱NA)、改良LB培養(yǎng)基、改良MRS培養(yǎng)基 (pH4.5、pH6.5)、產(chǎn)芽孢培養(yǎng)基、酵母浸膏麥芽汁培養(yǎng)基、葡萄糖天門冬酰胺培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基的配置參見周德慶(1986)、凌代文 (1999)、黃秀梨 (1999)、東秀珠等 (2001)、楊潔彬 (1996)的方法進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.4 指示菌株

測試細(xì)菌為金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus、大腸桿菌Escherichia coli、枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis;測試真菌為青霉菌Penicillium citrinum、黑曲霉菌Apergillus oryzae、根霉菌Rhizopus、毛霉菌Mucor、假絲酵母Candida sp.和啤酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae;所有菌株均由南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院微生物教研室提供。細(xì)菌菌種在牛肉膏蛋白胨固體斜面培養(yǎng)基37℃下培養(yǎng)24 h，真菌菌種在PDA固體斜面培養(yǎng)基28℃下培養(yǎng)48 h，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 長木蜂體表微生物的分離

采集不同時(shí)期帶有長木蜂筑巢的枯竹并帶回實(shí)驗(yàn)室，在無菌操作間解剖取出越冬雌蜂、釀貯蜂糧盛期的雌蜂以及幼蟲、預(yù)蛹和蛹并稱重，然后分別放入5 mL滅菌離心管中，按照蟲體重量每克加入9 mL的無菌水，記為10－1;按照稀釋涂布分離法的稀釋方法 (周德慶，1986)稀釋至10－3、10－4濃度的稀釋溶液備用。

稀釋到10－3和10－4的稀釋液樣品分別吸取200 μL用涂棒均勻涂布在NA、改良LB培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基 (pH6.5、pH5.5和pH4.5)平板上，在28℃培養(yǎng)。隨時(shí)觀察并記錄菌株的生長情況，統(tǒng)計(jì)樣品中的菌落總數(shù)，然后用接種針挑取不同形態(tài)的菌落移入相應(yīng)的培養(yǎng)基上純化、培養(yǎng)。每個樣地取不同巢室的蟲態(tài) (越冬雌蜂、釀貯蜂糧盛期的雌蜂以及幼蟲、預(yù)蛹和蛹)各3頭，每個樣品重復(fù)3次，3次的平均值為該樣品在各種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)。

1.2.2 長木蜂幼蟲蟲糞和巢室隔板的微生物分離

在無菌操作間稱取幼蟲蟲糞和巢室隔板各0.3000 g于滅菌的10 mL離心管中，用無菌的玻璃棒將蟲糞和巢室隔板搗碎后，加入2.7 mL去離子水，充分搖勻，記為10－1;按照稀釋涂布分離法的稀釋方法 (周德慶，1986)稀釋至 10－3、10－4濃度的稀釋溶液備用。

稀釋到10－3和10－4的稀釋液樣品分別吸取200 μL用涂棒均勻涂布在NA、改良LB培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基 (pH4.5和pH6.5)平板上，在28℃培養(yǎng)。隨時(shí)觀察并記錄菌株的生長情況，統(tǒng)計(jì)樣品中的菌落總數(shù)，然后用接種針挑取不同形態(tài)的菌落移入相應(yīng)的培養(yǎng)基上純化、培養(yǎng)。每個樣品重復(fù)3次，3次的平均值為該樣品在各種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)。

1.2.3 芍藥花粉、芍藥長木蜂花粉和不同日齡的蜂糧樣品中微生物分離

稱取采集的芍藥花粉、新鮮芍藥長木蜂采集的花粉、1日、2日、3日、……10日、15日、20日、30日芍藥長木蜂蜂糧樣品各0.3000 g于滅菌的10 mL離心管中，加入2.7 mL去離子水，充分搖勻，記為10－1;按照稀釋涂布分離法的稀釋方法 (周德慶，1986)稀釋至10－3、10－4濃度的稀釋溶液備用。微生物分離培養(yǎng)方法同1.2.2。

不同日齡的蜂糧樣品:指長木蜂采集花粉蜜制作蜂糧完成后在蜂糧上產(chǎn)卵開始，記為1日齡，第2天記為2日齡，依此類推3日齡、4日齡……1.2.4 菌株的鑒定

1.2.4.1 細(xì)菌菌落形態(tài)鑒定

觀察菌落表面顏色、隆起度、質(zhì)地、邊緣光滑、粗糙、菌落直徑、干燥度、產(chǎn)芽孢有無和革蘭氏染色。

湖泊水體是OCPs的一個重要匯集地，具有流動性小、水交換周期長、對污染物的稀釋能力弱、生態(tài)系統(tǒng)相對較脆弱、生態(tài)平衡容易遭到破壞且不容易恢復(fù)等特點(diǎn)，所以較其他水環(huán)境更容易受到污染［20］。有機(jī)氯農(nóng)藥污染湖泊水體的途徑有地表徑流、大氣沉降和湖底沉積物的二次釋放。

1.2.4.2 放線菌菌落形態(tài)鑒定

插片培養(yǎng)法顯微鏡觀察菌絲形態(tài)、顏色、質(zhì)地、分枝、橫隔、孢子著生位置、孢子形狀、顏色、孢子絲形狀、顏色、氣生菌絲、基內(nèi)菌絲、菌絲顏色、質(zhì)地、孢子粉顏色、密度等。

1.2.5 抑菌活性菌株的初篩

指示細(xì)菌的抑菌活性:采用瓊脂塊法對所分離得到的菌株進(jìn)行抑菌活性初篩。具體方法為將分離得到的菌株劃線培養(yǎng)與相應(yīng)的培養(yǎng)基，在28℃培養(yǎng)2～5 d，用打孔器 (Φ=6 mm)將菌落打下并移至含有指示菌的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后在28℃培養(yǎng)2～5 d，每個菌株重復(fù)3次，觀察其抑菌活性。

指示真菌的抑菌活性:采用平板對峙培養(yǎng)法，將分離到的菌株與指示真菌在PDA平板上進(jìn)行對峙培養(yǎng)，用打孔器 (Φ=6 mm)將在PDA上活化的指示真菌打成菌柄塊，用接種針移入PDA平板中央，在距中央2 cm處涂分離菌株，27℃恒溫培養(yǎng)，待CK長滿皿時(shí)，測其抑菌帶的寬度。每菌株設(shè)3皿重復(fù)，不接待測菌的為CK。

1.3 數(shù)據(jù)采集與分析

采用多功能型全自動菌落/顯微圖像分析儀(杭州迅數(shù)科技有限公司生產(chǎn))進(jìn)行數(shù)據(jù)采集;采用Microsoft Excel和SPSS Base Ver.13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 長木蜂體表微生物分離結(jié)果

采用 NA、改良 LB培養(yǎng)基、MRS(pH4.5)、MRS(pH5.5)、MRS(pH6.5)培養(yǎng)基對長木蜂雌蜂釀貯蜂糧盛期體表微生物狀況進(jìn)行分離，結(jié)果見圖1(A)，由圖1(A)表明在5種培養(yǎng)基上分離到的微生物菌落數(shù)不同，在MRS4.5的培養(yǎng)基上分離到的菌落數(shù)量最多，為21176±5392個/g;在改良LB培養(yǎng)基上分離到得菌落數(shù)最少，為2400±1509個/g。通過菌落形態(tài)觀察和顯微形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)在五種培養(yǎng)基上分離到的微生物主要有細(xì)菌、酵母菌和放線菌，其中在MRS培養(yǎng)基上分離到的菌落主要屬于乳酸菌和酵母菌。

圖1 長木蜂雌蜂在不同培養(yǎng)基 (A)和不同階段 (B)體表微生物菌落數(shù)量Fig.1 Microorganism colonies on body surface of female in different culture mmedium(A)and in different stages(B)X.tranquebarorum

2.2 長木蜂蜂糧釀制過程中微生物菌落數(shù)量變化規(guī)律

采用 NA、改良LB培養(yǎng)基、MRS(pH4.5)、MRS(pH6.5)培養(yǎng)基對長木蜂雌蜂釀貯蜂糧過程中蜂糧微生物數(shù)量的變化情況進(jìn)行培養(yǎng)分離 (圖2)。芍藥未開放之前的花粉樣品，在各培養(yǎng)基中均未分離到微生物菌落;在芍藥開花后采集的花粉樣品，在NA培養(yǎng)基上分離到的細(xì)菌菌落數(shù)量最多，改良LB培養(yǎng)基上分離的菌落數(shù)量少，而MRS(4.5)和MRS(6.5)培養(yǎng)基上未分離到菌落;芍藥長木蜂花粉在上述四種培養(yǎng)基上均分離到微生物菌落;長木蜂蜂糧的微生物菌落的變化規(guī)律，1日齡蜂糧中菌落數(shù)最多，2日齡開始下降，3日齡降至降低點(diǎn)，在4日齡階段微生物的菌落數(shù)出現(xiàn)一個低谷，然后升高;8～12日齡又出現(xiàn)一個小高峰，12日齡后，長木蜂蜂糧中微生物基本趨于穩(wěn)定狀態(tài)，由此可知，長木蜂蜂糧在釀制過程中內(nèi)部的微生物區(qū)系發(fā)生了很大變化。

2.3 長木蜂蜂糧中分離到的微生物菌株

采用 NA、改良 LB培養(yǎng)基、MRS(4.5)、MRS(6.5)培養(yǎng)基分別對手采芍藥花粉、芍藥長木蜂花粉和不同釀制時(shí)間的蜂糧樣品進(jìn)行微生物分離，根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)、革蘭氏染色以及培養(yǎng)時(shí)間的長短和培養(yǎng)基的不同，將分離的菌株進(jìn)行純化，共分離菌株68株，其中細(xì)菌43株，酵母17株，放線菌8株。酵母菌株主要分離自MRS(4.5)和MRS(6.5)上，放線菌菌株主要分離自NA培養(yǎng)基上，蜂糧中的酵母菌主要來自長木蜂雌蜂的體表，雌蜂在釀貯蜂糧過程中添加到蜂糧中。

2.4抑菌活性菌株初篩

2.4.1對指示細(xì)菌的抑菌活性

采用瓊脂塊法對分離的68株菌株進(jìn)行抑菌活性初篩。68株菌株中其中12株對指示細(xì)菌有抑制作用 (表1，圖版1)。分離的酵母菌菌株對細(xì)菌和真菌均沒有抑菌活性，分離的細(xì)菌菌株P(guān)T－1、NF－25、NF－26、NF－27、NF－28和NF－33對

圖2 長木蜂蜂糧釀貯過程中微生物數(shù)量的變化規(guī)律Fig.2 The dynamica changes of the amount of bacterial colonies during the process of brewing bee bread for X.tranquebarorum

指示細(xì)菌有明顯的抑制作用，對金黃色葡萄球菌有很好的抑菌活性;NF－11、NF－17、NF－18、NF－19、NF－32、NF－34屬于放線菌，對金黃色葡萄球菌有抑制作用，其中NF－32和NF－34對枯草芽孢桿菌也表現(xiàn)出很好的抑菌活性。

表1 從蜂糧中分離的菌株對指示細(xì)菌的抑菌活性Table 1 The antibacterial activity of strains separated form bee bread

2.7.2 對指示真菌的抑菌活性

篩選的68株菌株中，對指示真菌有抑菌活性的有10株 (表3)，抑菌活性較強(qiáng)的有3株，分別為NF－25、NF－32和NF－34，其中NF－34菌株對青霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌均有很好的抑制作用，對啤酒酵母的抑制作用最強(qiáng)，抑菌圈直徑為33.45±2.57mm，但對假絲酵母抑制作用弱 (圖版7－1)。

表2 從蜂糧中分離的菌株對真菌的抑菌活性Table 2 The antibacterial activity of strains separated form bee bread to fungi

3 結(jié)論與討論

3.1 培養(yǎng)基種類的選擇

沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中一切生物的生長，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是有選擇性的 (沈萍，2002)。我們參照蘇松坤 (2000)的細(xì)菌分離方法，對長木蜂蜂糧中的有益細(xì)菌進(jìn)行分離，MRS培養(yǎng)基主要是分離乳酸菌的培養(yǎng)基，本實(shí)驗(yàn)采用MRS(pH4.5)和MRS(pH6.5)培養(yǎng)基分離到大量的酵母菌菌落，而分離到的細(xì)菌菌落很少，分離結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道不一致，具體原因還有待進(jìn)一步研究。在NA培養(yǎng)基上，除分離到大量的細(xì)菌外，還分離到放線菌菌落，并且發(fā)現(xiàn)在放線菌菌落周圍可以抑制其它微生物的生長。由于分離微生物采用的是新鮮樣品進(jìn)行分離，酵母菌和放線菌生長時(shí)間相對較長，由于取樣的限制，我們在分離過程中沒有補(bǔ)充專用酵母菌和放線菌的分離培養(yǎng)基，針對選擇的幾種培養(yǎng)基分離到的菌株進(jìn)行了微生物群落的分析，可能還不能完全涵蓋長木蜂蜂糧微生物的全貌，在以后的研究中有待進(jìn)一步改進(jìn)。

3.2 長木蜂蜂糧中微生物的變化規(guī)律

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，長木蜂蜂糧中細(xì)菌和酵母菌屬于優(yōu)勢菌株，在芍藥花粉中沒有分離到酵母菌，在芍藥長木蜂花粉中分離到酵母菌，然后隨蜂糧釀制時(shí)間的延長，細(xì)菌和酵母菌的數(shù)量劇增，3日齡酵母菌的數(shù)量下降，酸度降低，其變化趨勢與長木蜂蜂糧pH的變化趨勢基本一致 (賀春玲等，2010)。長木蜂蜂糧中也分離到乳酸菌，但在MRS(pH4.5)和MRS(pH6.5)上分離到的菌株數(shù)量較少，而在改良LB培養(yǎng)基上分離到得菌株較多，由此也可以看出長木蜂蜂糧中的乳酸菌與茶蜂糧中的乳酸菌菌株區(qū)系可能不同。乳酸菌是能從葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌，是長木蜂蜂糧pH值降低的主要原因，本文通過采用BCG乳酸鑒定培養(yǎng)基初步對分離的有抑菌活性的細(xì)菌菌株進(jìn)行乳酸菌鑒定，但具體屬于哪一種乳酸菌還需要進(jìn)一步鑒定獲得。因此，對長木蜂蜂糧中乳酸菌的來源、分離培養(yǎng)培養(yǎng)基的選擇以及在蜂糧中擔(dān)負(fù)的抑菌活性功能均有待進(jìn)一步研究。

3.3 長木蜂蜂糧中微生物來源

蜜蜂蜂糧中細(xì)菌主要來自花粉產(chǎn)地的生態(tài)環(huán)境、蜜蜂自身攜帶和蜂巢內(nèi)的部分細(xì)菌，在蜂糧釀制過程中，由于蜂巢環(huán)境和蜜蜂的作用，導(dǎo)致蜂巢中的細(xì)菌發(fā)生復(fù)雜的變化 (蘇松坤，2001)。長木蜂蜂糧中的微生物菌株主要來源于花粉產(chǎn)地的生態(tài)環(huán)境、長木蜂自身的攜帶和蜂巢內(nèi)部的環(huán)境。長木蜂營巢主要選擇直徑1.2～2.5 cm的枯竹上，雌蜂屬于獨(dú)棲性蜂類，多數(shù)越冬雌蜂在翌年的4月份另筑新巢，少數(shù)利用舊巢，但不論是利用舊巢或另筑新巢，對于舊巢和新巢中的蜂糧微生物培養(yǎng)結(jié)果看其區(qū)別不大，主要細(xì)菌和酵母菌;在不同地點(diǎn)采集的雌蜂，體表微生物分離結(jié)果均有酵母菌和放線菌，因此，酵母菌和部分放線菌可能屬于長木蜂雌蜂體表的共生菌，在長期進(jìn)化過程中形成的，對蜂糧的保鮮有非常重要的意義，對于長木蜂體表微生物對蜂糧釀制過程中的保鮮作用還有待進(jìn)一步研究。

References)

Dong XZ，Cai MY，2001.Common Bacteria System Identification Manual.Beijing:Science Press．350－398.［東秀珠，蔡妙英，2001.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊.北京:科學(xué)出版社．350－398］

Egorova A，1971.Preservative microflora in stored pollen.Veterinariya，8:40－41.

Gilliam M，Prest DB，Lorenz BJ，1989.Microbiology of pollen and bee bread:taxonomy and enzymology of molds.Apidologie，20:53－68.

Gilliam M，1997.Identification and roles of nonpathogenic microflora associated with honey bees.FEMS Microbiology Letters，155:1 －10.

He CL，Ji BZ，Liu SW，2009.Nesting，foraging and food－storing behavior of Xylocopa tranquebarorum.Acta Entomologica Sinica，52(9):984－993.［賀春玲，嵇保中，劉曙雯，2009.長木蜂筑巢和采粉貯糧行為.昆蟲學(xué)報(bào)，52(9):984－993］

He CL，Ji BZ，Liu SW，2009.Study on the antibacterial activity of the raw extraction from bee bread of Xylocopa tranquebarorum.Journal of Nanjing Forestry University，33(2):17－2l.［賀春玲，嵇保中，劉曙雯，2009．長木蜂蜂糧租提液抑菌活性的研究.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，33(2):17－2l］

He CL，Ji BZ，Liu SW，2010.Determination of pH and the pollen germination ability during the process from pollen to bee bread of Xylocopa tranquebarorum.Journal of Environmental Entomology，32(1):92－98.［賀春玲，嵇保中，劉曙雯，2010.長木蜂蜂糧釀貯過程中pH和花粉活力的測定.環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)，32(1):92 －98］

Huang XL，1999.Microbiology Experiment Guidance.Beijing:Higher Education Press．58－59.［黃秀梨，1999.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo).北京:高等教育出版社．58－59］

Ji BZ，Liu SW，Xu LN，Zhang K，2006.Advances on the bee bread research.Chinese Agricultural Science Bulletin，22(8):165－169.［嵇保中，劉曙雯，徐麗娜，張凱，2006.蜂糧研究進(jìn)展.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，22(8):165－169］

Jia SX，Zhang SX，Jia ZD，2001.Acid survival method of bees.Apicultural Science and Technology，(3):18－20.［賈紹興，張水仙，賈振東，2001.蜜蜂的酸性生存法.養(yǎng)蜂科技，(3):18－20］

Jiang CL，Xu LH，2001.Microbial Resources Development and Utilization.Beijing:China Light Industry Press．1－19.［姜成林，徐麗華，2001.微生物資源開發(fā)利用.北京:中國輕工業(yè)出版社，1 －19］

Ling DW，1999.Classification and Identification and Experimental Method of Lactic Acid Bacteria.Beijing:China Light Industry Press．84－109.［凌代文，1999.乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法.北京:中國輕工業(yè)出版社，84－109］

Luo LY，Luo CB，Xie JS，Ding YS，1992.Study about domestication and utilization of wild bee on herbage seed breeding farm of red clovcr.Pratacultural Science，9(6):5－8.［羅祿怡，羅次畢，謝繼石，丁應(yīng)生，1992.紅三葉草種籽場長木蜂的人工訓(xùn)育及利用研究.草業(yè)科學(xué)，9(6):5－8］

Shen P，2002.Microbiology.Beijing:Higher Education Press．2 －18.［沈萍，2002.微生物學(xué).北京:高等教育出版社．2－18］

Su SK，2000.Studies on brew mechanism and nutritive value of bee bread.Master thesis of Zhejiang University.［蘇松坤，2000.蜂糧的釀制機(jī)理和營養(yǎng)價(jià)值的研究.浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文］

Su SK，Chen FL，Yu XP，2002.Mutative rule of bacteria during the ferment from pollen to bee bread.Journal of Zhejiang University，28(5):575－577.［蘇松坤，陳盛祿，余旭平，2002.蜂糧釀制過程中細(xì)菌的變化規(guī)律.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)，28(5):575－577］

Su SK，Chen FL，Yu XP，Lin XZ，Xu FL，2001.Isolation and identification of bacter ia from pollen and bee bread．Journal of Zhejiang University，27(6):627－630.［蘇松坤，陳盛祿，余旭平，2001.花粉和蜂糧中細(xì)菌的分離和鑒定.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)，27(6):627 －630］

Wu YR，1965.Economic Insect Fauna of China.Fasc.9，Hymenoptera:Apoidea.Beijing:Science Press．4－19.［吳燕如，1965.中國經(jīng)濟(jì)昆蟲志 (第九冊，膜翅目，蜜蜂總科)．北京:科學(xué)出版社．4－19］

Yang JB，1996.Biological Basis and Application of Lactic Acid Bacteria.Beijing:China Light Industry Press．177－184.［楊潔彬，1996.乳酸菌－生物學(xué)基礎(chǔ)和應(yīng)用．北京:中國輕工業(yè)出版社．177 －184］

Yuan YD，1991.The composition and role of the bee bread.Apiculture of China，(6):36－37.［袁耀東，1991.蜂糧的成分和作用.中國養(yǎng)蜂，(6):36－37］

Zhou DQ，1982.Microbiology Laboratory Manual.Shanghai:Shanghai Science Press:532－574.［周德慶，1982.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊．上海:上海科學(xué)出版社.532－574］

圖版1 NF－34菌株的抑菌活性Plate 1 The antibacterial activity of strain NF－34