電針對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠環(huán)氧合酶-2的影響

孔偉光,張春雁,張樹(shù)輝,蔣文燕,邴興紅,李連波,陳云飛

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電針對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠環(huán)氧合酶-2的影響

孔偉光1,張春雁2,張樹(shù)輝2,蔣文燕2,邴興紅2,李連波2,陳云飛2

(1.內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010020；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海 200437)

探討電針對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)大鼠環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的影響及其預(yù)防大鼠EMs的效應(yīng)機(jī)制。建立大鼠EMs模型,隨機(jī)分為模型組、電針組、COX-2抑制劑組、P450arom抑制劑組、去卵巢組,并設(shè)立假手術(shù)組。電針組電針血海、三陰交穴;COX-2抑制劑組采用塞萊西布膠囊生理鹽水混懸液灌胃;P450arom抑制劑組采用阿納曲唑片生理鹽水混懸液灌胃;卵巢去勢(shì)組切除雙側(cè)卵巢;假手術(shù)組和模型組捆綁固定并行生理鹽水灌胃。治療及對(duì)照處理2星期和4星期后處死各組大鼠,測(cè)量各組大鼠異位囊腫長(zhǎng)、寬、高三徑并計(jì)算平均值,取異位組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察,并測(cè)定血清及組織中COX-2的蛋白水平與組織中COX-2 mRNA的表達(dá)水平。異位囊腫三徑平均值的比較,模型組均明顯大于其他各組(均＜0.05),電針組明顯小于模型組(＜0.05),且比較4星期與2星期電針組可見(jiàn)其生長(zhǎng)較緩慢,異位內(nèi)膜趨于萎縮,部分上皮細(xì)胞壞死;電針組血清中COX-2水平、異位內(nèi)膜組織中COX-2水平及異位內(nèi)膜組織中COX-2 mRNA表達(dá)水平均明顯低于模型組(＜0.05),并隨著療程的延長(zhǎng)效果更明顯。電針可能通過(guò)調(diào)節(jié)異常升高的COX-2 mRNA水平,進(jìn)而影響COX-2蛋白的合成,下調(diào)外周血和局部組織中COX-2的表達(dá)而預(yù)防大鼠EMs的發(fā)生與進(jìn)展。

針刺療法;電針;子宮內(nèi)膜異位癥;環(huán)氧合酶-2;大鼠

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)是育齡婦女的常見(jiàn)病,多發(fā)生在30～45歲的女性,是一種與不孕密切相關(guān)的婦科多發(fā)病,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),Wu等[1]報(bào)道內(nèi)異癥的發(fā)病率達(dá)15%～20%,在不孕癥患者當(dāng)中的發(fā)病率高達(dá)50%。痛經(jīng)、不孕作為其主要臨床表現(xiàn),嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量?，F(xiàn)已基本形成了內(nèi)異癥的臨床診治指南,主要是針對(duì)疼痛、包塊和不孕的手術(shù)(主要是腹腔鏡)、藥物及助孕技術(shù)等治療對(duì)策[2]。但本病難以根治,術(shù)后3年復(fù)發(fā)率為38%～51%[3],且上述療法均存在缺陷[4],倘若能夠在本病發(fā)生的早期予以預(yù)防干預(yù),降低內(nèi)異癥的發(fā)病率,其臨床意義將會(huì)更大。因此,研究本病的發(fā)病機(jī)理,探索早期干預(yù)的治療手段,防患于未然,是當(dāng)前婦科學(xué)亟待解決的問(wèn)題之一。中醫(yī)學(xué)中針灸療法在本病的治療上取得了一定的成效,電針是目前臨床上治療本病的主要手段之一,本研究即采用電針療法作用于EMs大鼠模型,對(duì)電針預(yù)防大鼠EMs的效應(yīng)及其可能的機(jī)制進(jìn)行了有益探索,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(滬)2006-0001]提供,上海市斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司[SCXK(滬)2003-0003]生產(chǎn),健康的清潔級(jí)雌性成熟未交配同一動(dòng)情周期的SD大鼠50只,體重為(200±20)g。

1.2 預(yù)防干預(yù)用品與藥物

蘇州醫(yī)療用品廠有限公司出品的華佗牌無(wú)菌針灸針(0.25 mm×25 mm)、G6805-1A型電針治療儀、塞萊西布膠囊(國(guó)藥準(zhǔn)字J20030098,0.2 g/片,批號(hào)BK070711)、阿納曲唑片(進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)H20050214,1.0 mg/片,批號(hào)ET969)、鹽酸氯胺酮注射液(2 mL含0.1 g,批號(hào)071223)、生理鹽水(0.9%氯化鈉注射液,500 mL/瓶,批號(hào)080222)。

1.3 儀器設(shè)備

BIO-RAD Model 680酶標(biāo)儀,OLYMPUS-BX51型顯微照相系統(tǒng),PERKIN ELMER ABI7000型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,SIGMA 3K15低溫冷凍離心機(jī)。

1.4 試劑

抗大鼠COX-2抗體(abcam:ab23672,Lot.#E 560404,1:40)、相應(yīng)二抗、抗體稀釋液(北京博奧森生物技術(shù)有限公司,Lot.#E080805)、脫蠟修復(fù)液(上海復(fù)旦臨床病理診斷中心生產(chǎn),批號(hào)200813)、DAB顯色試劑(上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司,批號(hào)2008072)、PBS Buffer(Gene Tech,批號(hào)230707)、COX-2 ELISA試劑盒(美國(guó)ADL公司,批號(hào)20071020)、COX-2 mRNA檢測(cè)試劑盒(廣州中山大學(xué)達(dá)安基因公司,批號(hào)20081003)等。

1.5 分組與模型制作

將100只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組16只、去卵巢組16只、造模組68只,在動(dòng)情期,造模組參照J(rèn)ones法[5]進(jìn)行手術(shù)造模,手術(shù)在無(wú)菌條件下進(jìn)行,以2%鹽酸氯胺酮(4 mL/kg)腹腔注射麻醉,將大鼠固定于手術(shù)板上,腹部剪毛,皮膚常規(guī)消毒后,于腹中線(xiàn)恥骨聯(lián)合上1 cm處做2～3 cm長(zhǎng)的縱行切口,打開(kāi)腹腔結(jié)扎左側(cè)子宮局部血管及需切除的子宮段兩端,切下左側(cè)子宮角長(zhǎng)約1 cm置于生理鹽水中,縱行切開(kāi)并將子宮內(nèi)膜與肌層分離,剪成5 mm×5 mm的內(nèi)膜組織片段,令其表面上皮對(duì)著腹壁,用5-0號(hào)真絲縫合線(xiàn)縫于腹壁上,分層關(guān)閉腹腔。假手術(shù)組進(jìn)行假手術(shù),開(kāi)腹方法同造模組,用血管鉗夾持牽拉子宮角。去卵巢組進(jìn)行手術(shù)切除雙側(cè)卵巢,開(kāi)腹方法同造模組,切除雙側(cè)卵巢。術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)7 d,模型建立后將造模組再次隨機(jī)分為電針組17只、COX-2抑制劑組17只、P450arom抑制劑組17只、模型組17只,共6組。

1.6 治療及對(duì)照處理

假手術(shù)組、去卵巢組和模型組進(jìn)行捆綁固定和生理鹽水灌胃,電針組進(jìn)行捆綁電針和生理鹽水灌胃,藥物組進(jìn)行捆綁固定和藥物生理鹽水混懸液灌胃。

電針治療具體操作為,捆綁固定后,以毫針刺入單側(cè)血海與三陰交穴(取穴方法及大鼠穴位定位,參照文獻(xiàn)[6]),接電針治療儀,采用疏密波,電流強(qiáng)度為0.3～0.6 mA,治療15 min。單側(cè)每日1次,次日換另一側(cè)穴位,雙側(cè)交替治療。

灌胃參照《動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[7]。生理鹽水灌胃根據(jù)大鼠體重,按照10 mL/kg計(jì)算灌胃量;藥物生理鹽水混懸液灌胃根據(jù)成人藥物劑量換算大鼠等效劑量,塞萊西布5 mg/kg,阿納曲唑0.1 mg/kg,并根據(jù)大鼠體重,按照10 mL/kg計(jì)算灌胃量,每次灌胃前將配制好的混懸液顛倒混勻。

療程均為每日1次,6 d為1個(gè)療程,療程間隔1 d,治療2個(gè)療程(2星期)后處死1批,余治療4個(gè)療程(4星期)。

1.7 取材與指標(biāo)檢測(cè)

療程結(jié)束后,分別于第2星期與第4星期后在動(dòng)情期將大鼠開(kāi)腹,腹主動(dòng)脈采血處死,3000 rpm離心后取血清;觀察子宮、卵巢及異位囊腫的大體形態(tài),并用雙腳圓規(guī)和直尺測(cè)量異位囊腫長(zhǎng)、寬、高三徑,計(jì)算平均值;取在位內(nèi)膜組織和異位內(nèi)膜組織,部分置于0.8 mL凍存管－80℃保存,部分用10%福爾馬林溶液固定。

1.7.1 ELISA法檢測(cè)血清中COX-2分子表達(dá)水平

血清中COX-2分子表達(dá)水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinked immunosorbentassy,ELISA),按照COX-2 ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.7.2 IHC檢測(cè)在位與異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá)水平

在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá)水平檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry, IHC)。取10%福爾馬林溶液固定組織,脫水,石蠟包埋,5mm連續(xù)切片,抗大鼠COX-2抗體濃度1:40,脫蠟修復(fù)液熱修復(fù),DAB顯色,蘇木素復(fù)染,健康雌性SD大鼠肺臟為陽(yáng)性對(duì)照,用抗體稀釋液代替一抗作為陰性對(duì)照。COX-2主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞漿中,以胞漿呈棕黃色為陽(yáng)性。免疫組化陽(yáng)性計(jì)數(shù)方法,采用雙盲法,任取連續(xù)4個(gè)高倍(×400)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù),然后取平均值,即為該組織切片的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),設(shè)定5個(gè)評(píng)分等級(jí),0為0個(gè),1為1～20個(gè),2為21～40個(gè),3為41～60個(gè),4為＞60個(gè)。

1.7.3 FQ-PCR檢測(cè)在位與異位內(nèi)膜組織中COX-2 mRNA表達(dá)水平

在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜組織中COX-2 mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)。取凍存的異位內(nèi)膜組織打碎勻漿,用一步法抽提總RNA,PCR擴(kuò)增由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因公司合成,上游5’-CYYGCTGTTCCCACCCATGT-3’,下游5’-ATCCTGTCCGGGTACAATCG-3’;PCR產(chǎn)物502bp;內(nèi)參GAPDH引物,上游5’-CCGAGGGCCCACTAAAGG-3’,下游5’-GCTGTTGAAGTCACAGGAGACAA-3’,PCR產(chǎn)物306bp?？俁NA的提取,Trizol提取異位內(nèi)膜組織總RNA;RT的提取,取4mL RNA樣品(陰性對(duì)照為4mL Trizol),加入5×逆轉(zhuǎn)錄buffer 4mL,上游引物F 0.4mL,下游引物R 0.4mL,dNTPs 0.2mL,逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 1mL,DEPC水10mL,反應(yīng)條件為37℃,1 h;PCR的提取,取cDNA產(chǎn)物于50mL反應(yīng)體系中進(jìn)行PCR擴(kuò)增,該反應(yīng)體系包括5×PCR buffer 10mL,外上游引物F 0.5mL,外下游引物R 0.5ml,dNTPs 0.5mL,熒光探針(避光)0.5mL,Taq酶2mL,ddH2O水31mL。PCR擴(kuò)增條件為93℃ 2 min,93℃ 45 s 55℃ 1 min 10Cycle,93℃ 45 s,5℃ 1 min 30Cycle。反應(yīng)在ABI7000型熒光定量PCR儀上進(jìn)行,數(shù)據(jù)采用儀器自帶軟件ABI Prism 7000 SDS Software分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

各組異位組織三徑平均值、血清與組織中COX-2水平、組織中COX-2 mRNA表達(dá)的比較,采用SPSS14.0 One-Way ANOVA統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),以＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組異位組織大體觀察

由表1可見(jiàn),治療及對(duì)照處理2星期與4星期后,假手術(shù)組未見(jiàn)異位囊腫。2星期后,電針組、COX-2抑制劑組、P450arom抑制劑組大鼠異位囊腫大小與模型組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05),僅去卵巢組大鼠異位囊腫小于模型組(＜0.05);而4星期后,電針組、COX-2抑制劑組、去卵巢組大鼠異位囊腫大小,較模型組縮小(＜0.05或＜0.01),P450arom抑制劑組大鼠異位囊腫大小與模型組相比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(＞0.05)。經(jīng)4星期電針治療后,大鼠異位囊腫大小較2星期時(shí)增長(zhǎng)幅度較小。

表1 各組大鼠異位囊腫大小比較 (±s,mm)

注:與模型組比較1)＜0.01,2)＜0.05;與電針組比較3)＜0.05

2.2 各組大鼠血清中COX-2分子表達(dá)水平比較

由表2可見(jiàn),治療及對(duì)照處理2星期與4星期后,模型組大鼠血清中COX-2含量與各組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05或＜0.01)。經(jīng)4星期電針治療后,大鼠血清中COX-2含量明顯少于治療2星期后。

表2 各組大鼠血清中COX-2分子表達(dá)水平比較 (±s,ng/mL)

注:與模型組比較1)＜0.01,2)＜0.05;與電針組比較3)＜0.05

2.3 各組大鼠組織中COX-2蛋白表達(dá)水平比較

COX-2主要表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中,以胞漿中出現(xiàn)明顯的棕色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞,無(wú)著色為陰性細(xì)胞,由免疫組化結(jié)果可見(jiàn),假手術(shù)組子宮內(nèi)膜及其他各組在位內(nèi)膜較少或偶有弱表達(dá)COX-2陽(yáng)性細(xì)胞,無(wú)法納入統(tǒng)計(jì)。

表3 各組大鼠異位內(nèi)膜組織COX-2蛋白表達(dá)水平比較 (±s,ng/mL)

注:與模型組比較1)＜0.01

由表3可見(jiàn),治療及對(duì)照處理2星期與4星期后,模型組COX-2的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于其余各組(＜0.01);電針組、COX-2抑制劑組、P450arom抑制劑組、去卵巢組相比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。從均數(shù)來(lái)看,隨著療程的增加,各治療組的COX-2蛋白含量有不同程度下降,尤以4星期去卵巢組明顯,且與2星期時(shí)各組相比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。詳見(jiàn)圖1。

治療及對(duì)照處理2星期后、4星期后假手術(shù)組子宮內(nèi)膜組織與其他各組異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白的組織分布與表達(dá)情況詳見(jiàn)圖1-圖12,箭頭所指為COX-2陽(yáng)性表達(dá)的間質(zhì)細(xì)胞。

A 2星期假手術(shù)組大鼠子宮內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);B 4星期假手術(shù)組大鼠子宮內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);C 2星期模型組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);D 4星期模型組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);E 2星期電針組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);F 4星期電針組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);G 2星期P450抑制劑組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);H 4星期P450抑制劑組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);I 2星期COX-2抑制劑組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);J 4星期COX-2抑制劑組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);K 2星期去卵巢組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá);L 4星期去卵巢組大鼠異位內(nèi)膜組織中COX-2蛋白表達(dá)。IHC×400

2.4 各組大鼠組織中COX-2 mRNA表達(dá)水平比較

本實(shí)驗(yàn)中陰性對(duì)照擴(kuò)增結(jié)果呈陰性表達(dá),未檢測(cè)到目的基因COX-2 mRNA的表達(dá),待測(cè)標(biāo)本檢測(cè)到目的基因COX-2 mRNA的表達(dá),對(duì)照內(nèi)參的Ct值,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示,在位內(nèi)膜(23.96±0.99)與異位內(nèi)膜(26.13±1.58)間COX-2 mRNA的表達(dá)比較明顯偏低(＜0.05)。

由表4可見(jiàn),在位內(nèi)膜間,治療及對(duì)照處理2星期與4星期后,模型組明顯高于電針組、COX-2抑制劑組、P450arom抑制劑組、去卵巢組、假手術(shù)組(＜0.01)。4星期各組與2星期各組比較可發(fā)現(xiàn)各干預(yù)組與模型組在位內(nèi)膜組織中COX-2 mRNA的表達(dá)均有不同程度下降,但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(＞0.05)。異位內(nèi)膜間,治療及對(duì)照處理2星期與4星期后,模型組明顯高于電針組、COX-2抑制劑組、P450arom抑制劑組、去卵巢組(＜0.01);與電針組比較,去卵巢組明顯偏低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05),與其余各組COX-2 mRNA的表達(dá)比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(＞0.05)。4星期各組與2星期各組比較可發(fā)現(xiàn)電針組、COX-2抑制劑組、P450arom抑制劑組和去卵巢組其COX-2 mRNA表達(dá)含量有不同程度下降,模型組異位組織中COX-2 mRNA表達(dá)4星期后較2星期時(shí)表達(dá)有所上升,但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(＞0.05)。

表4 各組大鼠組織中COX-2 mRNA表達(dá)水平比較 (±s)

注:與模型組比較1)＜0.01

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥屬中醫(yī)學(xué)“痛經(jīng)”、“癥瘕”、“月經(jīng)不調(diào)”、“不孕”范疇,病因病機(jī)多責(zé)之于血瘀,在治療上取得了一定的成效。針灸是中醫(yī)學(xué)的一大治療手段,因其應(yīng)用簡(jiǎn)便、對(duì)患者刺激較小,多年來(lái)廣泛地應(yīng)用于對(duì)本病的治療中。針灸對(duì)EMs的療效明顯,多選用血海、三陰交等為治療EMs的主穴,可以活血化瘀,疏經(jīng)止痛。

本研究選取異位組織長(zhǎng)、寬、高三徑的測(cè)量結(jié)果平均值對(duì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)判,結(jié)果證實(shí),經(jīng)電針治療的EMs大鼠,其異位囊腫生長(zhǎng)趨于緩慢,與塞萊西布和阿納曲唑兩藥相比具有相同的預(yù)防功效,提示電針與上述兩藥均有抑制異位囊腫生長(zhǎng)的效應(yīng),這與針灸治療EMs的效應(yīng)結(jié)果相似[8],但目前尚未見(jiàn)EMs的預(yù)防治療或電針對(duì)其預(yù)防作用的相關(guān)報(bào)道。

EMs的發(fā)病機(jī)制至今尚未明確,Sampson等[9]于1922年提出的經(jīng)血逆流子宮內(nèi)膜種植學(xué)說(shuō)無(wú)法解釋80%～90%的婦女存在經(jīng)血逆流[10],卻只有15%～20%的婦女發(fā)生異位癥的臨床現(xiàn)象。近年我國(guó)郎景和[11]在國(guó)際上首次提出新的EMs病因假說(shuō)——在位內(nèi)膜決定論(determinant of uterine eutopic endometrium),引起了國(guó)際同行的關(guān)注。他認(rèn)為,在位內(nèi)膜的差異是發(fā)生內(nèi)異癥的關(guān)鍵因素。COX-2能增加細(xì)胞的侵襲性,且可誘導(dǎo)血管形成,促進(jìn)異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖、種植和生長(zhǎng),在內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜中,COX-2的表達(dá)明顯升高[12]。

COX-2的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致PGs合成異常,刺激內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生P450arom,合成E2,為異位內(nèi)膜生長(zhǎng)提供了激素支持。此外,COX-2還可能參與局部組織血管生成、細(xì)胞的增生和抑制免疫監(jiān)督,促進(jìn)了異位癥的病理生理過(guò)程[13]。目前針對(duì)COX-2和P450arom已研制出相應(yīng)的抑制劑,并已投入臨床與COX-2和P450arom表達(dá)異常相關(guān)的疾病治療中,如塞萊西布用于拮抗COX-2的表達(dá),從而緩解成人骨關(guān)節(jié)炎和類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的癥狀和體征;阿納曲唑通過(guò)抑制芳香化酶,用于乳腺癌的治療中。

研究表明[14,15],電針可下調(diào)COX-2水平的異常升高,推測(cè)這可能是電針干預(yù)EMs發(fā)生的主要環(huán)節(jié)之一。本研究即從該角度入手,結(jié)果表明,模型組大鼠血清、異位內(nèi)膜組織中COX-2含量較假手術(shù)組大鼠血清及正常內(nèi)膜組織均明顯升高,且在位與異位內(nèi)膜組織COX-2 mRNA表達(dá)均明顯增高,而經(jīng)電針治療的大鼠,其血清中、異位組織中COX-2含量明顯降低,在位與異位內(nèi)膜組織COX-2 mRNA表達(dá)均明顯降低,與應(yīng)用COX-2抑制劑和P450arom抑制劑的效應(yīng)相當(dāng),且隨著療程的延長(zhǎng)作用更明顯,提示電針可能是通過(guò)調(diào)節(jié)異常升高的COX-2 mRNA水平,進(jìn)而影響COX-2蛋白的合成,下調(diào)外周血和局部組織中COX-2的表達(dá),削弱由COX-2異常表達(dá)而引起的細(xì)胞侵襲、血管形成及異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖、種植和生長(zhǎng),從而預(yù)防大鼠EMs的發(fā)生與進(jìn)展,李傲等[16]運(yùn)用中藥治療大鼠EMs也取得了類(lèi)似的效應(yīng)。

本研究從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的角度初步探討了電針對(duì)大鼠EMs的預(yù)防效應(yīng)及其可能的作用機(jī)制,證實(shí)電針可能是通過(guò)調(diào)節(jié)異常升高的COX-2 mRNA表達(dá),下調(diào)COX-2水平而起到預(yù)防大鼠EMs的發(fā)生發(fā)展的效應(yīng),但該過(guò)程中尚存在許多相關(guān)因素,有待于進(jìn)一步的研究探討。

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Effect of Electroacupuncture on Cyclooxygenase-2 in Endometriosis Rats

KONG Wei-guang1, ZHANG Chun-yan2, ZHANG Shu-hui2, JIANG Wen-yan2, BING Xing-hong2, LI Lian-bo2, CHEN Yun-fei2.

1. Inner Mongolia Mongolian hospital; 2.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Yueyang Hospital of Combined Traditional Chinese and Western Medicine,Shanghai 200437,China

To investigate the effect of electroacupuncture (EA) on cyclooxygenase-2 (COX-2) in endometriosis (EMs) rats and explore the mechanism of its action in preventing rat EMs.A rat EMs model was maded. The rats were randomly assigned to model, EA, COX-2 inhibitor, P450arom inhibitor, ovariectomy and sham operation groups. The EA group received electroacupuncture at points Xuehai(SP10) and Sanyinjiao(SP6); the COX-2 inhibitor group, an oral gavage of a suspension of Celebrex in normal saline; the P450arom inhibitor group, an oral gavage of a suspension of Anastrozole in normal saline; the ovariectomy group, surgical removal of both ovaries; the sham operation and model groups; binding fixation and an oral gavage of normal saline. All groups of rats were sacrificed after two and four weeks of treatment or control treatment. The length, width and height of the ectopic cyst were determined. An average value was calculated. The ectopic tissue was taken and examined histopathologically. The level of COX-2 in serum and the tissue and the expression of COX-2 mRNA in the tissue were measured.The average values of the three diameters of the ectopic cyst were significantly larger in the model group than in the other groups (all＜0.05) and significantly smaller in the EA group than in the model group (＜0.05). A comparison between two and four weeks in the EA group showed that the ectopic cyst grew slowly, the ectopic inner membrane tended to atrophy and part of the epithelia became necrotic. The level of COX-2 in serum and the ectopic intimal tissue and the expression of COX-2 mRNA in the ectopic intimal tissue were significantly lower in the EA group than in the model group (＜0.05). The effects became more marked as the course of treatment lengthened.Electroacupuncture may prevent the occurrence and development of EMs in rats by regulating abnormally high COX-2 mRNA levels, affecting the synthesis of COX-2 and downregulating the expression of COX-2 in peripheral blood and the local tissues.

Acupuncture therapy; Electroacupuncture; Endometriosis; Cyclooxygenase-2; Rats

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2012.11.847

1005-0957(2012)11-0847-05

上海市衛(wèi)生局科研項(xiàng)目資助(2008221);上海高校選拔培養(yǎng)優(yōu)秀青年教師科研專(zhuān)項(xiàng)基金資助(szy08102);上海市重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目資助(S30303,S30304)

孔偉光(1984 - ),女,主治醫(yī)師

陳云飛(1968 - ),男,研究員,研究方向?yàn)獒樉拿庖哐芯? E-mail:icyf1968@yahoo.com.cn

2012-05-23