趙金娟

合肥市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，安徽 合肥 230061

宮頸癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率位居第二的腫瘤。宮頸癌新發(fā)病例數(shù)全世界每年達(dá)到47萬例，其中，發(fā)展中國家占80%。宮頸癌有可逆且較長的癌前病變期，因此，宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)就顯得尤其重要[1]。另外，目前控制宮頸癌的主要手段是篩查[2]。本文進(jìn)行了高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）檢測聯(lián)合肉眼醋酸試驗在宮頸癌前病變篩查中應(yīng)用的研究，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年8月～2010年2月于我院就診的532例可疑宮頸癌前病變患者為研究對象，年齡21～62歲，平均31.2歲。

1.2 方法

1.2.1 肉眼醋酸試驗 于試驗前向所有可疑宮頸癌前病變患者講解檢查過程，簽署《知情同意書》?；颊呷“螂捉厥挥跈z查床上，先觀察有無分泌物，外生殖器和會陰部有無疣、潰瘍、丘疹、水泡、水腫、表皮剝脫等，有無腹股溝淋巴結(jié)腫大。暴露宮頸，觀察宮頸形態(tài)及大小，拭凈宮頸表面的分泌物，辨別鱗柱狀交界區(qū)，觀察是否有宮頸炎、濕疣、白斑、陳舊性裂傷、納氏囊、息肉、宮頸外翻等；將沾有5%醋酸溶液的棉球涂于宮頸表面，1 min后觀察宮頸著色情況。

1.2.2 實時熒光定量PCR技術(shù) 取凍存已裂解的細(xì)胞，沉淀RNA，清洗RNA后將RNA干燥，合成樣品cDNA，將包含逆轉(zhuǎn)錄buffer、上游引物、下游引物、dNTP、逆轉(zhuǎn)錄酶、DEPC水、RNA模板共10 μl的反應(yīng)體系混合，得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液后，將梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品的管家基因行實時熒光定量PCR檢測，制備出用于繪制梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線的DNA模板，最后將待測樣品的待測基因行實時熒光定量PCR檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肉眼醋酸試驗情況

532例可疑宮頸癌前病變患者均進(jìn)行肉眼醋酸試驗，發(fā)現(xiàn)異常著色的患者320例，占60.15%，年齡28～59歲，平均35.4歲。

2.2 實時熒光定量PCR技術(shù)檢測高危型HPV感染情況

320例肉眼醋酸試驗異常著色的患者中，高危型HPV陽性190例，陽性率為59.38%。212例肉眼醋酸試驗正常著色的患者中，高危型HPV陽性18例，陽性率為8.49%。肉眼醋酸試驗異常著色患者高危型HPV感染陽性率（59.38%）明顯高于肉眼醋酸試驗正常著色患者（8.49%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 不同檢測方法高危型HPV感染情況比較

3 討論

宮頸癌在發(fā)展中國家是嚴(yán)重威脅婦女健康和生命的疾病之一[3]，也是唯一通過人為干預(yù)即可降低病死率和發(fā)病率的惡性腫瘤[4]。宮頸癌前病變是指癌癥發(fā)生部位于癌癥發(fā)生前產(chǎn)生的病變。其中，與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的癌前病變主要是指宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN），其進(jìn)展變化過程中的細(xì)胞學(xué)改變則被作為篩選方法的依據(jù)[5]。宮頸癌前病變主要通過篩查達(dá)到及時、有效診斷的目的。HPV持續(xù)感染是宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)病、致病的主要原因[6]。

以往傳統(tǒng)的宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為宮頸巴氏涂片法，雖然宮頸巴氏涂片法在以前大大降低了宮頸癌的死亡率和發(fā)病率，但是巴氏涂片法漏診率高，假陰性率高。李潔等[7]報道，宮頸巴氏涂片法的敏感度為20%～35%，已逐漸被其他的檢查方法如肉眼醋酸試驗和HPV-DNA法代替。肉眼醋酸試驗的試驗原理為蛋白凝固。HPV感染上皮的不正常細(xì)胞和細(xì)胞過多產(chǎn)生的蛋白質(zhì)與醋酸結(jié)合后凝固，出現(xiàn)發(fā)亮、雪白的損害，其邊緣為羽毛狀、角狀或鋸齒狀。Ottaviano等[8]最早將肉眼醋酸試驗應(yīng)用于臨床，他認(rèn)為宮頸不典型增生細(xì)胞、宮頸不典型鱗化狀細(xì)胞等由于含有較豐富的染色質(zhì)，細(xì)胞核漿比例大，加入醋酸后表層細(xì)胞和細(xì)胞漿發(fā)生凝結(jié)，降低細(xì)胞的透明度，出現(xiàn)肉眼可見的白色，而正常的柱狀上皮雖然在醋酸的作用下出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，血管收縮，一過性降低細(xì)胞透明度，也可出現(xiàn)一過性白色改變，但是時間較短，故涂抹醋酸1 min后觀察到白色改變則為宮頸不典型增生細(xì)胞和宮頸不典型鱗化狀細(xì)胞。肉眼醋酸試驗具有依從性好，失訪率低，方法簡單，易于掌握，具有只需集中、系統(tǒng)、短期的培訓(xùn)即可操作等優(yōu)勢[9-11]。全球?qū)m頸癌聯(lián)盟（ACCP）認(rèn)為，在發(fā)展中國家，可將肉眼醋酸試驗作為宮頸癌前病變的初篩方法[12-13]。本研究肉眼醋酸試驗的靈敏度為60.15%，稍低于Sankaranarayanan[11]研究中選取56939例患者篩查的靈敏度76.8%。

實時熒光定量PCR技術(shù)是一種近年來發(fā)展較快的多色熒光檢測核酸定量技術(shù)[14-15]。實時熒光定量PCR技術(shù)定量檢測PCR擴(kuò)增引物，且在封閉狀態(tài)下檢測，克服了擴(kuò)增引物污染導(dǎo)致的假陰性、假陽性等缺陷，特異性增強(qiáng)，提高了檢測質(zhì)量，是臨床應(yīng)用分子生物學(xué)實驗技術(shù)的一種可靠的方法[16]。本研究結(jié)果顯示，肉眼醋酸試驗異常著色患者HPV感染陽性率為59.38%，類似于劉紅衛(wèi)等[17]報道的高危型HPV陽性率為63.39%。

本研究分別檢測了肉眼醋酸試驗異常著色患者的高危型HPV感染陽性率和肉眼醋酸試驗正常著色患者的高危型HPV感染陽性率，意在用較為精確的實時熒光定量PCR技術(shù)檢測證明正常著色和異常著色患者中高危型HPV陽性率的差異，從而進(jìn)一步說明肉眼醋酸可作為較為可靠的初篩方法篩選出宮頸癌前病變患者。

綜上所述，肉眼醋酸試驗聯(lián)合高危型HPV-DNA檢測可及時有效地發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，可作為宮頸癌前病變篩查方案應(yīng)用于臨床。

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