王昌亮， 鄭春輝， 王在國(guó)

進(jìn)行檢測(cè)，以探討 Survivin在其中的表達(dá)情況，為乳腺癌的診斷及判斷預(yù)后提供重要的生物學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集濰坊市人民醫(yī)院腫瘤外科2008年1月至2009年8月行乳腺癌改良根治術(shù)癌組織標(biāo)本80例，年齡27～81歲。病理證實(shí)均為乳腺癌，其中導(dǎo)管內(nèi)癌5例，早期浸潤(rùn)性癌7例，浸潤(rùn)性特殊癌23例，浸潤(rùn)性非特殊癌45例。按國(guó)際抗癌聯(lián)盟的TNM分期法分期:Ⅰ期13例，Ⅱ期49例，Ⅲ期18例。對(duì)照組為纖維瘤旁正常乳腺組織20例，乳腺增生組織20例。所有病例均為女性。

1.2 方法 所有標(biāo)本常規(guī)經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，病理切片，厚度4 μm。采用免疫組織化學(xué)SP方法，標(biāo)本常規(guī)脫蠟水化后經(jīng)3%過(guò)氧化氫處理，微波抗原修復(fù)，Survivin兔抗人多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋公司，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。將已知陽(yáng)性的乳腺癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 Survivin表達(dá)陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn) 染色陽(yáng)性信號(hào)位于細(xì)胞漿，細(xì)胞染色強(qiáng)度明顯高于背景呈黃色到棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片檢測(cè)5個(gè)不同視野(×400)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在5%以下為－，5% ～10%為+，10% ～50%為++，50%以上為+++。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用軟件SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)組間采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同乳腺組織中Survivin的表達(dá)情況 80例乳腺癌組織中61例Survivin表達(dá)為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為76.3%，20例乳腺增生組織中Survivin表達(dá)陽(yáng)性為5例，陽(yáng)性率為25.0%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);20例纖維瘤旁正常乳腺組織 Survivin不表達(dá)。見(jiàn)表1。

2.2 Survivin的表達(dá)與乳腺癌病理分型及臨床分期的關(guān)系 Survivin在非浸潤(rùn)性癌、早期浸潤(rùn)性癌、浸潤(rùn)性非特殊癌、浸潤(rùn)性特殊癌中陽(yáng)性率分別為40.0%、57.1%、47.8%、51.1%，四者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05，見(jiàn)表2。而在 TNM分期中，Survivin蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期陽(yáng)性表達(dá)率分別為38.5%、57.1%、88.9%，隨 TNM 臨床分期的增高而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表2 Survivin的表達(dá)與乳腺癌病理分型的關(guān)系

表3 Survivin的表達(dá)與乳腺癌臨床分期的關(guān)系

3 討論

1997年耶魯大學(xué)的Ambrosini等利用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體effectorcell protease receptor 1，EPR-1 cDNA在人類(lèi)基因組庫(kù)的雜交篩選中克隆出Survivin。Survivin基因位于17q25，全長(zhǎng)為15Kd，由4個(gè)外顯子及3個(gè)內(nèi)含子組成。Survivin主要表達(dá)于胚胎、發(fā)育的胎兒組織和大多數(shù)腫瘤組織內(nèi)，不表達(dá)于成熟的正常組織［1］。

近年來(lái)，對(duì)Survivin的分子生物學(xué)特點(diǎn)、組織分布、凋亡抑制機(jī)制及其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、細(xì)胞周期之間的關(guān)系研究已取得了很大進(jìn)展。Survivin與

bcl-2相似，其基因的表達(dá)在腫瘤中直接或間接地抑制了細(xì)胞的凋亡。在生理狀態(tài)下，細(xì)胞正常凋亡清除了體內(nèi)衰老和異常的細(xì)胞，有利于保持體內(nèi)組織的動(dòng)態(tài)平衡。在腫瘤發(fā)生的早期，各種因素導(dǎo)致凋亡抑制，不僅有利于細(xì)胞的增殖，還有利于異常基因細(xì)胞的進(jìn)一步積聚，促使組織向惡性轉(zhuǎn)化，從而有助于腫瘤進(jìn)展。本研究在乳腺增生組織中檢測(cè)到了

Survivin的表達(dá)，但明顯低于乳腺癌中 Survivin的表達(dá)，提示Survivin表達(dá)可能出現(xiàn)于乳腺癌惡性轉(zhuǎn)化的早期。在正常細(xì)胞中 Survivin啟動(dòng)子活性非常低，而在腫瘤細(xì)胞系 Hela中，其啟動(dòng)子的活性增加了10～30倍，但引起Survivin基因在乳腺組織惡化的早期活化因素仍不是很清楚，有待于進(jìn)一步研究。Survivin在大多數(shù)常見(jiàn)腫瘤組織中均異常高表達(dá)［2-3］，如肺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、結(jié)腸癌。本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌中Survivin陽(yáng)性率為76.3%，Survivin陽(yáng)性表達(dá)與病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，但與TNM臨床分期關(guān)系密切，TNM分期越晚，Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率越高。這種在乳腺正常組織和增生組織不表達(dá)或少量表達(dá)，而在腫瘤組織中過(guò)度表達(dá)的特點(diǎn)說(shuō)明，

Survivin基因可能是在乳腺增生早期或者乳腺癌發(fā)生早期階段被激活，并開(kāi)始表達(dá)。Survivin在乳腺惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)，抑制細(xì)胞的正常凋亡，延長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的生存期，增加惡性腫瘤的生長(zhǎng)速度。提示Survivin基因的激活參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展。檢測(cè)Survivin對(duì)腫瘤的基因診斷、基因治療有重要意義。

［1］ Adida C，Crotty PL，McGrath J，et a1.Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation［J］.Am J Pathol，1998，152(1):43-49.

［2］ Grabowski P.Provalue of nuclear survivin expression in esophageal squamovs cell carcinoma［J］.Br J Cancer，2003，88(1):115.

［3］ Adida C，Crotty PL，Mcgrath J，et al.Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosisgene survivin in human and mouse differentiation［J］.Am J Pathol，1998，152(1):43.