許慶瑞 吳秉純 王偉明

（黑龍江省中醫(yī)研究院·哈爾濱 150036）

解脲支原體 (Ureaplasma urealyticum，Uu) 是引起非淋菌性尿道炎 (宮頸炎) (NGU) 最常見(jiàn)的病原體，本病主要通過(guò)性行為傳染，侵犯泌尿生殖器官，臨床有非典型性，頑固復(fù)發(fā)性和遷延不愈等特點(diǎn)?？股貙?duì)其病原體有一定的殺滅及抑制作用，但近年來(lái)由于解脲支原體的耐藥不斷增加，耐藥率逐年上升，抗生素的療效顯著下降?？菇怆迥z囊是用于治療解脲支原體(Uu)感染的非淋菌性尿道炎(NGU)的純中藥制劑，本文旨在探討其在治療解脲支原體(Uu)感染的非淋菌性尿道炎(NGU)的作用機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株

Uu 標(biāo)準(zhǔn)菌株：血清4 型，由北京首都兒科研究所惠贈(zèng)。

1.2 受試藥物

抗解脲膠囊 由黑龍江省中醫(yī)研究院中藥所制劑室提供。批號(hào)：20050212。規(guī)格：0.3g/粒（每粒相當(dāng)于原藥材5g 生藥）。用法用量：口服，一次4 粒，一日3 次。

琥乙紅霉素 哈藥集團(tuán)制藥總廠(chǎng)制劑廠(chǎng)生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H23020648。批號(hào)：20050501 。

1.3 主要試劑

Uu 培養(yǎng)基（其液體培養(yǎng)基主要成分為牛腦心浸液基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無(wú)菌胎牛血清、新鮮酵母浸液、尿素、青霉素和酚紅等）。

[16] 徐惠喜：《吹響亞太自貿(mào)區(qū)建設(shè)的號(hào)角》，《經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào)》2014年4月25日，http://paper.ce.cn/jjrb/html/2014-04/25/content_277847.htm。

白細(xì)胞介素-8（IL-8）放免試劑盒 由北京福瑞生物工程公司生產(chǎn)。

1.4 受試動(dòng)物

Wistar 大白鼠，體重200±20g，雌雄各半，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（合格證號(hào)為：黑動(dòng)字第P00102005）。

1.5 器 材

純水儀：Millipore Milli-QII；PCR 反應(yīng)儀：GeneAmp PE2400；pH 計(jì)：METER

1.6 藥液的配制

抗解脲膠囊：實(shí)驗(yàn)時(shí)將一定量抗解脲膠囊的提取物放入乳缽中，加蒸餾水混勻，配制成以水為溶劑濃度分別為7.2%（0.36g 生藥/ml）、14.4%（0.72g生藥/ml）、28.8%（1.44g 生藥/ml）的混懸液，備用。琥乙紅霉素：配制成以水為溶劑濃度為1.44%的混懸液，備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

在SPF 實(shí)驗(yàn)室經(jīng)一周常規(guī)飼養(yǎng)觀(guān)察后，取體重為200±20g 的健康Wistar 大鼠70 只，雌雄各半，用2%戊巴比妥鈉按2ml/kg 劑量腹腔注射麻醉動(dòng)物，脫毛、消毒后，在無(wú)菌條件下打開(kāi)腹腔，充分暴露膀胱，先用注射器抽盡膀胱內(nèi)尿液，然后再向膀胱內(nèi)注射0.5ml 解脲支原體懸液（106ccu/ml），將膀胱放回原位，縫合腹腔。上述操作均在無(wú)菌條件下嚴(yán)格操作。14d 后，取5 只造模大鼠通過(guò)尿道組織HE 染色、PCR 檢測(cè)解脲支原體MB 抗原來(lái)確定造模狀況。

2.2 動(dòng)物分組及給藥

造模成功后，將解脲支原體感染的模型大鼠50 只，隨機(jī)分成5 組，每組10 只，即模型對(duì)照組、抗解脲膠囊高、中、低劑量組、琥乙紅霉素西藥對(duì)照組；另取10 只健康大鼠作為空白對(duì)照組。抗解脲膠囊高、中、低劑量組劑量分別為21.6g 生藥/kg、10.8g 生藥/kg 和5.4g 生藥/kg；同法給予琥乙紅霉素西藥對(duì)照組劑量0.216g/kg（相當(dāng)于臨床用量）。以上給藥組通過(guò)口服給藥，每日一次，給藥容積1.5ml/100g，空白對(duì)照組和模型組給予同體積生理鹽水，給藥時(shí)間均連續(xù)兩周，每日觀(guān)察其活動(dòng)、進(jìn)食等情況；末次給藥后1h，各組大鼠摘眼球取血，處死動(dòng)物，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 一般情況的檢查 每日觀(guān)察大鼠活動(dòng)、飲水、進(jìn)食，尿液顏色及尿道分泌物等情況。

2.3.2 尿道組織的病理學(xué)檢查 將大鼠處死后，取尿道組織，用10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，浸蠟，切片，HE 染色，光鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2.3.3 免疫功能測(cè)定 血清中IL-8 測(cè)定 采用放射免疫的方法，用DFM-96 型多管放射免疫計(jì)數(shù)器（合肥眾成機(jī)電技術(shù)公司生產(chǎn)）檢測(cè)，由黑龍江省醫(yī)院放射免疫中心完成，具體方法參見(jiàn)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)。

3 結(jié) 果

3.1 解脲支原體感染動(dòng)物模型的建立與確證

大鼠在感染解脲支原體后多數(shù)動(dòng)物精神抑郁，活動(dòng)減少，被毛粗糙，部分大鼠尿道可見(jiàn)分泌物。病理學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，尿道組織上皮細(xì)胞有脫落，增生明顯，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，有分葉核。感染后第14d 進(jìn)行尿道組織PCR 檢測(cè)，結(jié)果表明，感染14d 時(shí)尿道組織PCR 檢測(cè)均為陽(yáng)性，擴(kuò)增出一條約429bp 的清晰片段，證實(shí)本次試驗(yàn)所建立的解脲支原體感染動(dòng)物模型可靠。

3.2 一般情況觀(guān)察

感染解脲支原體后，多數(shù)大鼠精神抑郁，活動(dòng)減少，被毛粗糙，部分大鼠尿道可見(jiàn)少量淡黃色分泌物。經(jīng)4～7 天后各給藥組癥狀有所減輕，9～12 天有些大鼠癥狀基本消失。

3.3 尿道組織病理變化

空白組，基本無(wú)病理變化；模型組，主要表現(xiàn)在炎細(xì)胞浸潤(rùn)，有局灶性增生，管腔變薄，上皮細(xì)胞有脫落；各給藥組炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少。中藥陽(yáng)性組，少數(shù)尿道上皮有局灶性增生，有一例上皮細(xì)胞有脫落；西藥陽(yáng)性組，有少數(shù)尿道上皮細(xì)胞變薄、增生；抗解脲膠囊各劑量組尿道上皮細(xì)胞炎性浸潤(rùn)、增生的程度隨劑量的增加逐步減輕。

3.4 IL-8 細(xì)胞因子水平的測(cè)定

與正常對(duì)照組比較，模型組、泌淋清組大鼠血清中IL-8 極顯著升高（P＜0.01），抗解脲膠囊低劑量組顯著升高（P＜0.05），抗解脲膠囊高劑量組、琥乙紅霉素對(duì)照組、抗解脲膠囊中劑量組升高，但差異不顯著；與模型組比較，給藥各劑量組都極顯著降低（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 抗支膠囊對(duì)解脲支原體感染大鼠血清IL-8 的影響（ -±S n=10）

表1 抗支膠囊對(duì)解脲支原體感染大鼠血清IL-8 的影響（ -±S n=10）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05， **P＜0.01；與模型組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。

組 別 劑量（g/kg） IL-8（ng/ml）正常對(duì)照組 等容積 0.602±0.177模型對(duì)照組 等容積 1.601±0.435**琥乙陽(yáng)性組 0.216 0.818±0.281ΔΔ抗解脲高劑量組 21.6 0.693±0.204ΔΔ抗解脲中劑量組 10.8 0.744±0.196ΔΔ抗解脲低劑量組 5.4 0.896±0.227ΔΔ*

4 討 論

IL-8 是一種多功能因子,其生物學(xué)功能無(wú)種屬特異性。早期發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞是其作用的靶細(xì)胞,其特異性趨化中性粒細(xì)胞進(jìn)入炎性組織,促使其脫顆粒、產(chǎn)生超氧陰離子、引起呼吸暴發(fā)等,在炎性反應(yīng)中起重要作用[2]。它能促進(jìn)炎性反應(yīng)進(jìn)程、刺激血管的形成、促有絲分裂、調(diào)節(jié)宿主免疫功能等,與多種炎性反應(yīng)性疾病、腫瘤、免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。

感染或炎性反應(yīng)性疾病能導(dǎo)致一系列細(xì)胞因子的激活,促炎因子和抗炎因子均有不同程度的升高。IL-8 是炎性介質(zhì)網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵成分,其強(qiáng)有力的促炎作用在炎性反應(yīng)中必不可少,但當(dāng)IL-8 過(guò)度分泌或?qū)α＜?xì)胞的不適當(dāng)激活也能導(dǎo)致正常組織、細(xì)胞的損害,甚至導(dǎo)致多器官衰竭[3]。

本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，Uu 感染的模型組大鼠IL-8水平明顯升高，與空白對(duì)照組比較，有極顯著差異(P＜0.01)。提示IL-8 水平的升高和Uu 感染有關(guān)。與模型組比較，抗解脲膠囊組血IL-8 顯著性降低，治療后下降至接近正常水平。提示抗解脲膠囊在一定程度上，具有抑制Uu 感染尿道粘膜組織后機(jī)體過(guò)度釋放IL-8 的作用，調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞免疫功能，減少的炎癥反應(yīng)，降低其對(duì)機(jī)體的傷害。

[1] 楊建宏,張俊威,吳秉純.解脲栓對(duì)解脲支原體感染大鼠免疫功能影響的研究[J].中藥藥理與臨床，2008；24(1)：57-59

[2] 張艷芳,楊廷桐.白細(xì)胞介素-1,8,10 與心肌缺血-再灌注損傷[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,23(2)：210-212

[3] 姚瑤,王琳琳.白細(xì)胞介素-8 研究進(jìn)展[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2009,24(10)：789-792