HPLC法測(cè)定楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量＊

王 超 肖 茜 吳 寅 李玉文 賈 娜 趙 超 奚苗苗 文愛(ài)東

第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科（西安 710032）

楤木皂苷膠囊是本院的院內(nèi)制劑，其主要成分為從太白楤木藥材中提取的楤木皂苷提取物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)及臨床驗(yàn)證具有較好的降脂降糖效果，臨床主要用于糖尿病的治療。本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)楤木皂苷膠囊進(jìn)行質(zhì)量研究，為控制楤木皂苷膠囊的質(zhì)量提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為后續(xù)開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供質(zhì)量保證。本文成功建立了以高效液相色譜法測(cè)定楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量的方法。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，所建立的方法具有良好的精密度和回收率，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀 器 高效液相色譜儀Shimaduz LC－10Avp（日本島津）；紫外分光光度計(jì)Spectronic Genesys 2（美國(guó)）。

1.1 試劑 楤木皂苷膠囊（第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科制備）、齊墩果酸準(zhǔn)品（天津一方科技有限公司 含量98%）、甲醇（色譜純，天津彪仕奇科技發(fā)展有限公司，09099501）、磷酸（分析純）。

1.2 色譜條件 分析柱Diamonsil C18（2）（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－0.1%磷酸水（80：20）；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；流速：1.0mL／min；室溫；進(jìn)樣量20μL。在此色譜條件下，主峰的理論塔板數(shù)為2403。

2 溶液的制備 2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定齊墩果酸對(duì)照品2.5mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1mL含齊墩果酸50μg）。

2.2 供試品溶液的制備 取楤木皂苷膠囊內(nèi)容物約0.25g，加20mL 10%稀硫酸，于70℃下水浴回流4h，提取液用氯仿60mL分3次萃取，合并氯仿層萃取液，用水洗滌2次，每次15mL，棄水液，蒸干，加甲醇溶解并定容到10mL，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 空白對(duì)照的制備 精密稱取按處方量制備的不含各成分的空白輔料0.25g，按樣品溶液的制方法操作，制成空白對(duì)照溶液。

2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 對(duì)齊墩果酸溶液在200～400nm進(jìn)行掃描，在210nm處有最大吸收，故選擇210nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3 HPLC法專一性考察 分別將對(duì)照品溶液、空白輔料溶液和樣品溶液20μL注入高效液相色譜儀，在210nm處測(cè)定吸收峰面積，保留時(shí)間為17.2min，其對(duì)照品，空白基質(zhì)及樣品的HPLC圖譜見(jiàn)附圖。

附圖 齊墩果酸對(duì)照品（A）、楤木皂苷膠囊供試品（B）、楤木皂苷膠囊陰性對(duì)照品（C）（17.2min：齊墩果酸的峰）

4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取上述對(duì)照品溶液，分別用甲醇制成含量為 27.5μg／mL、41.25μg／mL、55μg／mL、82.5μg／mL、110μg／mL的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析（n＝6），以標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品濃度（C）對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y＝9132.4 X－47376，r＝0.9997。

5 精密度試驗(yàn) 選擇高、中、低3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)濃度的齊墩果酸溶液，分別在日內(nèi)和日間測(cè)定3次，計(jì)算日內(nèi)和日間RSD%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的的樣品（齊墩果酸總量0.93mg／g）約20mg，分別精密加入齊墩果酸對(duì)照品溶液，按楤木皂苷膠囊的制樣方法處理，按樣品測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 齊墩果酸回收率測(cè)定結(jié)果（n＝6）

7 樣品測(cè)定 精密稱取楤木膠囊內(nèi)容物20mg，按樣品溶液制備方法配制后，在相同色譜條件下測(cè)定峰面積，帶入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果3批樣品中齊墩果酸的含量分別為0.91mg／g，0.92mg／g，0.94 mg／g。

討 論 糖尿病是一種多病因的代謝疾病，以慢性高血糖為特征，伴隨因胰島素分泌及／或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂，可引起嚴(yán)重的并發(fā)癥。目前，關(guān)于治療糖尿病制劑的報(bào)道較多［1］，在對(duì)太白楤木進(jìn)行生藥學(xué)及化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)，太白楤木中主要含有三萜皂甙及揮發(fā)油等成分［2］，甙元齊墩果酸含量較高，且具保肝、降血脂及降血糖活性［3］。楤木皂苷膠囊是經(jīng)多年的臨床研究并不斷改進(jìn)的院內(nèi)制劑，主要成分為太白楤木提取物，但由于沒(méi)有已上市的標(biāo)準(zhǔn)品，所以楤木皂苷膠囊的質(zhì)量控制難以實(shí)現(xiàn)。

我們發(fā)現(xiàn)，楤木提取物中的皂甙可經(jīng)稀硫酸水解為齊墩果酸，經(jīng)過(guò)不斷摸索，我們建立了穩(wěn)定的制樣方法。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，70℃下水浴回流4h得到的樣品中齊墩果酸含量較高，該制樣方法不僅操作簡(jiǎn)單而且可將樣品最大程度裂解為齊墩果酸。在該制樣方法的基礎(chǔ)之上，樣品中的齊墩果酸含量相對(duì)較高，從而解決了楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量較低的問(wèn)題，這就使采用高效液相色譜法測(cè)定楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量變?yōu)榭赡?。同時(shí)我們堅(jiān)持流動(dòng)相最簡(jiǎn)單的原則基礎(chǔ)之上用磷酸調(diào)節(jié)PH值使峰形得到了有效矯正。

［1］龔翠芬，喬小利，劉小賓，等.消癥通痹膠囊與顆粒治療糖尿病下肢血管病變療效觀察［J］.陜西中醫(yī)，2011，4：427－428.

［2］湯海峰，易楊華，王忠壯，等.太白楤木根皮中三萜皂甙成分研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1996，31（7）：517.

［3］王忠壯，蘇中武，胡晉紅，等.太白楤木對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠血糖及血脂的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，1996，21（10）：628.