紀(jì)軍建， 張小風(fēng)， 韓秀英， 趙建江， 馬志強(qiáng)， 王文橋＊

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所／河北省有害生物綜合治理工程研究中心，保定 071000；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，保定 071001）

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.ex Fr.）引起的番茄灰霉病是番茄的重要病害之一，在世界范圍內(nèi)均有相關(guān)報(bào)道［1］。該病菌的寄主多達(dá)230余種，除侵染番茄的果實(shí)外，還可侵染番茄的莖、葉、花，造成嚴(yán)重減產(chǎn)，甚至絕收［2］。生產(chǎn)上以化學(xué)防治為主，王漢榮等［3］報(bào)道，50%腐霉利、50%異菌脲、50%乙霉·多菌靈和10%苯醚甲環(huán)唑在田間施藥3次后，防 治 效 果 分 別 達(dá) 到 83.10% ～85.05%、87.99%、88.15%和90.38%。張傳清等［4］報(bào)道，番茄灰霉病菌對(duì)啶酰菌胺的敏感基線為1.07μg／mL。王立君等［5］報(bào)道，50%啶酰菌胺、40%嘧霉胺和25%吡唑醚菌酯對(duì)番茄灰霉病的田間防效分別為86.36%、82.30% 和 74.14%。李 生 英 等［6］報(bào) 道，10%腐霉利煙劑對(duì)保護(hù)地番茄灰霉病的防效達(dá)80.11%～86.73%。祁之秋等［7］報(bào)道，室內(nèi)測(cè)定醚菌酯對(duì)番茄灰霉病的保護(hù)和治療作用分別達(dá)到92.3%和83.3%。葛晨輝等［8］報(bào)道，50%乙霉·多菌靈1 000倍液對(duì)溫室番茄灰霉病的防效可達(dá)95.98%。Sobolewski等［9］報(bào)道，BSA516、Zato45WG、Uni－kat75WG、Verita71.9WG、Tanos50WG和Biosept33SL對(duì)防治番茄灰霉病有明顯效果。Tadesse等［10］報(bào)道，苯氟磺胺（dichlofluanid）對(duì)番茄灰霉病的防效可達(dá)92%以上。Nagata等［11］報(bào)道，對(duì)苯胺基嘧啶類殺菌劑的苯胺環(huán)進(jìn)行替代修飾以后，發(fā)現(xiàn)2－苯胺－4－甲基－6－（1－丙炔）嘧啶（KIF－3535）對(duì)番茄灰霉病菌有很高的活性。但國(guó)內(nèi)外報(bào)道灰霉病菌對(duì)常用化學(xué)殺菌劑已經(jīng)產(chǎn)生不同程度的抗藥性［12－14］。相關(guān)研究報(bào)道，苯基吡咯類殺菌劑咯菌腈對(duì)灰霉病有良好的防治效果［15］。劉穎超等［16］報(bào)道，2.5%咯菌腈種子處理懸浮劑對(duì)草莓灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的EC50值為0.0472mg／L，田間防效為83.7%。George等［17］2010年在希臘塞薩洛尼基測(cè)定了76株灰葡萄孢單孢菌株對(duì)咯菌腈的敏感性，未發(fā)現(xiàn)對(duì)咯菌腈敏感性下降的菌株；Zhao等［18］2010年測(cè)定了咯菌腈對(duì)采自華盛頓蘋(píng)果上的83株灰葡萄孢EC50的平均值為0.005mg／L，對(duì)從梨上分離到的40株灰葡萄孢的EC50的平均值為0.005mg／L。

本文測(cè)定了番茄灰霉病菌對(duì)不同類型殺菌劑的敏感性，及分別采集于山東壽光和河北定州、徐水等地的106株番茄灰霉菌株對(duì)咯菌腈的敏感性，為更好地防治番茄灰霉病進(jìn)行藥劑選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，加去離子水定容至1L）。

1.1.2 供試藥劑

95%咯菌腈原藥，無(wú)錫凱姆麥高化學(xué)品有限公司提供；98%氟啶胺原藥，山東綠霸化工股份有限公司提供；98%腐霉利原藥，連云港優(yōu)士化學(xué)品有限公司提供；98.2%嘧霉胺原藥，河南春光農(nóng)化有限公司提供；99%吡唑醚菌酯原藥，河北普田農(nóng)業(yè)科技有限公司提供；99%啶酰菌胺原藥，巴斯夫（中國(guó)）有限公司提供；98%多菌靈原藥，山東華陽(yáng)化工有限公司提供；95%乙霉威原藥，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司提供。

1.1.3 供試菌種

供試菌株分別于2010、2011年采集于山東壽光稻田鎮(zhèn)張家營(yíng)（以s＋序號(hào)命名，共30株）、河北定州楊家莊鄉(xiāng)辛興村（以d＋序號(hào)命名，共32株）、河北徐水高林村鎮(zhèn)白塔鋪村（以x＋序號(hào)命名，共44株）溫室內(nèi)番茄病葉病果上，在室內(nèi)PDA培養(yǎng)基上分離純化后，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 番茄灰霉病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性測(cè)定

菌絲生長(zhǎng)速率法［19］。在無(wú)菌條件下，用直徑為5mm的打孔器在預(yù)培養(yǎng)3d的番茄灰霉病菌菌落邊緣打菌餅，接種到含系列濃度的試驗(yàn)藥劑及無(wú)藥的PDA平板上，每個(gè)處理重復(fù)3次，于25℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，3d后采用十字交叉法測(cè)量各處理菌落直徑（mm）。并用DPS求出供試藥劑抑制菌絲生長(zhǎng)的有效抑制中濃度（EC50值）及相關(guān)系數(shù)（R）。

1.2.2 番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法（同1.2.1）。打取菌餅后，分別接種到含咯菌腈0.001、0.01、0.1、1、10μg／mL及無(wú)藥的PDA平板上，25℃恒溫黑暗培養(yǎng)，3d后采用十字交叉法測(cè)量各處理菌落直徑（mm），并用DPS求出各菌株對(duì)咯菌腈的EC50值。

2 結(jié)果與分析

2.1 番茄灰霉病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性

試驗(yàn)結(jié)果（如表1）顯示，山東壽光、河北徐水等地的番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈和氟啶胺均表現(xiàn)為高度敏感，其EC50值分別為0.004 0、0.010 2μg／mL和0.026 8、0.026 9μg／mL。山東壽光的番茄灰霉病菌對(duì)其他不同類型殺菌劑的敏感性由高到低依次為：啶酰菌胺、腐霉利、嘧霉胺、吡唑醚菌酯、多菌靈、乙霉威，河北徐水的番茄灰霉病菌對(duì)其他不同類型殺菌劑的敏感性由高到低依次為：腐霉利、吡唑醚菌酯、啶酰菌胺、嘧霉胺、多菌靈、乙霉威。

2.2 番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性

經(jīng)菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)得山東壽光和河北定州、徐水等地的106個(gè)番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的EC50值分布在0.003 9～0.044 9μg／mL之間（如圖1），顯示這106個(gè)菌株對(duì)咯菌腈高度敏感，無(wú)抗性菌株。其中66.04%的菌株EC50值分布在0.005～0.015μg／mL之間，31.13%的菌株EC50值分布在0.015～0.040μg／mL之間，只有1株的EC50值為0.044 9μg／mL。圖1表明，絕大部分的番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的EC50值分布在0.005～0.015μg／mL之間，106個(gè)菌株對(duì)咯菌腈的平均EC50值為（0.014 2±0.008 1）μg／mL。

表1 番茄灰霉病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性

圖1 106個(gè)不同番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的敏感性

3 討論

通過(guò)室內(nèi)菌絲生長(zhǎng)速率法檢測(cè)了山東壽光和河北徐水兩地的相對(duì)敏感番茄灰霉病菌對(duì)8種不同殺菌劑的敏感性，結(jié)果顯示，對(duì)苯基吡咯類殺菌劑咯菌腈表現(xiàn)最為敏感；對(duì)吡啶胺類殺菌劑氟啶胺也表現(xiàn)出較高的敏感性，但目前還沒(méi)有登記用來(lái)防治灰霉病，2009年徐生軍等報(bào)道，馬鈴薯晚疫病菌對(duì)氟啶胺的平均EC50值為（0.478 1±0.016 3）μg／mL［20］；而兩地的番茄灰霉病菌菌株對(duì)多菌靈表現(xiàn)出很低的敏感性，Bollen和Scholten首次在室內(nèi)仙客來(lái)上發(fā)現(xiàn)抗苯菌靈的灰霉病菌［21］。周明國(guó)、葉鐘音等在草莓上首先檢測(cè)到抗多菌靈的灰霉病菌［22］。壽光番茄灰霉病菌對(duì)腐霉利的EC50值為8.194 1μg／mL大于保定的2.107 5μg／mL，而韓巨才等［23］報(bào)道，檢測(cè)到山西的抗性菌株對(duì)腐霉利的平均EC50值為2.792 1μg／mL。兩地對(duì)嘧霉胺的敏感性相差不大，值得注意的是試驗(yàn)測(cè)得對(duì)與苯并咪唑類殺菌劑有負(fù)交互抗性的N－苯氨基甲酸酯類殺菌劑乙霉威的敏感性也大大降低，其EC50值遠(yuǎn)大于200μg／mL。張永杰等報(bào)道，檢測(cè)山西對(duì)乙霉威的抗性菌株的平均EC50值為1.556 3μg／mL［24］。2010年趙建江等報(bào)道，測(cè)得河北徐水和山東壽光的番茄灰霉病菌對(duì)煙酰胺類殺菌劑啶酰菌胺的EC50值分別為4.278 2μg／mL和1.462 9μg／mL［25］，本試驗(yàn)結(jié)果與其報(bào)道的基本一致。本試驗(yàn)顯示QoI類殺菌劑吡唑醚菌酯對(duì)河北保定地區(qū)番茄灰霉病菌的菌絲生長(zhǎng)有較好的抑制作用，但對(duì)山東壽光地區(qū)的番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用較差，原因可能與該殺菌劑在山東壽光長(zhǎng)期大量或長(zhǎng)期單一使用有關(guān)。

本試驗(yàn)檢測(cè)了2010、2011年山東壽光和河北定州、徐水等地的番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性，結(jié)果顯示所有的番茄灰霉病菌均對(duì)咯菌腈高度敏感，最小 EC50值為0.003 9μg／mL，最大 EC50值為0.044 9μg／mL。Korolev等報(bào)道采自8種寄主作物的712株灰霉病菌對(duì)咯菌腈和環(huán)酰菌胺的抗性菌株頻率為0.2%［26］。綜上所述，咯菌腈在防治番茄灰霉病時(shí)可作為首選藥劑，啶酰菌胺可作為候選藥劑。但為了避免或延緩抗藥性的產(chǎn)生，應(yīng)將咯菌腈與不同作用機(jī)理的藥劑交替或混用。

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