HPLC法測定風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量

魏桂蓉

風(fēng)寒感冒顆粒由麻黃、葛根、紫蘇葉、防風(fēng)等十一味藥組成［1］，具有解表發(fā)汗，疏散風(fēng)寒等功效。用于風(fēng)寒感冒，發(fā)熱，頭痛，惡寒，無汗，咳嗽，鼻塞，流清涕等。5-0-甲基維斯阿米醇苷是防風(fēng)中有效成分之一，具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛，止痙等作用［2］。本品現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中尚無含量測定項目，為有效控制風(fēng)寒感冒顆粒內(nèi)在質(zhì)量，筆者選用5-0-甲基維斯阿米醇苷作為含量測定指標(biāo)并加以控制，建立風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷HPLC含量測定方法，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確，可靠，重復(fù)性好，可用于本品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-20AT系列高效液相色譜儀(日本島津)，METTLER XS-105電子天平。

1.2 試藥 5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號111523-201007);風(fēng)寒感冒顆粒(通化長青藥業(yè)股份有限公司提供，規(guī)格:每袋8克，批號107001、102110、090931);甲醇為色譜純，自制純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:phenomenex Luna-C18柱(200 mm×4.60 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(35 ∶65);流速:1.00 ml/min;檢測波長:254 nm; 柱溫:28℃;進(jìn)樣量:10.00 μl。

2.2 對照品溶液制備 取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品7.01 mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得儲備液(140.2 μg/ml)。精密量取儲備液5 ml，置50 ml棕色量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得(每1 ml含5-0-甲基維斯阿米醇苷 14.02 μg)。

2.3 供試品溶液制備 精密稱取本品3.0 g，加甲醇25.00 ml，稱重，超聲1 h，用甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液制備 按處方配比(缺防風(fēng)藥材)照工藝制備成模擬顆粒，按“2.3”項下的方法制成陰性對照溶液。

2.5 干擾試驗 照上述色譜條件，將對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10.00μl，分別注入液相色譜儀，色譜圖見圖1。供試品色譜圖中，在與對照品色譜圖相應(yīng)的保留時間處，有相同的色譜峰，而陰性對照溶液無干擾峰。

圖1 風(fēng)寒感冒顆粒中5-0甲基維斯阿米醇苷HPLC圖

2.6 線性關(guān)系考察 將上述5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液(14.02 μg/ml)，分別精密進(jìn)樣 2、6、10、14、18、22 μl，按上述色譜條件測定，以平均峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得方程:Y=2.21×106X-1.09×104，r=0.9997，線性范圍為0.02804 ～0.3084 μg。

2.7 精密度試驗 取對照品溶液(14.02μg/ml)連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10.00 μl，記錄峰面積，RSD為0.82%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液(批號107001)，分別于0、4、8、12、16、24 h 進(jìn)樣 10.00μl，測得樣品中 5-0-甲基維斯阿米醇苷峰面積的RSD為1.03%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗 精密取同一批號樣品(批號為107001)6份，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，依法測定，結(jié)果5-0-甲基維斯阿米醇苷含量的RSD為0.95%，表明本法重復(fù)性較好。

2.10 加樣回收率試驗 量取已知5-0-甲基維斯阿米醇苷含量為0.1259 mg/g的樣品9份(批號為107001)，每份1.5 g，3份一組，每組分別按對照品溶液濃度的80%、100%、120%的量加入對照品，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.11 樣品含量測定 取3批樣品，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10.00 μl，照外標(biāo)法(峰面積)計算5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量，結(jié)果:批號107001，含量0.1259 mg/g、批號 102110，含量 0.1282 mg/g、批號 090931，含量0.1107 mg/g。

3 討論

3.1 本品為含糖的顆粒劑，曾采用了①正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，用甲醇溶解定容;②甲醇提取，蒸干，用水溶解后，再用正丁醇萃?。?］結(jié)果表明兩種方法提取率偏低，回收率偏低，最后用甲醇超聲1 h可以提取完全，回收率好。

3.2 本文用甲醇提取，雜質(zhì)比較多，曾采用流動相甲醇-0.1%冰醋酸，梯度洗脫［4］，基線不平穩(wěn)，影響積分準(zhǔn)確性，且用時太長;又考察了甲醇-水(44∶56)［3］、甲醇-水(40∶60)［2］，分離效果均不理想。最后用甲醇-水(35∶65)為流動相，分離效果好，且峰型好，理論板數(shù)高。

3.3 從線性，回收率，重復(fù)性，溶液穩(wěn)定性等實(shí)驗結(jié)果可以看出，用HPLC法測定風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量，準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好，且操作簡便快速。

［1］ 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑地一冊，45.

［2］ 中國藥典委員會.中國藥典.2010年版.一部，2010:140.

［3］ 李玲.高效液相色譜法測定感冒清熱顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量.中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(4):43-44.

［4］ 江麗，鐘國慶，龔春燕，等.HPLC法測定復(fù)方防風(fēng)膠囊中兩成分的含量.中國藥師，2010，(8):1128-1130.