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      PPARγ激動(dòng)劑對(duì)急性壞死性胰腺炎大鼠p38MAPK活化的影響

      2012-11-07 03:22:07李清華徐萍王靜姜景平陳令全
      中華胰腺病雜志 2012年3期
      關(guān)鍵詞:腺泡吡格激動(dòng)劑

      李清華 徐萍 王靜 姜景平 陳令全

      PPARγ激動(dòng)劑對(duì)急性壞死性胰腺炎大鼠p38MAPK活化的影響

      李清華 徐萍 王靜 姜景平 陳令全

      p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在炎癥反應(yīng)中通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥因子表達(dá)起重要作用[1]。我們前期研究發(fā)現(xiàn),過(guò)氧化酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorsγ,PPARγ)激動(dòng)劑吡格列酮對(duì)急性壞死性胰腺炎(ANP)大鼠血清促炎細(xì)胞因子有抑制作用。本研究探討p38 MAPK在ANP發(fā)生、發(fā)展中的作用及吡格列酮對(duì)p38 MAPK的影響,進(jìn)一步了解PPARγ激動(dòng)劑的抗炎機(jī)制。

      一、材料與方法

      1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:54只雄性SD大鼠,清潔級(jí),體重160~200 g,購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。按數(shù)字表法隨機(jī)分成對(duì)照組、ANP組及吡格列酮干預(yù)組(干預(yù)組),每組18只。采用胰管逆行注射50 g/L牛磺膽酸鈉(Sigma公司)1 μl/g體重的方法制備ANP模型。對(duì)照組開(kāi)腹后只翻動(dòng)胰腺并以鈍器輕劃胰腺3次后關(guān)腹。干預(yù)組在術(shù)后立即腹腔內(nèi)注射10% DMSO-吡格列酮溶液50 mg/kg體重。術(shù)后3、6、12 h分批經(jīng)腹主動(dòng)脈放血處死大鼠, 觀察胰腺大體病理改變,并取胰頭部組織,部分用40 g/L中性甲醛固定,部分置液氮保存。

      2.胰腺病理檢查:胰腺大體病理觀察采用Hughes等[2]標(biāo)準(zhǔn),從水腫、出血、脂肪壞死3個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分。福爾馬林固定標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色,光鏡下每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野觀察胰腺組織病理學(xué)變化,并依據(jù)Schmidt等[3]標(biāo)準(zhǔn)從水腫、感染、出血和壞死4個(gè)方面評(píng)分。

      3.磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)檢測(cè):取凍存標(biāo)本100 mg,常規(guī)提取總蛋白,BCA蛋白濃度分析試劑盒測(cè)定蛋白濃度,應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)p-p38MAPK。p-p38MAPK單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgM購(gòu)自Santa cruz公司。用Bandscan圖像分析系統(tǒng)掃描目的條帶積分灰度值表示其相對(duì)表達(dá)量。

      4.生存率實(shí)驗(yàn):16只雄性SD大鼠隨機(jī)分成ANP組和干預(yù)組,造模方法同上。干預(yù)組大鼠術(shù)后每12 h重復(fù)給予吡格列酮 50 mg/kg體重,ANP組給予10% DMSO,觀察兩組大鼠制模后60 h的生存率。

      二、結(jié)果

      1.胰腺病理改變:對(duì)照組大鼠胰腺眼觀呈淡粉紅色,薄片狀,顏色均勻一致,光澤度好;ANP組在注射后沿胰膽管周圍組織立即充血、水腫,并逐漸擴(kuò)展;干預(yù)組大鼠大體改變與ANP組相似,但病變程度較同時(shí)點(diǎn)ANP組輕。胰腺大體病理評(píng)分見(jiàn)表1。干預(yù)組6、12 h時(shí)的胰腺損傷較同時(shí)點(diǎn)ANP組顯著減輕(P值為0.02483、0.04126)。鏡下見(jiàn)對(duì)照組胰腺無(wú)明顯病理改變;ANP組胰腺明顯水腫,小葉間隔增大,間質(zhì)內(nèi)充斥大量淡紅色水腫液,部分腺泡呈孤島狀,并可見(jiàn)大片出血壞死,腺泡小葉結(jié)構(gòu)被破壞,松散、紊亂,胰腺實(shí)質(zhì)及間質(zhì)內(nèi)見(jiàn)大量嗜中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);干預(yù)組鏡下表現(xiàn)與ANP組大體相似,但病變程度較輕(圖1)。胰腺病理組織學(xué)評(píng)分見(jiàn)表1。ANP組和干預(yù)組的胰腺病理評(píng)分均顯著高于對(duì)照組;但干預(yù)組12、24 h時(shí)的病理評(píng)分較同時(shí)點(diǎn)ANP組顯著降低(P=0.00328)。

      表1 3組大鼠胰腺大體及組織學(xué)評(píng)分

      注:與對(duì)照組比較,aP<0.05;與ANP組比較,bP<0.05

      圖1對(duì)照組(a)、ANP組(b)、干預(yù)組(c)大鼠6 h時(shí)的胰腺病理組織學(xué)變化(×200)

      2.胰腺組織p-p38MAPK水平:對(duì)照組胰腺低表達(dá)p-p38MAPK;ANP組p-p38MAPK表達(dá)在造模后3 h即上升到峰值,12 h時(shí)的表達(dá)水平明顯下降,但仍然顯著高于對(duì)照組(P=0.02386);干預(yù)組p-p38MAPK表達(dá)均顯著高于對(duì)照組,但6 h時(shí)的表達(dá)顯著低于ANP組(P=0.04126,表2,圖2)。

      表2 3組大鼠胰腺組織p-p38MAPK的表達(dá)

      注:與對(duì)照組比較,aP<0.05;與ANP組比較,bP<0.05

      圖2 對(duì)照組、ANP組、干預(yù)組大鼠胰腺組織p-p38MAPK的表達(dá)

      3.大鼠生存率:ANP組大鼠造模后12 h死亡3只,24、36、48 h各死亡1只,60 h的生存率為12.5%;干預(yù)組造模后24 h死亡1只,36、48 h各死亡2只,60 h生存率為37.5%,兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.248)。

      討論各種炎癥因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)和損傷刺激都可造成p38MAPK信號(hào)系統(tǒng)的激活,從而調(diào)控下游基因包括TNF-α、IL-6等的表達(dá),并促進(jìn)中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)[4]。p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與維持細(xì)胞的基礎(chǔ)生理狀態(tài),因此,正常胰腺腺泡細(xì)胞有其低表達(dá)[5]。Blinman等[6]研究顯示,p38MAPK在調(diào)節(jié)胰腺腺泡細(xì)胞的細(xì)胞因子和趨化因子產(chǎn)生的信號(hào)通路中占主導(dǎo)地位,在重癥急性胰腺炎發(fā)病早期及疾病進(jìn)展中起重要推動(dòng)作用。Ren等[7]報(bào)道,?;悄懰徕c誘導(dǎo)的ANP大鼠在造模后3 h p38MAPK活性迅速達(dá)到峰值,24 h時(shí)仍明顯高于基礎(chǔ)活性。本結(jié)果顯示,造模后3 h,磷酸化的p38MAPK表達(dá)即達(dá)到峰值,并維持在較高水平,12 h時(shí)仍高于對(duì)照組水平,提示在ANP發(fā)病早期p38MAPK即參與炎癥反應(yīng)。與Ren等的研究結(jié)果一致。

      p38MAPK和NF-κB是調(diào)節(jié)胰腺腺泡細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子的兩條重要信號(hào)通路。Jiang等[8]及Ricote等[9]報(bào)道,PPARγ激動(dòng)劑能通過(guò)抑制NF-κB而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。我們的前期研究也證實(shí)了PPARγ激動(dòng)劑吡格咧酮可通過(guò)抑制NF-κB活化及抑制促炎細(xì)胞因子的表達(dá)而減輕胰腺炎癥[10]。本結(jié)果顯示,給予吡格咧酮可明顯抑制p38MAPK的活化,減輕ANP大鼠的胰腺病理?yè)p傷,明顯提高ANP大鼠生存率,提示PPARγ激動(dòng)劑干預(yù)處理可能是早期控制SAP病情的有效手段。

      [1] Dong C, Davis RJ, Flavell RA. MAP kinases in the immune response. Annu Rev Immunol, 2002, 20:55-72.

      [2] Hughes CB, Grewal HP, Gaber LW, et al. Anti-TNF-alpha therapy improves survival and ameliorates the pathophysiologic saquelae in acute pancreatitis in the rat.Am J Surg, 1996, 171:274-280.

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      [6] Blinman TA, Gukovsky I, Mouria M, et al.Activation of pancreatic acinar cells on isolation from tissue cytokine up regulation via p38 MAP kinase. Am J Physiol Cell Physiol,2000,279:1993-2003.

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      10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.03.022

      201600 上海,上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院松江分院消化內(nèi)科

      徐萍,Email:yfyxp@yahoo.com.cn

      2011-10-12)

      (本文編輯:屠振興)

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