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      IL-17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變患者組織中的表達(dá)及意義

      2012-11-10 08:31:58郝曉玲陶林張文杰
      關(guān)鍵詞:子宮頸癌子宮頸內(nèi)瘤

      郝曉玲,陶林,張文杰,2

      (1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理系/新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子832002;2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院生殖醫(yī)學(xué)中心,武漢430030)

      子宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第三高發(fā)惡性腫瘤,居乳腺癌和大腸癌之后。據(jù)國(guó)際癌癥研究組織(IARC)2008年的數(shù)據(jù)估計(jì),我國(guó)有7.5萬(wàn)子宮頸癌新發(fā)病例,占全球新發(fā)病例的14%;而宮頸癌死亡病例高達(dá)3.3萬(wàn),占全球死亡病例的12%。2011年一項(xiàng)調(diào)查顯示,全球子宮頸癌新發(fā)病例在過(guò)去的30 年 間 (1980-2010)逐 年 上 升,年 增 長(zhǎng) 率 達(dá)0.6%[1];因此,研究和闡明子宮頸癌,尤其是癌前病變的發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)子宮頸癌的預(yù)防和靶向性治療具有重要意義。

      IL-17(Interleukin-17)是一種主要由 Th17細(xì)胞亞群和中性粒細(xì)胞分泌產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子(proinflammatory cytokine)。它可以招募中性粒細(xì)胞,促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子,促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管生成,是參與慢性炎癥和腫瘤發(fā)生的重要炎癥因子[2]。對(duì)人類腫瘤與小鼠的多種惡性腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn),慢性炎癥是腫瘤的主要誘發(fā)因素[3]。

      為了深入研究IL-17與子宮頸癌癌前病變(CIN)的發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)不同CIN病變組織中IL-17的表達(dá)情況,探討其在子宮頸癌癌前病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中潛在的生物學(xué)意義。

      1 材料與方法

      1.1 標(biāo)本來(lái)源與臨床資料

      收集石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科2008年至2011年石蠟包埋宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)90例及子宮頸對(duì)照組織30例,按2009年WHO子宮頸腫瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)(其中CIN1、CIN2、CIN3及子宮頸對(duì)照組織各30例),所有病例均在病理醫(yī)生原始診斷的基礎(chǔ)上進(jìn)行了二次復(fù)查診斷。

      1.2 試劑

      兔抗人IL-17多克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司);DAB顯色試劑盒(Dako公司,ZLI-9019);S-P法試劑盒、抗原修復(fù)液:EDTA緩沖液(0.01mol/L,PH 0.8~0.9)均購(gòu)于北京中杉金橋生物有限公司。

      1.3 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果判讀

      實(shí)驗(yàn)方法:采用免疫組織化學(xué)S-P法。所有載玻片預(yù)先經(jīng)丙酮、APES防脫片膠處理。組織標(biāo)本經(jīng)過(guò)10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,4μm連續(xù)切片。脫蠟水化后,于EDTA緩沖液(0.01mol/L,PH 0.8~0.9)中微波加熱進(jìn)行抗原修復(fù)15 min。其余步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書操作(IL-17抗體稀釋濃度為1∶200)。PBS代替一抗(其余步驟完全一樣)作陰性對(duì)照,由試劑公司提供的照片作陽(yáng)性對(duì)照。

      結(jié)果判斷:IL-17組織切片顯示以胞漿染色為淺黃色至棕色顆粒者為陽(yáng)性,于光學(xué)顯微鏡(400倍)下隨機(jī)選取4個(gè)有代表性的不同視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,得分由陽(yáng)性染色細(xì)胞所占面積和細(xì)胞染色強(qiáng)度兩者計(jì)分乘積來(lái)判斷。染色面積計(jì)分為:陽(yáng)性染色細(xì)胞<5%計(jì)0分;6~25% 計(jì)1分;26~50% 計(jì)2分;51~75% 計(jì)3分;76~100%計(jì)4分。細(xì)胞染色強(qiáng)度:無(wú)著色計(jì)0分;淺黃色計(jì)1分;黃色計(jì)2分;棕黃色計(jì)3分;棕色計(jì)4分。兩項(xiàng)記分相乘0~1分為(-),2~4分為(+),5~8分為(++),9~12分為(+++),13~16分為(++++)。(-)為陰性,(+)為弱陽(yáng)性表達(dá),(++)~(++++)為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)[4]。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

      SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,計(jì)數(shù)資料之間的差異顯著性采用χ2檢驗(yàn)法。

      2 結(jié)果

      IL-17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中的表達(dá)情況見(jiàn)表1。

      表1 IL-17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中的表達(dá)Tab.1 The expression of IL-17 in cervical intraepithelial neoplasias(CINs)

      由表1可知:IL-17主要表達(dá)在子宮頸鱗狀上皮(CIN病變組織)細(xì)胞的細(xì)胞漿,在子宮頸對(duì)照組織、CIN1、CIN2、CIN3中高表達(dá)的(++以及以上)分別 是 1(3.3%),2(6.7%),19(63.3%),27(90.0%),4組間差異顯著(P<0.05),而且隨著CIN病變程度的增加IL-17高表達(dá)的陽(yáng)性率也逐漸增加(表1,圖1)。

      圖1 IL-17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中的表達(dá)(S-P×100)Fig.1 The expression of IL-17 in cervical intraepithelial neoplasias(CINs)(S-P×100)

      3 討論

      IL-17是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種具有強(qiáng)致炎性作用的細(xì)胞因子,其中,CD4+T細(xì)胞亞群中Th17細(xì)胞是IL-17的主要來(lái)源細(xì)胞[5]。但最近研究發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞均可以產(chǎn)生IL-17,如上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等。Steiner等[6]通過(guò)免疫組化和 RT-PCR法研究發(fā)現(xiàn)IL-17在正常前列腺組織中表達(dá)極少,且局限在淋巴細(xì)胞,而在79%的前列腺增生組織及58%的前列腺癌組織中高表達(dá)。說(shuō)明IL-17主要是由前列腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的。

      慢性炎癥例如炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases,IBD)、幽門螺桿菌感染、和乙肝病毒感染均可致腫瘤的發(fā)生,稱為炎癥相關(guān)性腫瘤[7],而在這類腫瘤中都發(fā)現(xiàn)IL-17表達(dá)增高。克羅恩?。–rohn’s disease,CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)作為一類慢性炎癥性腸病,與CD4+T細(xì)胞的過(guò)度激活相關(guān),活化的CD4+T細(xì)胞釋放一系列促炎癥因子,如IL-6、IL-12、IL-23和IL-17,誘導(dǎo)特異性Th17細(xì)胞的分化[8-9]。幽門螺桿菌感染誘導(dǎo)的胃的慢性炎癥是胃癌的主要病因之一,在感染的幽門胃粘膜上可見(jiàn)IL-17的高表達(dá)[10]。這些研究表明,IL-17在炎癥相關(guān)性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。

      目前,已知HPV病毒感染是子宮頸癌的主要病因,從HPV病毒感染到子宮頸上皮內(nèi)瘤變到癌變是一個(gè)慢性炎癥過(guò)程,因此子宮頸癌也是一種與炎癥相關(guān)的腫瘤,應(yīng)該具有與其它病毒感染,如乙肝病毒感染,相同或相似的慢性炎性特征。體外實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí),IL-17在有HPV感染的子宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)比在只有HPV感染的子宮頸上皮細(xì)胞和正常子宮頸上皮細(xì)胞都要高。在子宮頸癌活檢組織中,IL-17的表達(dá)水平也高于子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和正常子宮頸組織[11],最近的一項(xiàng)研究[12]報(bào)告了52例子宮頸癌活檢組織中IL-17的表達(dá)情況,結(jié)果顯示從子宮頸上皮內(nèi)瘤變到子宮頸癌的進(jìn)展過(guò)程中,IL-17的表達(dá)明顯增加。綜上所述,IL-17的過(guò)表達(dá)可能在子宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要的作用。

      本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)了子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織及正常子宮頸對(duì)照組織中IL-17的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,IL-17主要在子宮頸鱗狀上皮(CIN病變組織)細(xì)胞的胞漿表達(dá),在正常子宮頸對(duì)照組織中不表達(dá),而且在CIN病變組織中IL-17高表達(dá)的陽(yáng)性率隨著CIN病變級(jí)別的增高而逐漸增高,提示IL-17可能參與了子宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生及發(fā)展,但本研究不能說(shuō)明IL-17的表達(dá)變化是原發(fā)性還是繼發(fā)于與其有關(guān)的分子的表達(dá)。IL-17在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的現(xiàn)象在其他研究中也有提出:Chang等[13]發(fā) 現(xiàn) IL-17 在 非 小 細(xì) 胞 性 肺 癌 (NSCLC)腫瘤細(xì)胞胞漿中有表達(dá),而在正常組織中沒(méi)有表達(dá),我們推測(cè)病變的腫瘤細(xì)胞可能產(chǎn)生IL-17,也就是說(shuō),IL-17可能參與了宮頸腫瘤的發(fā)生或發(fā)展。但是,由于免疫組化方法的局限性,還需使用其它方法,如mRNA的表達(dá),并擴(kuò)大樣本量對(duì)這一觀察結(jié)果進(jìn)行證實(shí)。

      總之,IL-17作為炎癥相關(guān)性腫瘤微環(huán)境中的重要因子,可能與子宮頸癌癌前病變的發(fā)生或發(fā)展有關(guān)。IL-17與子宮頸癌及其癌前病變病情進(jìn)展和患者預(yù)后的關(guān)系,以及同其他細(xì)胞因子的相互作用有待進(jìn)一步研究。對(duì)IL-17的進(jìn)一步研究有可能使IL-17成為評(píng)價(jià)子宮頸癌及其癌前病變病情和治療療效的一個(gè)新的免疫學(xué)指標(biāo)。相關(guān)的臨床應(yīng)用及標(biāo)準(zhǔn)方案都尚未見(jiàn)明確報(bào)道,因此,深入研究IL-17家族及其相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在CIN病變中的作用很有前途,可能為闡明子宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生和發(fā)展提供分子機(jī)制,也可能為靶向性生物治療開辟新的思路。

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