楊平，李潤(rùn)國(guó)，孟憲軍

（1.沈陽師范大學(xué)工程技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽 110034；2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧 沈陽 110161）

衰老作為一種隨年齡增加身體功能減退的不可逆轉(zhuǎn)生理現(xiàn)象，其導(dǎo)致的記憶損害嚴(yán)重著影響老年人的生活質(zhì)量，老年性記憶損害的防治已成為十分緊迫的社會(huì)問題,目前尚無特異性治療方法。刺五加含有多種的天然活性成分，具有益氣健脾，補(bǔ)腎安神，延緩老化，補(bǔ)中益精的功能[1]，無毒副作用，自古就備受人們青睞。衰老的自由基學(xué)說認(rèn)為，自由基和脂質(zhì)過氧化物引起的細(xì)胞衰老是導(dǎo)致衰老的重要原因，提高抗氧化酶的活性，降低自由基代謝產(chǎn)物的生成，是延緩衰老的重要途徑。本研究以D-gal誘導(dǎo)建立衰老大鼠模型，觀察刺五加苷對(duì)衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，為對(duì)促進(jìn)刺五加延緩衰老功能食品的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

SD大鼠40只清潔級(jí)，體重200 g～300 g，雌雄各半，飲用清潔水，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，由中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；刺五加苷：購(gòu)于湖南九匯現(xiàn)代中藥有限公司；D-gal：購(gòu)于 sigma公司。

1.2 儀器

DS-671型天平：上海寺岡電子有限公司；640型紫外分光光度儀：Beckman；TGL-16G型高速臺(tái)式離心機(jī)：上海醫(yī)學(xué)儀器廠；HWC-52型恒溫水浴箱：上海天平儀器廠；MA型電子天平：上海第二天平儀器廠；XW-90型振蕩混合器：上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；Morris水迷宮，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制的電腦自動(dòng)攝象裝備系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 造模的建立[2]

腹腔注射0.8%的D-gal生理鹽水100 mg/（kg·d），連續(xù)給藥56 d。開始注射后2周后，將大鼠隨機(jī)分為4組，每日按照10 mL/kg灌胃。（1）對(duì)照組：注射生理鹽水，生理鹽水灌胃；（2）模型組：注射D-gal，生理鹽水灌胃；（3）低劑量組：注射D-gal，3.6 g/（kg·d）刺五加苷灌胃；（4）高劑量組：注射D-gal，14.4 g/（kg·d）刺五加苷灌胃。末次灌胃給藥24 h后，用20%烏拉坦麻醉，迅速斷頭后，取大腦皮層，冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 定位航行與空間搜索實(shí)驗(yàn)

采用Morris水迷宮法。每只大鼠每天測(cè)試1次隱匿平臺(tái)潛伏期數(shù)據(jù)，連續(xù)測(cè)試5 d。最后一次定位航行實(shí)驗(yàn)后，移去安全平臺(tái)，記錄60 s內(nèi)大鼠穿越原平臺(tái)所在位置的次數(shù)和在原安全平臺(tái)所在象限探索時(shí)間占總時(shí)間的百分比。

1.3.3 腦組織SOD、GSH-Px活性及MDA含量的測(cè)定

取大鼠大腦皮層冰浴研磨后，制成10%組織勻漿液，3500 r/min離心10 min，取上清按南京建成生物公司說明書操作，分別測(cè)定大鼠腦組織中SOD、GSH-Px和MDA含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，方差分析Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)組間比較進(jìn)行重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)，其它數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，P＜0.05為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 刺五加苷對(duì)大鼠定位航行與空間搜索的影響

刺五加苷對(duì)大鼠定位航行與空間搜索的影響，見圖1。

圖1 刺五加苷對(duì)大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期的影響Fig.1 Effects of acanthoside on escape latency of rats navigation test

由圖1可知，與對(duì)照組比較，衰老模型組大鼠定位航行潛伏期明顯延長(zhǎng)（P＜0.01），與模型組比較高濃度刺五加苷組潛伏期縮短，各組大鼠逃避潛伏期隨著時(shí)間的增加而變化趨勢(shì)不同（P＜0.05），模型組定位航行潛伏期在5 d內(nèi)變化比較平緩，對(duì)照組和高濃度刺五加苷組潛伏期隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加而顯著縮短。

刺五加苷對(duì)大鼠原平臺(tái)象限游泳時(shí)間及跨平臺(tái)次數(shù)的影響，見表1。

表1 刺五加苷對(duì)大鼠原平臺(tái)象限游泳時(shí)間及跨平臺(tái)次數(shù)的影響（）Table 1 Efects of the former platform quadrant swim time and the number of cross-platform of rats（）

表1 刺五加苷對(duì)大鼠原平臺(tái)象限游泳時(shí)間及跨平臺(tái)次數(shù)的影響（）Table 1 Efects of the former platform quadrant swim time and the number of cross-platform of rats（）

注：同模型組比較 **P＜0.01，*P＜0.05，與正常組比 #P<0.05，##P<0.01。

由表1可知，與對(duì)照組比較,模型組原平臺(tái)象限游泳時(shí)間與總時(shí)間之比降低、跨平臺(tái)次數(shù)非常顯著減少（P＜0.01）；與模型組比較，高濃度刺五加苷組原平臺(tái)象限游泳時(shí)間與總時(shí)間之比升高、跨平臺(tái)次數(shù)增加非常顯著（P＜0.01），低濃度組原平臺(tái)象限游泳時(shí)間與總時(shí)間之比升高顯著（P＜0.05），但是跨平臺(tái)次數(shù)增加不顯著（P＞0.05）。

2.2 刺五加苷對(duì)大鼠腦組織SOD、MDA、GSH-Px的影響

刺五加苷對(duì)大鼠腦組織SOD、MDA、GSH-Px的影響，見表2。

表2 刺五加苷對(duì)衰老大鼠腦組織SOD、MDA、GSH-Px的影響（）Table 2 Efects of acanthoside on brain tissue SOD、MDA、GSH-Px of rats（）

表2 刺五加苷對(duì)衰老大鼠腦組織SOD、MDA、GSH-Px的影響（）Table 2 Efects of acanthoside on brain tissue SOD、MDA、GSH-Px of rats（）

注：同模型組比較 **P＜0.01，*P＜0.05，與正常組比 #P<0.05，##P<0.01。

由表2可知，與對(duì)照組相比，模型組大鼠腦組織MDA含量和SOD、GSH－Px活性存在非常顯著變化（P＜0.01）；與模型組相比，高、低濃度刺五加苷組MDA含量和SOD、GSH－Px活性都存在非常顯著變化（P＜0.01）。

3 討論與結(jié)論

認(rèn)知功能是思維、記憶、學(xué)習(xí)、想象和推理等有關(guān)的信息處理能力，學(xué)習(xí)記憶能力作為認(rèn)知功能的一部分是人類正常生存的必需能力和智能發(fā)展和維持的基礎(chǔ)，人類衰老最主要的表現(xiàn)就是認(rèn)知障礙、記憶能力衰退。與人類相類似，老年嚙齒動(dòng)物也發(fā)生年齡相關(guān)性的學(xué)習(xí)和記憶能力降低，Morris水迷宮作為目前評(píng)價(jià)嚙齒動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶能力的最佳方法，在嚙齒動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的研究中具有廣泛應(yīng)用[3]。本實(shí)驗(yàn)Morris水迷宮測(cè)試過程中，模型組大鼠定位航行潛伏期延長(zhǎng)，學(xué)習(xí)與記憶能力與對(duì)照組相比明顯下降，水迷宮實(shí)驗(yàn)成績(jī)明顯處于劣勢(shì)，表明腦衰老模型大鼠在記憶過程，執(zhí)行功能和認(rèn)識(shí)處理速度等方面都有相當(dāng)程度上發(fā)生退化。給予高濃度刺五加苷灌胃后，大鼠潛伏期隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加而顯著縮短，表明刺五加苷能夠改善衰老大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。

伴隨老化而發(fā)生的氧化損傷蓄積是腦老化的生物學(xué)基礎(chǔ)，氧化損傷與老化過程中腦功能(特別是學(xué)習(xí)記憶能力)的逐漸惡化密切相關(guān)[4]。氧自由基具有毒性，腦對(duì)自由基損傷高度敏感，在腦組織老化過程中過量產(chǎn)生的自由基可攻擊細(xì)胞組分，從而導(dǎo)致神經(jīng)元損傷和功能障礙[5]，同時(shí)腦組織的抗氧化功能降低[6]，SOD和GSH-Px活性都明顯降低，細(xì)胞自由基產(chǎn)生和清除的不平衡導(dǎo)致腦組織的氧化損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，刺五加苷可以增強(qiáng)衰老大鼠腦組織中SOD、GSH-Px活性，通過增強(qiáng)抗氧化酶的活性發(fā)揮抗氧化作用，降低氧化對(duì)腦的損傷，改善衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用。此外，自然界食用植物中，含有大量容易被自由基奪走的電子，它們失去電子會(huì)成為對(duì)人體沒有傷害的穩(wěn)定物質(zhì)。因此，利用外源性抗氧化劑作為替身，阻斷自由基的攻擊，減少機(jī)體傷害，也可能是刺五加苷改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，延緩腦衰老的機(jī)制之一。

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