不同MH瓊脂對于替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌藥敏結(jié)果的影響

崔俊昌，宋秀杰（解放軍總醫(yī)院呼吸科，北京 100853）

多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDR-AB）是院內(nèi)獲得性感染的重要病原菌，雖然這些菌株對目前臨床常用的所有抗生素幾乎都表現(xiàn)為耐藥，但對替加環(huán)素仍非常敏感[1-2]。目前美國臨床實驗室標準化研究所（CLSI）還沒有關于替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的標準藥敏測定方法和藥敏判讀標準。E-test法、紙片擴散法和微量肉湯稀釋法的結(jié)果差別較大[3-4]。E-test法、紙片擴散法藥敏研究結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的MH瓊脂（MHA）對結(jié)果存在明顯的影響[5-6]。不同廠家的MHA對瓊脂稀釋法藥敏結(jié)果是否有影響，目前尚不清楚。本研究觀察了不同廠家生產(chǎn)的MHA對于替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌瓊脂稀釋法藥敏結(jié)果的影響，為瓊脂稀釋法藥敏測定中MHA的選擇和結(jié)果的解釋提供參考。

1 材料與方法

1.1 細菌

金黃色葡萄球菌ATCC29213和大腸埃希菌ATCC25922，購自中國藥品生物制品檢定所。50株鮑曼不動桿菌臨床分離菌，來自解放軍總醫(yī)院、北京協(xié)和醫(yī)院和北京醫(yī)院臨床標本。所有菌株均經(jīng)VITEK微生物分析儀鑒定。

1.2 培養(yǎng)基

Mueller-Hinton（MH）瓊脂分別為美國BD公司的Difco MHA、英國Oxoid公司的Oxoid MHA、中國北京三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn)的美壇MHA和北京奧博星生物技術責任有限公司的奧博星MHA。

1.3 抗菌藥物

替加環(huán)素，購自輝瑞制藥有限公司。

1.4 最低抑菌濃度（MIC）測定

采用瓊脂稀釋法，分別取不同廠家生產(chǎn)的MHA，加入雙蒸水，高溫高壓滅菌后，新鮮瓊脂分別配制不同替加環(huán)素濃度的平皿，瓊脂平皿配好后，12 h內(nèi)用于藥敏測定。菌液的配制及測定方法按CLSI推薦的方法進行，以ATCC25922和ATCC29213為質(zhì)控菌。結(jié)果判讀標準參照美國FDA制定的替加環(huán)素對腸桿菌的判讀標準：≤2 μg·mL-1為敏感，4 μg·mL-1為中介，≥ 8 μg·mL-1為耐藥。

1.5 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)MIC結(jié)果，計算MIC90、敏感率、中介率和耐藥率。

2 結(jié)果

2.1 替加環(huán)素對質(zhì)控菌的MIC值

應用不同的M H A時，替加環(huán)素對質(zhì)控菌ATCC25922和ATCC29213的MIC值存在明顯差別。具體結(jié)果見表1。

表1 采用不同MH瓊脂時替加環(huán)素對質(zhì)控菌的MIC值. μg·mL-1Tab 1 MIC of tigecycline for quality control strains with different MHAs. μg·mL-1

2.2 替加環(huán)素對臨床分離鮑曼不動桿菌菌株的MIC值

應用不同的MHA進行瓊脂稀釋法藥敏測定，替加環(huán)素對50株鮑曼不動桿菌的MIC值分布及敏感率有著明顯的差別。具體見表2和表3。采用Difco MHA、Oxoid MHA、美壇MHA和奧博星MHA時，替加環(huán)素的MIC90分別為2、4、4、16 μg·mL-1。替加環(huán)素的敏感率分別為100%、6% 、6%和0。

表2 應用不同MH瓊脂時替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的MIC值分布Tab 2 Distribution of MICs of tigecycline for Acinetobacter baumannii with different MHAs

表3 應用不同MH瓊脂時替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌藥敏結(jié)果的影響Tab 3 Effect of different MHAs on tigecycline susceptibility for Acinetobacter baumannii

3 討論

TEST（tigecycline evaluation and surveillance trial）結(jié)果表明，采用微量肉湯稀釋法，替加環(huán)素耐藥不動桿菌的比例為2.4%[6]。Navon-Venezial等[7]報道在以色列替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的耐藥率高達66%，這引起了人們關于不同試驗方法學和所采用的瓊脂或肉湯對替加環(huán)素藥敏結(jié)果影響的研究。目前認為，采用不同廠家生產(chǎn)的MHA，對E-test法和紙片擴散法的結(jié)果有很大影響，并發(fā)現(xiàn)采用Oxoid MHA比應用Difco MHA時敏感率明顯降低[8-9]。而不同廠家的MHA對于瓊脂稀釋法的結(jié)果是否有影響，目前尚未見明確報道。但從孫謙等[10]報道的結(jié)果看，多重耐藥鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的耐藥率高達78.9%，這一結(jié)果明顯高于國內(nèi)外其他文獻的報道；雖然作者按CLSI的操作規(guī)程進行瓊脂稀釋法藥敏試驗，但應用的是Oxoid MHA，這一結(jié)果也提示，應用不同廠家的MHA可能對瓊脂稀釋法藥敏結(jié)果有明顯的影響。

CLSI中替加環(huán)素對質(zhì)控菌ATCC29213的質(zhì)控范圍為0.03 ～ 0.25 μg·mL-1，ATCC25922的質(zhì)控范圍為0.03 ～ 0.25 μg·mL-1。從本文結(jié)果可以看出，應用奧博星MHA時，結(jié)果明顯超出其質(zhì)控范圍。應用Difco、Oxoid和美壇MHA時，雖然MIC值均在質(zhì)控范圍內(nèi)，但仍有一定差別。

從對臨床菌株測定的結(jié)果看，應用不同的MHA進行瓊脂稀釋法藥敏測定時，MIC分布存在明顯的差別。應用Difco MHA時，MIC值主要集中在1 μg·mL-1；應用Oxoid和美壇的MHA時MIC值主要集中在4 μg·mL-1；而應用奧博星MHA時，MIC值主要集中在16 μg·mL-1。

應用不同的MHA進行瓊脂稀釋法藥敏測定時，替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的敏感率有著明顯的差別。應用Difco MHA，替加環(huán)素的敏感率為100%；而應用Oxoid、美壇和奧博星MHA時敏感率明顯降低。產(chǎn)生這一差別的原因可能與不同廠家生產(chǎn)的MHA中鎂離子濃度不同有關[8]。

采用瓊脂稀釋法測定替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的MIC時，選用不同廠家生產(chǎn)的MHA對結(jié)果會有明顯的影響。因此，在解釋藥敏試驗結(jié)果時，應注意所選用的MHA。尤其是對于應用Difco MHA時MIC≥1 μg·mL-1的菌株，采用其他廠家的MHA時，其藥敏結(jié)果可能會判斷為中介或耐藥，這樣就會影響或誤導臨床醫(yī)生對藥物的選擇。