用動(dòng)物試驗(yàn)確診1例綿羊魏氏梭菌病的報(bào)告

馬占榮

青海省門源縣陰田鄉(xiāng)獸醫(yī)站，青海門源810300

魏氏梭菌為厭氧、革蘭氏陽性、兩端鈍圓的大桿菌，有芽孢，無鞭毛。本菌能產(chǎn)生多種外毒素，根據(jù)其毒素性質(zhì)不同，分為 A、B、C、D、E等型；菌型不同，其所引起的疾病亦不同，僅從臨床癥狀上不易確診。特別是羊腸毒血癥和羊猝狙，發(fā)病急、病程短、死亡快，以致其臨床癥狀不易被觀察到。

2011年1月，陰田鄉(xiāng)一牧戶飼養(yǎng)的綿羊突然發(fā)病，共存欄284只，3d內(nèi)連續(xù)死亡11只，發(fā)病羊只中以當(dāng)年羔羊和成年母羊居多。部分患羊當(dāng)晚不見任何癥狀，次日死于圈中；部分患羊在放牧?xí)r發(fā)病，羊只突然停草、出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、呼吸困難、心跳加快、體溫不高、口吐白沫、結(jié)膜蒼白、全身肌肉震顫，很快進(jìn)入昏迷狀態(tài)，1～8h內(nèi)死亡。對(duì)癥治療療效甚微，初步診斷為魏氏梭菌感染，為進(jìn)一步確診，進(jìn)行了動(dòng)物試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）供試動(dòng)物。門源種馬場(chǎng)一牧戶飼養(yǎng)的體重、年齡相近的6只健康家兔。

2）試驗(yàn)用品。離心機(jī)1臺(tái)（配套試管6支），10 mL無菌注射器6支，5號(hào)靜脈注射針頭6套，足量酒精棉球，250mL生理鹽水。

1.2 方 法

無菌采集病死綿羊含內(nèi)容物的小腸100cm，封住兩端，備用；無菌采集健康綿羊含內(nèi)容物的小腸100cm，封住兩端，備用。

1）第1步試驗(yàn)。取備用病死綿羊的小腸內(nèi)容物10g，加40mL生理鹽水稀釋后，2 000r／min離心30min，取上清液，標(biāo)注為1號(hào)試劑；用同樣的方法將健康綿羊的小腸內(nèi)容物稀釋、離心后制成2號(hào)試劑。隨機(jī)取3只家兔，分別標(biāo)記為1、2、3號(hào)；1、2號(hào)家兔分別對(duì)應(yīng)靜脈注射1、2號(hào)試劑各5mL，3號(hào)家兔注射生理鹽水5mL，注射后讓3只家兔自由活動(dòng)，并觀察、計(jì)時(shí)。

2）第2步試驗(yàn)。取靜脈注射1號(hào)試劑致死的家兔的小腸內(nèi)容物10g，加40mL生理鹽水稀釋后，2 000r／min離心30min，取上清液，標(biāo)注為4號(hào)試劑。取4號(hào)試劑5mL靜脈注射于備用的任意1只家兔，標(biāo)為4號(hào)試驗(yàn)家兔，并觀察、計(jì)時(shí)。

2 結(jié)果與分析

第1步試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射37min后1號(hào)試驗(yàn)家兔興奮不安、狂奔幾下后突然死亡，2、3號(hào)試驗(yàn)家兔生理活動(dòng)正常。說明病死綿羊的小腸內(nèi)有使家兔致死的毒素。第2步試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射后12h內(nèi)，4號(hào)試驗(yàn)家兔生理活動(dòng)正常。說明致死的1號(hào)家兔小腸內(nèi)無毒素產(chǎn)生，致使1號(hào)家兔死亡的是病死綿羊小腸內(nèi)細(xì)菌的外毒素，而不是病菌感染。

綜合分析發(fā)現(xiàn)，引起該批綿羊死亡的原因是魏氏梭菌感染，由于條件限制未作毒素分型鑒定。確診為魏氏梭菌感染后，立即對(duì)全群綿羊進(jìn)行了羊梭菌多聯(lián)苗強(qiáng)化免疫，1周后再無綿羊發(fā)病。

3 討 論

應(yīng)在詳細(xì)的流行病學(xué)調(diào)查基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床癥狀和剖檢病變，初步診斷為魏氏梭菌感染后，用該試驗(yàn)進(jìn)行確診。應(yīng)充分考慮絳蟲毒素、食入性毒素等因素，以免影響試驗(yàn)結(jié)果。本試驗(yàn)成本低、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易購(gòu)、操作簡(jiǎn)便、器械易于籌備，適于在條件不好、載畜量大的偏遠(yuǎn)山區(qū)應(yīng)用。