嗜堿性粒細(xì)胞活化機(jī)制的研究進(jìn)展①

馮永民 綜述 潘慶軍 劉華鋒 審校

(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎臟疾病研究所，湛江524001)

嗜堿性粒細(xì)胞已被認(rèn)知130余年，特別是近年來(lái)隨著動(dòng)物敲除模型的建立、高純度細(xì)胞分選技術(shù)的應(yīng)用，以及單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展，對(duì)其表型和功能認(rèn)識(shí)更加的深入和全面，發(fā)現(xiàn)嗜堿性粒細(xì)胞不僅參與過(guò)敏反應(yīng)，而且在固有性免疫及免疫調(diào)節(jié)方面也發(fā)揮了重要作用［1］。已知，活化是嗜堿性粒細(xì)胞發(fā)揮其生物學(xué)功能的關(guān)鍵步驟，對(duì)其活化機(jī)制的研究，也已從經(jīng)典的IgE介導(dǎo)的活化，發(fā)展到多途徑的活化機(jī)制。本文謹(jǐn)對(duì)目前嗜堿性粒細(xì)胞的活化機(jī)制研究進(jìn)展作一綜述。

1 嗜堿性粒細(xì)胞的分化

外周循環(huán)或定植于組織的成熟嗜堿性粒細(xì)胞主要由骨髓CD34+的造血祖細(xì)胞分化而來(lái)。在轉(zhuǎn)錄水平其分化受兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子(C/EBPα and GATA2)的調(diào)控［2］，IL-3可調(diào)節(jié)這些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而影響嗜堿性粒細(xì)胞的早期生長(zhǎng)發(fā)育［3］。如IL-3缺陷在Th2免疫應(yīng)答中明顯導(dǎo)致嗜堿性粒細(xì)胞的分化受限，但嗜堿性粒細(xì)胞在IL-3缺陷幼稚小鼠中的分化與野生型小鼠并沒(méi)有差別［4，5］，說(shuō)明嗜堿性粒細(xì)胞在穩(wěn)態(tài)時(shí)的分化不依賴于IL-3，而在Th2相關(guān)炎癥反應(yīng)時(shí)，IL-3卻明顯促進(jìn)了骨髓中嗜堿性粒細(xì)胞的分化。

2 嗜堿性粒細(xì)胞的多種活化途徑

目前研究發(fā)現(xiàn)，嗜堿性粒細(xì)胞能被細(xì)胞因子、抗體、蛋白酶、Toll樣受體配體和補(bǔ)體介導(dǎo)的一系列信號(hào)所活化。其活化后，可產(chǎn)生各種效應(yīng)分子，包括組胺、白三烯和抗微生物肽，以及 IL-4、IL-5、IL-13和趨化因子等，此外還會(huì)表達(dá)活化相關(guān)膜標(biāo)記物，如CD203c 和 CD63 等［1］。

2.1 細(xì)胞因子介導(dǎo)的活化 IL-3不僅能促進(jìn)嗜堿性粒細(xì)胞的成熟和分化，而且能誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞分泌相應(yīng)的細(xì)胞因子和表達(dá)膜表面抗原分子。用IL-3處理嗜堿性粒細(xì)胞可明顯增加包括IL-4等細(xì)胞因子的產(chǎn)生［6，7］。此外，IL-3 處理能明顯上調(diào)人嗜堿性粒細(xì)胞膜表面抗原的表達(dá)，包括CD203c和ST2(IL-33 受體)等［8，9］。除 IL-3 外，目前較受關(guān)注的IL-1家族成員IL-18和IL-33同樣能活化和增強(qiáng)嗜堿性粒細(xì)胞的功能［9，10］。IL-18主要由巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞產(chǎn)生，能通過(guò)MyD88信號(hào)通路誘導(dǎo)小鼠骨髓來(lái)源的嗜堿性粒細(xì)胞分泌Th2型細(xì)胞因子［10］。然而，人嗜堿性粒細(xì)胞雖然表達(dá)IL-18受體，但I(xiàn)L-18并不能活化人嗜堿性粒細(xì)胞［9，11］。IL-33主要由表皮成纖維細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞和支氣管平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生，與IL-18類似，IL-33同樣可通過(guò)MyD88信號(hào)通路誘導(dǎo)小鼠骨髓來(lái)源的嗜堿性粒細(xì)胞分泌IL-4和IL-13［10］。此外，IL-33能誘導(dǎo)人外周血來(lái)源的嗜堿性粒細(xì)胞分泌 IL-4、IL-5、IL-6 和 IL-13［12］。作為IL-17家族成員的IL-25在Th2免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用［13］，可能也參與了嗜堿性粒細(xì)胞的活化［14］。來(lái)源于季節(jié)性過(guò)敏性鼻炎患者的嗜堿性粒細(xì)胞高表達(dá)IL-25受體(IL-17RB)，在IL-25作用下，嗜堿性粒細(xì)胞的凋亡減少和IgE介導(dǎo)的脫顆粒明顯增加［14］。

2.2 免疫球蛋白介導(dǎo)的活化 嗜堿性粒細(xì)胞通過(guò)IgE高親和力受體FcεRl與IgE-抗原復(fù)合物交聯(lián)，可激活一系列信號(hào)通路，包括信號(hào)分子Fyn、Syk、Lyn、PI3k和Akt等，共同誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞活化進(jìn)而釋放炎性介質(zhì)［15-17］。同時(shí)，活化后的嗜堿性粒細(xì)胞一系列表面分子表達(dá)上調(diào)，如CD203c、CD63和CD11b等［18-20］。最近在一個(gè) Th2主導(dǎo)狼瘡樣小鼠模型(Lyn-/-)中發(fā)現(xiàn):外周血中嗜堿性粒細(xì)胞能被自身反應(yīng)性 IgE 免疫復(fù)合物活化［21］。Tsujimura 等［22］報(bào)道，用三硝基苯酚-BSA(TNP-BSA)攻擊已用TNP特異性IgG1單抗預(yù)致敏的C57BL/6小鼠或肥大細(xì)胞缺失的 C57BL/6小鼠(C57BL/6-KitW-sh/W-sh)，可誘發(fā)顯著的過(guò)敏反應(yīng)，而IgG1單抗預(yù)致敏前清除嗜堿性粒細(xì)胞則可顯著抑制所誘發(fā)的過(guò)敏反應(yīng)。而用TNP特異性IgE單抗預(yù)致敏的C57BL/6小鼠，清除嗜堿性粒細(xì)胞對(duì)所誘發(fā)的過(guò)敏反應(yīng)無(wú)顯著影響。說(shuō)明清除嗜堿性粒細(xì)胞可影響IgG1介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)，而對(duì)IgE介導(dǎo)者無(wú)影響。同時(shí)，青霉素V-BSA(PenV-BSA)和其特異性IgG1單抗形成的復(fù)合物可體外活化脾臟來(lái)源的嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生PAF，說(shuō)明特異性IgG1也可介導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞的活化。此外，B細(xì)胞分化早期所產(chǎn)生另一類免疫球蛋白IgD，在上呼吸道感染時(shí)高表達(dá)于上呼吸道，可活化嗜堿性粒細(xì)胞進(jìn)而產(chǎn)生廣譜的抗微生物肽［23］，說(shuō)明IgD介導(dǎo)的嗜堿性粒細(xì)胞活化在上呼吸道感染中可能發(fā)揮潛在抗感染作用。但有趣的是，IgD介導(dǎo)的嗜堿性粒細(xì)胞活化并不影響組胺的釋放［23］，提示IgD介導(dǎo)其活化不同于IgE。此外，IgD介導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞活化后可產(chǎn)生IL-4和B細(xì)胞刺激因子等，而且活化的嗜堿性粒細(xì)胞可促使B淋巴細(xì)胞分泌免疫球蛋白IgM、IgD和IgA［23］。至于在機(jī)體內(nèi)哪一類免疫球蛋白介導(dǎo)活化為主，可能與致病原種類、數(shù)量和產(chǎn)生的特異性抗體有關(guān)。

2.3 蛋白酶和糖蛋白類介導(dǎo)的活化 房塵螨抗原Der p1是一種活化的蛋白酶，能在缺乏抗原特異性IgE情況下直接誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞系KU812細(xì)胞和純化的人嗜堿性粒細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13。而使用蛋白酶抑制劑作用于Derp1后，卻明顯消除了上述抗原對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞的活化作用［24］。此外，鉤蟲所分泌的蛋白酶被證實(shí)同樣能誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞分泌Th2型細(xì)胞因子［24］。已知，蛋白酶活化受體(PARs)是一類潛在受體家族，它能夠感知蛋白酶類活性，能夠活化固有和獲得性免疫細(xì)胞［25］。然而，目前并沒(méi)有證據(jù)表明人類或小鼠嗜堿性粒細(xì)胞表達(dá)所謂的PARs［26］。因此，蛋白酶類直接活化嗜堿性粒細(xì)胞可能由于嗜堿性粒細(xì)胞表達(dá)其它類似于PARs的受體，或是通過(guò)別的分子機(jī)制。

另外，當(dāng)HIV感染機(jī)體后，gp120通過(guò)結(jié)合免疫球蛋白IgE的VH3區(qū)而活化嗜堿性粒細(xì)胞，并釋放IL-4和IL-13［27］，而且血吸蟲來(lái)源的糖蛋白IPSE/alpa-1同樣不依賴于抗原特異性的方式誘導(dǎo)小鼠嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生 IL-4［28］。

2.4 模式識(shí)別受體介導(dǎo)的活化 已知人嗜堿性粒細(xì)胞表達(dá)一系列 Toll like receptor(TLR)，包括TLR2、TLR4、TLR9 和 TLR10，其中顯著表達(dá) TLR2和 TLR4［29，30］，提示嗜堿性粒細(xì)胞能夠直接識(shí)別各種病原體產(chǎn)生的病原相關(guān)分子模式。如TLR2配體肽聚糖能在體外刺激嗜堿性粒細(xì)胞分泌IL-4和IL-13，而 TLR4配體卻對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞作用不明顯［30，31］。而日本學(xué)者分別用 TLR2和 TLR4配體處理潰瘍性結(jié)腸炎患者來(lái)源的嗜堿性粒細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)兩種處理后的嗜堿性粒細(xì)胞均能分泌大量的IL-4。可見(jiàn)TLR2和TLR4均可能介導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞的活化。

此外，嗜堿性粒細(xì)胞也表達(dá)一系列補(bǔ)體受體，包括CR1、CR2和CR3等。研究表明，補(bǔ)體片段 C5a能誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞釋放組胺，而此作用并不依賴于 IgE 的介導(dǎo)［32］。

3 嗜堿性粒細(xì)胞活化的檢測(cè)方法

嗜堿性粒細(xì)胞的活化表現(xiàn)為組胺、白三烯、細(xì)胞因子等活性介質(zhì)的釋放以及相應(yīng)膜抗原的表達(dá)上調(diào)［1］。目前檢測(cè)其活化的方法包括ELISA和生化法檢測(cè)組胺和相應(yīng)細(xì)胞因子的釋放量以及應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面膜抗原免疫學(xué)標(biāo)記物，其中流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用更加廣泛［33，34］。既往CD63被廣泛用于嗜堿性粒細(xì)胞活化檢測(cè)，但現(xiàn)發(fā)現(xiàn)CD63不是嗜堿性粒細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，也不是流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的敏感參數(shù)指標(biāo)［19，35］。目前的研究表明，CD203c是嗜堿性粒細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，而且是一個(gè)敏感的活化指標(biāo)［20，36］。此外，流式細(xì)胞術(shù)不但可定性檢測(cè)CD203c陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量，而且同時(shí)可定量檢測(cè)CD203c的平均熒光強(qiáng)度。因此，常用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD203c的表達(dá)水平來(lái)評(píng)估嗜堿性粒細(xì)胞的活化程度。

4 目前嗜堿性粒細(xì)胞研究的局限性

4.1 外周嗜堿性粒細(xì)胞的純化 目前公認(rèn)的嗜堿性粒細(xì)胞純化技術(shù)包括應(yīng)用特異性單克隆抗體選擇性標(biāo)記目的細(xì)胞群的免疫磁珠負(fù)選(或正選)和流式細(xì)胞分選術(shù)［37-39］。但遺憾的是，雖然上述嗜堿性粒細(xì)胞分離純度高達(dá)95%以上，但獲取率僅有60%左右［39，40］，必然需要大量的樣本，這對(duì)以患者為對(duì)象的研究帶來(lái)極大的困擾，而且上述純化技術(shù)費(fèi)用昂貴。

4.2 嗜堿性粒細(xì)胞細(xì)胞系 部分研究使用了細(xì)胞系KU812或KU812F作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。KU812細(xì)胞是從慢性髓性白血病患者體內(nèi)獲取建立起來(lái)的一種未成熟的嗜堿性粒細(xì)胞前體細(xì)胞。Masuko等［41］對(duì)KU812F細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色(一種嗜堿性顆粒的特殊染色)后，發(fā)現(xiàn)大約30%KU812F細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)異染顆粒，而用IL-3(20 ng/ml)作用3天后，呈現(xiàn)異染顆粒的 KU812F細(xì)胞增加至46%，這表明IL-3能誘導(dǎo)KU812F細(xì)胞分化成熟為嗜堿性粒細(xì)胞樣細(xì)胞。另有報(bào)道，細(xì)胞因子IL-4、TNF-α及IL-6等能誘導(dǎo)KU812細(xì)胞部分呈成熟嗜堿性粒細(xì)胞表型［42，43］。同時(shí)，部分學(xué)者直接使用未經(jīng) IL-3誘導(dǎo)的KU812細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象研究藥物對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞活性的影響，結(jié)果顯示KU812細(xì)胞和人純化嗜堿性粒細(xì)胞受該藥物作用效應(yīng)類似［44］。但未經(jīng)誘導(dǎo)的KU812細(xì)胞形態(tài)及功能與人成熟嗜堿性粒細(xì)胞差異較大，而且未誘導(dǎo)成熟的KU812細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響無(wú)法評(píng)估。因此，用細(xì)胞系 KU812/KU812F作為嗜堿性粒細(xì)胞研究對(duì)象仍需要進(jìn)一步的斟酌和反復(fù)的驗(yàn)證。

Reimer等［40］用IL-3作用來(lái)源于人臍帶血的白細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)嗜堿性粒細(xì)胞前體細(xì)胞FcεR1和CD203c的表達(dá)上調(diào)，但在臍帶血培養(yǎng)的早期，卻發(fā)現(xiàn)約60%CD203c陽(yáng)性細(xì)胞也表達(dá)HLA-DR，而HLADR在正常成熟嗜堿性粒細(xì)胞無(wú)表達(dá)。這表明IL-3雖可誘導(dǎo)人臍帶血細(xì)胞分化成熟為嗜堿性粒細(xì)胞，但是由于HLA-DR陽(yáng)性的前體細(xì)胞沒(méi)有得到有效的分離純化而導(dǎo)致嗜堿性粒細(xì)胞的獲得率僅24%左右。

此外，小鼠骨髓細(xì)胞在IL-3作用下培養(yǎng)9～10天可分化為表達(dá)DX5+的成熟嗜堿性粒細(xì)胞，但同樣需要昂貴的免疫磁珠正(負(fù))選分離純化技術(shù)［45，46］。

5 小結(jié)

近年對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞的研究已經(jīng)取得了令人矚目的新進(jìn)展，Karasuyama等［47］撰文稱嗜堿性粒細(xì)胞為“一個(gè)被忽視的小群體重新贏得了尊重”，而嗜堿性粒細(xì)胞的活化是研究其生物學(xué)功能的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。除免疫球蛋白IgE可介導(dǎo)其活化外，非IgE途徑包括IgG1、IgD、細(xì)胞因子以及TLR等介導(dǎo)其活化的途徑也越來(lái)越得到更多的關(guān)注和認(rèn)可。闡明嗜堿性粒細(xì)胞的活化機(jī)制，有助于對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞參與的相關(guān)疾病如變應(yīng)性炎癥和自身免疫疾病等的機(jī)理研究和防治提供新的治療靶點(diǎn)。同時(shí)，尋求更經(jīng)濟(jì)和可靠的原代嗜堿性粒細(xì)胞和細(xì)胞系的獲取手段勢(shì)在必行。

1 Chirumbolo S.State-of-the-art review about basophil research in immunology and allergy:is the time right to treat these cells with the respect they deserve?［J］.Blood Transfus，2012;10(2):148-164.

2 Ohmori K，Luo Y，Jia Y et al.IL-3 induces basophil expansion in vivo by directing granulocyte-monocyte progenitors to differentiate into basophil lineage-restricted progenitors in the bone marrow and by increasing the number of basophil/mast cell progenitors in the spleen［J］.J Immunol，2009;182(5):2835-2841.

3 Arinobu Y，Iwasaki H，Akashi K.Origin of basophils and mast cells［J］.Allergol Int，2009;58(1):21-28.

4 Shen T，Kim S，Do J S et al.T cell-derived IL-3 plays key role in parasite infection-induced basophil production but is dispensable for in vivo basophil survival［J］.Int Immunol，2008;20(9):1201-1209.

5 Lantz C S，Boesiger J，Song C H et al.Role for interleukin-3 in mast-cell and basophil development and in immunity to parasites［J］.Nature，1998;392(6671):90-93.

6 Lantz C S，Min B，Tsai M et al.IL-3 is required for increases in blood basophils in nematode infection in mice and can enhance IgE-dependent IL-4 production by basophils in vitro［J］.Lab Invest，2008;88(11):1134-1142.

7 Hida S，Yamasaki S，Sakamoto Y et al.Fc receptor gamma-chain，a constitutive component of the IL-3 receptor，is required for IL-3-induced IL-4 production in basophils［J］.Nat Immunol，2009;10(2):214-222.

8 Hauswirth A W，Sonneck K，F(xiàn)lorian S et al.Interleukin-3 promotes the expression of E-NPP3/CD203C on human blood basophils in healthy subjects and in patients with birch pollen allergy［J］.Int J Immunopathol Pharmacol，2007;20(2):267-278.

9 Pecaric-Petkovic T，Didichenko S A，Kaempfer S et al.Human basophils and eosinophils are the direct target leukocytes of the novel IL-1 family member IL-33［J］.Blood，2009;113(7):1526-1534.

10 Kroeger K M，Sullivan B M，Locksley R M.IL-18 and IL-33 elicit Th2 cytokines from basophils via a MyD88-and p38alpha-dependent pathway［J］.J Leukoc Biol，2009;86(4):769-778.

11 Florian S，Sonneck K，Czerny M et al.Detection of novel leukocyte differentiation antigens on basophils and mast cells by HLDA8 antibodies［J］.Allergy，2006;61(9):1054-1062.

12 Smithgall M D，Comeau M R，Yoon B R et al.IL-33 amplifies both Th1-and Th2-type responses through its activity on human basophils，allergen-reactive Th2 cells，iNKT and NK cells［J］.Int Immunol，2008;20(8):1019-1030.

13 Fort M M，Cheung J，Yen D et al.IL-25 induces IL-4，IL-5，and IL-13 and Th2-associated pathologies in vivo［J］.Immunity，2001;15(6):985-995.

14 Wang H，Mobini R，F(xiàn)ang Y et al.Allergen challenge of peripheral blood mononuclear cells from patients with seasonal allergic rhinitis increases IL-17RB，which regulates basophil apoptosis and degranulation［J］.Clin Exp Allergy，2010;40(8):1194-1202.

15 MacGlashan D，Jr.IgE receptor and signal transduction in mast cells and basophils［J］.Curr Opin Immunol，2008;20(6):717-723.

16 MacGlashan D W，Jr.Self-termination/anergic mechanisms in human basophils and mast cells［J］.Int Arch Allergy Immunol，2009;150(2):109-121.

17 Gilfillan A M，Peavy R D，Metcalfe D D.Amplification mechanisms for the enhancement of antigen-mediated mast cell activation［J］.Immunol Res，2009;43(1-3):15-24.

18 Sonneck K，Baumgartner C，Rebuzzi L et al.Recombinant allergens promote expression of aminopeptidase-n(CD13)on basophils in allergic patients［J］.Int J Immunopathol Pharmacol，2008;21(1):11-21.

19 Chirumbolo S，Vella A，Ortolani R et al.Differential response of human basophil activation markers:a multi-parameter flow cytometry approach［J］.Clin Mol Allergy，2008;6:12.

20 Buhring H J，Streble A，Valent P.The basophil-specific ectoenzyme E-NPP3(CD203c)as a marker for cell activation and allergy diagnosis［J］.Int Arch Allergy Immunol，2004;133(4):317-329.

21 Charles N，Hardwick D，Daugas E et al.Basophils and the T helper 2 environment can promote the development of lupus nephritis［J］.Nat Med，2010;16(6):701-707.

22 Tsujimura Y，Obata K，Mukai K et al.Basophils play a pivotal role in immunoglobulin-G-mediated but not immunoglobulin-E-mediated systemic anaphylaxis［J］.Immunity，2008;28(4):581-589.

23 Chen K，Xu W，Wilson M et al.Immunoglobulin D enhances immune surveillance by activating antimicrobial，proinflammatory and B cell-stimulating programs in basophils［J］.Nat Immunol，2009;10(8):889-898.

24 Phillips C，Coward W R，Pritchard D I et al.Basophils express a type 2 cytokine profile on exposure to proteases from helminths and house dust mites［J］.J Leukoc Biol，2003;73(1):165-171.

25 Shpacovitch V，F(xiàn)eld M，Hollenberg M D et al.Role of protease-activated receptors in inflammatory responses，innate and adaptive immunity［J］.J Leukoc Biol，2008;83(6):1309-1322.

26 Falcone F H，Morroll S，Gibbs B F.Lack of protease activated receptor(PAR)expression in purified human basophils［J］.Inflamm Res，2005;54(Suppl 1):S13-S14.

27 Patella V，F(xiàn)lorio G，Petraroli A et al.HIV-1 gp120 induces IL-4 and IL-13 release from human Fc epsilon RI+cells through interaction with the VH3 region of IgE［J］.J Immunol，2000;164(2):589-595.

28 Schramm G，Mohrs K，Wodrich M et al.Cutting edge:IPSE/alpha-1，a glycoprotein from Schistosoma mansoni eggs，induces IgE-dependent，antigen-independent IL-4 production by murine basophils in vivo［J］.J Immunol，2007;178(10):6023-6027.

29 Komiya A，Nagase H，Okugawa S et al.Expression and function of toll-like receptors in human basophils［J］.Int Arch Allergy Immunol，2006;140 Suppl 1:23-27.

30 Sabroe I，Jones E C，Usher L R et al.Toll-like receptor(TLR)2 and TLR4 in human peripheral blood granulocytes:a critical role for monocytes in leukocyte lipopolysaccharide responses［J］.J Immunol，2002;168(9):4701-4710.

31 Bieneman A P，Chichester K L，Chen Y H et al.Toll-like receptor 2 ligands activate human basophils for both IgE-dependent and IgE-independent secretion［J］.J Allergy Clin Immunol，2005;115(2):295-301.

32 Siraganian R P，Hook W A.Complement-induced histamine release from human basophils.II.Mechanism of the histamine release reaction［J］.J Immunol，1976;116(3):639-646.

33 Verweij M M，De Knop K J，Bridts C H et al.P38 mitogen-activated protein kinase signal transduction in the diagnosis and follow up of immunotherapy of wasp venom allergy［J］.Cytometry B Clin Cytom，2010;78(5):302-307.

34 Wedi B，Kapp A.Cellular in-vitro assays.Applicability in daily routine［J］.Hautarzt，2010;61(11):954-960.

35 Sanz M L，Sanchez G，Gamboa P M et al.Allergen-induced basophil activation:CD63 cell expression detected by flow cytometry in patients allergic to dermatophagoides pteronyssinus and Lolium perenne［J］.Clin Exp Allergy，2001;31(7):1007-1013.

36 Hauswirth A W，Natter S，Ghannadan M et al.Recombinant allergens promote expression of CD203c on basophils in sensitized individuals［J］.J Allergy Clin Immunol，2002;110(1):102-109.

37 Metcalfe D D.Isolation of human basophils［J］.Curr Protoc Immunol，2001;7:7-24.

38 Gibbs B F，Papenfuss K，F(xiàn)alcone F H.A comparison of procedures for purifying human basophils to near homogeneity［J］.Inflamm Res，2008;57(Suppl 1):S11-S12.

39 Yang L，Xu WG，Xu Y P et al.Method for umbilical cord bloodderived basophils by FCM［J］.Hybridoma(Larchmt)，2010;29(4):367-370.

40 Reimer J M，Magnusson S，Juremalm M et al.Isolation of transcriptionally active umbilical cord blood-derived basophils expressing Fc epsilon RI，HLA-DR and CD203c［J］.Allergy，2006;61(9):1063-1070.

41 Masuko M，Koike T，Toba K et al.Expression of eosinophil peroxidase in the immature basophil cell line KU812-F［J］.Leuk Res，1999;23(2):99-104.

42 Nilsson G，Carlsson M，Jones I et al.TNF-alpha and IL-6 induce differentiation in the human basophilic leukaemia cell line KU812［J］.Immunology，1994;81(1):73-78.

43 Hara T，Yamada K，Tachibana H.Basophilic differentiation of the human leukemia cell line KU812 upon treatment with interleukin-4［J］.Biochem Biophys Res Commun，1998;247(3):542-548.

44 Blatt K，Herrmann H，Mirkina I et al.The PI3-kinase/mTOR-targeting drug NVP-BEZ235 inhibits growth and IgE-dependent activation of human mast cells and basophils［J］.PLoS One，2012;7(1):e29925.

45 Tawara I，Nieves E，Liu C et al.Host basophils are dispensable for induction of donor T helper 2 cell differentiation and severity of experimental graft-versus-host disease［J］.Biol Blood Marrow Transplant，2011;17(12):1747-1753.

46 Sokol C L，Chu N Q，Yu S et al.Basophils function as antigenpresenting cells for an allergen-induced T helper type 2 response［J］.Nat Immunol，2009;10(7):713-720.

47 Karasuyama H，Mukai K，Tsujimura Y et al.Newly discovered roles for basophils:a neglected minority gains new respect［J］.Nat Rev Immunol，2009;9(1):9-13.