李俊青 李純 劉希 王晶 孫建寧

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102）

慢性萎縮性胃炎（CAG）在臨床上多見，發(fā)病率高。早在19世紀(jì)中期人們已經(jīng)對(duì)慢性萎縮性胃炎有了一定的認(rèn)識(shí)，直到20世紀(jì)80年代初幽門螺旋桿菌的發(fā)現(xiàn)，CAG的致病機(jī)制和治療方法才有了質(zhì)的飛躍[1-2]，但到目前為止仍無(wú)法達(dá)到滿意的效果。近年來中醫(yī)藥對(duì)CAG的基礎(chǔ)研究及臨床治療探索取得了明顯的成果[3-4]。本實(shí)驗(yàn)采用N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）負(fù)荷多因素造成大鼠CAG模型，探討中藥復(fù)方參七消痞顆粒（SQ）對(duì)慢性萎縮性胃炎模型大鼠胃黏膜病變的改善作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)Wistar大鼠220只，雌雄各半，體重160～180g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2006-0009。

1.2 主要試劑 MNNG為日本TCI公司產(chǎn)品，購(gòu)于北京化學(xué)試劑公司；鹽酸雷尼替丁膠囊，中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：100902256；無(wú)水乙醇，購(gòu)于北京化工廠，批號(hào)：20100901；中藥復(fù)方參七消痞顆粒，亞寶北中大（北京）制藥有限公司生產(chǎn)，復(fù)方組成：黨參、百合、丹參、白花蛇舌草、香櫞、烏藥、三七、半枝蓮、莪術(shù)（1∶3∶2∶3∶1∶1∶0.3∶2∶0.5）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物模型的建立 以化學(xué)致癌劑MNNG作為工具藥造模，模擬人不當(dāng)攝入硝酸鹽在胃內(nèi)轉(zhuǎn)化為亞硝酸胺等致癌物質(zhì)，作用于胃黏膜，通過損傷DNA誘發(fā)脂質(zhì)過氧化或?qū)е轮|(zhì)過氧化，引起胃黏膜細(xì)胞突變和破壞，造成胃黏膜萎縮病變，甚至癌變；同時(shí)輔助灌胃雷尼替丁溶液，抑制大鼠胃酸分泌，加上每周1次高濃度酒精刺激及饑飽失常，共同作用于大鼠，造成大鼠慢性萎縮性胃炎模型。具體造模方法參考岳雙冰等[5]的方法并加以改進(jìn)。大鼠按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組和CAG模型組，模型組大鼠每日飲用120μg/mL MNNG溶液，每日灌胃雷尼替丁溶液0.03g/kg大鼠體重，每周禁食1次，每次16h，禁食第2天灌胃體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇1mL/只，當(dāng)天不再灌胃雷尼替丁溶液，連續(xù)14周。MNNG用去離子水配成1g/L的儲(chǔ)備液，于4℃冰箱避光保存，用前以自來水稀釋為120μg/mL濃度的溶液，裝入用黑膠布包裹的避光飲水瓶?jī)?nèi)供模型組大鼠自由飲用，每日更換。

2.2 動(dòng)物分組及給藥干預(yù) 第15周開始模型組動(dòng)物停止造模，隨機(jī)分為 CAG模型組、摩羅丹組（MLD）、葉酸組（YS）和參七消痞顆粒低（2g/kg）、中（4g/kg）、高（8g/kg）劑量組。正常對(duì)照組和CAG模型組每日灌胃蒸餾水，其他各組灌胃給予相應(yīng)藥物1mL/100g大鼠體重，給藥8周。第22周即大鼠給藥8周后取材。

2.3 取材及指標(biāo)觀測(cè) 第22周所有大鼠禁食16h，不禁水，10%水合氯醛麻醉，打開腹腔，腹主動(dòng)脈取血，分離血漿、血清，-80℃保存，放免法檢測(cè)血漿膽囊收縮素（CCK）和血清表皮生長(zhǎng)因子（EGF）；取胃，沿胃大彎剪開，除去胃內(nèi)容物，生理鹽水沖洗干凈，展開照相，大體觀察；胃竇部橫向條狀取材，用10%中性福爾馬林液固定，HE染色做病理檢查。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均采用（）表示，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 大鼠胃黏膜大體觀察 與正常對(duì)照組相比，CAG模型組大鼠胃內(nèi)容物惡臭，胃黏膜蒼白，胃壁較薄，胃黏膜皺襞走向紊亂，部分區(qū)域皺襞變淺或消失，部分見出血點(diǎn)等。SQ各給藥組大鼠均有不同程度的改善，胃壁較厚，彈性較好，胃黏膜皺襞較多。見圖1。

3.2 大鼠胃組織病理結(jié)果 大鼠HE切片鏡下觀察：正常對(duì)照組大鼠胃黏膜正常，偶見少量炎性細(xì)胞，屬于正?，F(xiàn)象；CAG模型組大鼠胃黏膜見不同程度的萎縮，固有層腺體減少，排列不規(guī)則，間隙較大，腸上皮化生，少數(shù)見異型增生，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。各給藥組與CAG模型組相比，病理結(jié)果均有不同程度的改善。見圖2。

3.3 大鼠胃黏膜厚度/黏膜肌層厚度值 大鼠病理組織鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，MNNG致大鼠CAG病理改變主要出現(xiàn)在胃竇區(qū)的褶皺處，且不同部位的L1/L2值差異懸殊，故在統(tǒng)計(jì)大鼠胃黏膜厚度/黏膜肌層厚度值時(shí)應(yīng)挑選有胃竇區(qū)褶皺的HE切片的比值。結(jié)果參七消痞顆粒3個(gè)劑量均能不同程度地改善胃萎縮病變，提高大鼠胃竇區(qū)褶皺處的胃黏膜厚度/黏膜肌層厚度（P＜0.05，P＜0.01）。見表 1。

3.4 大鼠CCK、EGF水平 膽囊收縮素能促進(jìn)膽囊收縮，在調(diào)節(jié)協(xié)調(diào)胃腸活動(dòng)方面起多種作用，促進(jìn)胰腺腺泡分泌各種消化酶。CAG模型組大鼠CCK明顯下降，提示其胃腸活動(dòng)功能下降明顯；參七消痞顆粒低、中劑量能顯著提高模型大鼠CCK的含量，與CAG模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）。消化表皮生長(zhǎng)因子是一種多功能的生長(zhǎng)因子，在體內(nèi)體外都對(duì)多種組織細(xì)胞有強(qiáng)烈的促分裂作用，同時(shí)能通過多種機(jī)制對(duì)胃黏膜起到保護(hù)作用，如抑制胃酸分泌，增強(qiáng)胃黏膜黏液的分泌，增加胃黏膜血流量等。CAG模型組與正常對(duì)照組相比，血清EGF水平顯著偏低（P＜0.01），而參七消痞顆粒低、中劑量能顯著提高大鼠血清EGF水平，與CAG模型組相比具有顯著性差異（P＜0.01）。見表 2。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)建立了MNNG負(fù)荷多因素致大鼠慢性萎縮性胃炎模型，主要病理改變出現(xiàn)在胃竇區(qū)褶皺處，大鼠胃黏膜萎縮，固有層腺體減少，排列不規(guī)則，間隙較大，有腸上皮化生和異型增生，動(dòng)物成模率高，成模時(shí)間較短，適合用于實(shí)驗(yàn)研究。

表1 各組大鼠胃黏膜、黏膜肌層厚度與比值（）

表1 各組大鼠胃黏膜、黏膜肌層厚度與比值（）

注：與正常對(duì)照組比較，△△P＜0.01；與 CAG 模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

表2 各組大鼠 CCK、EGF水平（）

表2 各組大鼠 CCK、EGF水平（）

注：與正常對(duì)照組比較，△△P＜0.01；與CAG模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

慢性萎縮性胃炎臨床診斷以黏膜固有腺體萎縮甚至消失，黏膜肌層常見增厚為主要病理改變。有文獻(xiàn)報(bào)道采用胃黏膜厚度/黏膜肌層厚度值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)[6-7]。本實(shí)驗(yàn)觀察了大鼠胃竇區(qū)褶皺處的胃黏膜厚度/黏膜肌層厚度值（L1/L2），觀測(cè)位置固定，病理改變明顯，測(cè)量數(shù)值穩(wěn)定可靠，結(jié)果客觀。

中藥復(fù)方參七消痞顆粒是中國(guó)工程院院士董建華教授的經(jīng)驗(yàn)方，為東方醫(yī)院院內(nèi)制劑，臨床用于治療慢性萎縮性胃炎，效果明顯。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大鼠14周造成胃萎縮胃炎模型，停止造模8周，CAG模型組大鼠胃萎縮病變無(wú)明顯恢復(fù)。停止造模給藥8周，參七消痞顆粒低、中、高三個(gè)劑量均可不同程度地改善胃萎縮病變，提高大鼠胃竇區(qū)褶皺處的胃黏膜厚度/黏膜肌層厚度值，顯示SQ有良好的治療萎縮性胃炎的作用。進(jìn)一步用放免法檢測(cè)大鼠血漿中的CCK和血清EGF，發(fā)現(xiàn)CAG模型組大鼠CCK和EGF下降明顯，而參七消痞顆粒能顯著升高模型大鼠血液中的CCK和EGF水平，提示參七消痞顆粒對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜的保護(hù)改善作用，可能通過提高胃腸活動(dòng)功能，增強(qiáng)胃黏膜黏液的分泌，增加胃黏膜血流量，增強(qiáng)胃黏膜保護(hù)作用。

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[2]Melanie N.Weck，Hermann Brenner.Association of Helicobacter pylori infection with chronic atrophic gastritis：Meta-analyses according to type of disease definition.Int.J.Cancer，2008，123：874

[3]楊維佳，俞佳.慢性萎縮性胃炎中醫(yī)辨證分型及其治療近況.江蘇中醫(yī)藥，2009，40（5）：73

[4]吳曉燕，朱方石，王偉.中醫(yī)藥治療慢性萎縮性胃炎臨床研究進(jìn)展.江蘇中醫(yī)藥，2009，41（6）：81

[5]岳雙冰，張仲海，馬經(jīng)野，等.大鼠慢性萎縮性胃炎癌前病變血瘀積證模型的研制.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2009，17（2）：123

[6]徐妙，姒健敏，王海云.云母對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎的預(yù)防作用及機(jī)制研究.中國(guó)病理生理雜志，2007，23（4）：749

[7]袁慶豐，姒健敏，周雯，等.表皮生長(zhǎng)因子對(duì)萎縮性胃炎大鼠胃黏膜上皮增生的影響.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2009，14（2）：136